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Práctica 8: Control Microbiano con Agentes Físicos y Químicos, Diapositivas de Biología

Una práctica laboratorio sobre el control microbiano utilizando agentes físicos y químicos. Se explica la importancia de los factores ambientales en el crecimiento de microorganismos y cómo se pueden utilizar para su control, especialmente en el caso de patógenos. Se detallan los efectos de radiación ultravioleta, temperatura, pH y diferentes agentes químicos sobre la integridad celular y el crecimiento de bacterias. Se incluyen procedimientos para observar el efecto de la temperatura y los metales, cloro, álcalis y ácidos sobre el crecimiento de bacterias.

Tipo: Diapositivas

2020/2021

Subido el 18/11/2021

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felicia-perez 🇵🇦

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PRACTICA 8.
CONTROL BACTERIANO
AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS
INTRODUCCIÓN
Para obtener el crecimiento óptimo de los microorganismos, no sólo son indispensables los
requerimientos nutricionales, sino otros factores ambientales tanto físicos como químicos.
Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa un cambio. La humedad,
la temperatura, la presión osmótica, el pH, las radiaciones y los filtros son ejemplos de
agentes físicos. El crecimiento de los microorganismos se modifica al cambiar los factores
ambientales.
El conocimiento de los factores físicos o ambientales nos permite explicar la distribución de
los organismos en la naturaleza; por otro lado, el conocimiento de los factores limitantes del
crecimiento microbiano, se puede utilizar para su control, sobretodo en el caso de
microorganismos que son patógenos, que causan deterioro en los alimentos o que dan lugar
a pérdidas económicas en diferentes formas.
Muchas prácticas de la vida cotidiana como la potabilización del agua, la pasteurización de
la leche o la refrigeración de los alimentos, tienen por objeto controlar a las poblaciones
microbianas. Este control tiene varias razones como prevenir la transmisión de
enfermedades, evitar la contaminación de algunos productos y evitar la contaminación
(Alimentaria, ambiental, etc.)
Por lo tanto, el conocimiento del efecto de los agentes físicos o químicos sobre los
microorganismos, nos permite tener un control para obtener un crecimiento óptimo o para
minimizar o eliminar su crecimiento.
AGENTES FÍSICOS
1. Radiación ultravioleta: La mayoría de los microorganismos mueren bajo grandes
dosis de radiación electromagnética, especialmente en la zona ultravioleta (UV),
ondas ultrasónicas de muy alta frecuencia y con pequeñas dosis de radiación
ionizante, como los rayos gamma y rayos catódicos. La muerte se presenta por los
daños causados al DNA y la variación en la resistencia, normalmente reflejada en las
diferentes facultades de las células para reparar el DNA dañado por la radiación.
2. Temperatura: Muchas células son sensibles al calor húmedo, después de la
exposición por algunos minutos a una temperatura más elevada que su máxima de
crecimiento. La proporción de células muertas depende del tiempo de exposición y la
temperatura. El calor mata causando la desnaturalización de las macromoléculas
como las proteínas, la muerte bacteriana es proporcional al grado de coagulación
provocado por el calor húmedo. La destrucción efectiva por temperaturas bajas rara
vez ocurre. La causa del daño celular durante el congelamiento no es muy conocida,
pero se sabe que la concentración de solutos durante el congelamiento rompe las
membranas y causa la lisis durante el deshielo.
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PRACTICA 8.

CONTROL BACTERIANO

AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

INTRODUCCIÓN

Para obtener el crecimiento óptimo de los microorganismos, no sólo son indispensables los requerimientos nutricionales, sino otros factores ambientales tanto físicos como químicos. Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa un cambio. La humedad, la temperatura, la presión osmótica, el pH, las radiaciones y los filtros son ejemplos de agentes físicos. El crecimiento de los microorganismos se modifica al cambiar los factores ambientales. El conocimiento de los factores físicos o ambientales nos permite explicar la distribución de los organismos en la naturaleza; por otro lado, el conocimiento de los factores limitantes del crecimiento microbiano, se puede utilizar para su control, sobretodo en el caso de microorganismos que son patógenos, que causan deterioro en los alimentos o que dan lugar a pérdidas económicas en diferentes formas. Muchas prácticas de la vida cotidiana como la potabilización del agua, la pasteurización de la leche o la refrigeración de los alimentos, tienen por objeto controlar a las poblaciones microbianas. Este control tiene varias razones como prevenir la transmisión de enfermedades, evitar la contaminación de algunos productos y evitar la contaminación (Alimentaria, ambiental, etc.) Por lo tanto, el conocimiento del efecto de los agentes físicos o químicos sobre los microorganismos, nos permite tener un control para obtener un crecimiento óptimo o para minimizar o eliminar su crecimiento. AGENTES FÍSICOS

1. Radiación ultravioleta: La mayoría de los microorganismos mueren bajo grandes dosis de radiación electromagnética, especialmente en la zona ultravioleta (UV), ondas ultrasónicas de muy alta frecuencia y con pequeñas dosis de radiación ionizante, como los rayos gamma y rayos catódicos. La muerte se presenta por los daños causados al DNA y la variación en la resistencia, normalmente reflejada en las diferentes facultades de las células para reparar el DNA dañado por la radiación. 2. Temperatura: Muchas células son sensibles al calor húmedo, después de la exposición por algunos minutos a una temperatura más elevada que su máxima de crecimiento. La proporción de células muertas depende del tiempo de exposición y la temperatura. El calor mata causando la desnaturalización de las macromoléculas como las proteínas, la muerte bacteriana es proporcional al grado de coagulación provocado por el calor húmedo. La destrucción efectiva por temperaturas bajas rara vez ocurre. La causa del daño celular durante el congelamiento no es muy conocida, pero se sabe que la concentración de solutos durante el congelamiento rompe las membranas y causa la lisis durante el deshielo.

3. El pH: La concentración de hidrogeniones, es otro de los factores determinantes en el crecimiento y supervivencia de los microorganismos. La tolerancia de los microorganismos a cambios de pH es limitada, ya que cambios muy bruscos producen la muerte celular. Las variaciones del pH en un medio de cultivo pueden dañar la integridad celular desde diferentes aspectos:

  1. Alterando la estabilidad de la membrana plasmática
  2. Afectando el intercambio de hidrogeniones a través de la membrana
  3. Alterando el pH interno de la célula (pH:5.5)
  4. Cambiando la ionización de las moléculas
  5. Inhibiendo la actividad enzimática y las proteínas de transporte Cada especie de microorganismo posee un rango determinado de pH y un pH optimo para su crecimiento. Según el pH optimo para su crecimiento las bacterias pueden ser: Acidofilos : Rango aproximado de 0 – 5.5 ( Thiobacillus, Sulfolobus ). Estos microorganismos necesitan altas concentraciones de H+ para mantener la integridad de sus membranas, pH alcalinos dichas membranas se desintegrarían. Neutrofilos : Rango aproximado de 5.8 – 8.0 (La mayoría de las bacterias) Alcalofilos : Rango aproximado de 8.5 – 11.5 ( Bacillus alcalophylus ) LOS AGENTES QUÍMICOS Desinfectantes: Los desinfectantes son generalmente agentes químicos que matan a las bacterias y otros microorganismos presentes en diferentes superficies, por lo general inertes. Antisépticos: Agente químico aplicado sobre tejido vivo que inhibe o elimina microorganismos. Dentro de estos tenemos:
  6. Ácidos y álcalis: Tanto los ácidos y álcalis son muy bactericidas dado su grado de disociación. Entre estos se puede mencionar KOH, NaOH, HNO 3 y H 2 SO 4.
  7. Agentes oxidantes: Entre éstos tenemos el cloro, el peróxido de hidrógeno, perborato de sodio, permanganato de potasio y cloruro de calcio. Los cuales actúan oxidando las moléculas esenciales de la célula.
  8. Compuestos orgánicos: Como los derivados del alquitrán de hulla, el cresol, tricresol, alcanfor, creosota, ácido fénico y el fenol que es el de uso más común. Actúan precipitando las proteínas. Esta acción guarda relación con la destrucción de la estructura de la membrana y sus funciones.
  9. Detergentes: Éstos se dividen en: a) compuestos aniónicos como las sales sódicas y potásicas de ácidos grasos de peso molecular elevado sulfatos de alquilo y los jabones. b) compuestos catiónicos como los compuestos de amonio cuaternario y el cloruro de benzalconio. c) compuestos no iónicos que incluyen poliésteres y ésteres de poliglicerol. Los jabones no pueden considerarse antisépticos o desinfectantes efectivos puesto que solo son agentes que eliminan las bacterias mecánicamente de la piel por emulsión de secreciones lipoides en las cuales están incluidos los microorganismos. Los otros grupos de desinfectantes se consideran bactericidas porque destruyen la integridad de la membrana por alteración de la interacción entre las proteínas y lípidos. Los detergentes catiónicos son los
  1. Temperatura de incubación OBJETIVO Observar el efecto de algunos agentes físicos y químicos utilizados como germicidas para el control de los microorganismos. **PROCEDIMIENTO.
  2. EFECTO DE LA TEMPERATURA** El efecto de la temperatura en la eliminación de bacterias se ilustrará con un ejercicio en el cual se calentarán los tubos con una suspensión de la bacteria a estudiar por diferentes tiempos, evaluando después el efecto por conteo de células vivas. Material y equipo Asa bacteriológica 2 mecheros Bunsen 1 vaso de precipitado de 250 ml Tela de asbesto 15 tubos de 13 x 100 con tapón de rosca, estériles 3 tubos con10 ml solución salina estéril 3 pipetas de 5 ml estériles 1 pipeta calibrada en 0.001 ml 15 placas de agar Trypticasa y soya Cepas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli (24 hrs incubación), Bacillis subtilis ( hrs de incubación). Técnica
  3. Prepare una suspensión ligera de cada bacteria (todas con la misma turbidez).
  4. Deposite 1 ml de cada suspensión en 5 tubos para cada bacteria, los cuales irán marcados con el tiempo de calentamiento (Sin calentamiento, 5, 10, 15 y 20 minutos respectivamente).
  5. Caliente los tubos en un baño de agua de ebullición constante por los tiempos indicados 5, 10, 15 y 20 minutos y deje un tubo de cada bacteria sin calentar.
  6. Después del calentamiento siembre con el asa calibrada una asada de cada suspensión en las cajas marcadas para cada bacteria con el tiempo de exposición (5 cajas para cada bacteria).
  7. Incube por 24 horas y cuente cuantas colonias crecen en cada placa para poder estimar el efecto del tiempo de exposición en cada caso.
  8. Elabore una curva con el número de bacterias por ml (y) vs el tiempo de exposición (x).
  9. Concluya cual es el tiempo mínimo de exposición para eliminar al 50% de cada una de las bacterias estudiadas. 2. ACCIÓN DE LOS METALES, CLORO, ÁLCALIS Y ÁCIDOS: Para demostrar el efecto de los metales sobre los microorganismos se utilizarán soluciones de los compuestos en cuestión que se aplicaran sobre el medio para que se difundan. Midiendo posteriormente el halo de inhibición producido por cada una.

Material y equipo Asa bacteriológica Mechero Bunsen 2 cajas de Petri estériles 2 tubos con 20 ml de agar nutritivo fundido Cepas de Pseudomonas aeruginosa Cajas Petri con discos de papel filtro impregnados con las sig. soluciones:

  • Solución de Cloruro de Plata 0.4%
  • Cloruro mercúrico 0.4%
  • Acido sulfúrico 10%
  • Hidróxido de Sodio al 10%
  • Cloro 6%
  • Fenol al 5%
  • Benzal
  • Pinzas para sensidiscos Técnica
  1. Inocular con la cepa un tubo de agar nutritivo fundido y enfriado alrededor de 45ºC.
  2. Verter en un plato estéril y dejar solidificar sobre una superficie nivelada.
  3. Colocar un disco impregnado con cada solución en forma equidistante sobre las placas.
  4. Dejar reposar 5 minutos para que se absorban las soluciones.
  5. Incubar a 35º C por 24 hrs y observar la formación de halos de inhibición de crecimiento.
  6. Mide los halos de inhibición de crecimiento.
  7. Menciona qué solución es más eficaz. Determinación de la temperatura óptima de crecimiento: Es la temperatura a la cual el microorganismo se multiplica a su máxima velocidad. Material y equipo: Tubos de agar nutritivo inclinado (tres por microorganismo) Vaso químico (3) Refrigeradora Incubadora a 37º C Cepa de E. coli Cepa de Bacillus subtilis Cepa de Streptococcus aureus Cepa de Salmonella sp. Cepa de Pseudomona sp. Técnica.
    1. Siembre tres lotes de tubos de agar inclinado con las cepas antes mencionadas.
    2. Incube un lote en refrigeración por 24 horas.
    3. Incube un lote a temperatura ambiente por 24 horas.
    4. Incube un lote a 37º C por 24 horas.
    5. Observe los resultados y anote el crecimiento de cada bacteria a la temperatura indicada.