Prácticas de microscopia, Tesinas de Biología Celular y Molecular

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_ PRÁCTICAS | de MICROSCOPÍA Breve selección F | Al final figura una lista A de nuestros MICROSCOPIOS más utilizados y de reconocida calidaa. | — La empresa TORRERO Y MAS SL te ofrece estas sencillas muestras de trabajos sobre microscopía, gue pueden servir como base para las numerosas prácticas que puedes realizar en Ciencias Naturales + PREPARACIONES MICROSCÓPICAS | SATURNINO VALLE Licenciado en Ciencias Químicas Profesor de Ciencias Experimentales TÉCNICA DE MONTAJE 1- CORTES: Es lo más dificil y delicado, ya que de los cortes depende el éxito de la preparación Se coloca el trozo de tallo, de raiz o de hoja ( Nos referimos a tejidos vegetales) entre dos trozos de médula de sauco o de patata, zanahoria,etc. tal como se indica en la figura. Los cortes puedes hacerlos a "pulso" ( Con un poco de práctica salen muy bien las preparaciones) o bien con el microtomo. Ten preparado un vidrio de reloj con alcohol de 50 grados. Haz varios cortes y sumérgelos en el alcohol, Este alcohol actúa, además, como mordiente para que los colorantes actúen mejor. Selecciona el corte más idóneo y colócalo encima del portaobjetos. Con lel extremo de un trozo de papel de filtro succiona el exceso de alcohol. Pon encima una gota de colorante y déjalo actuar al menos 10 minutos. Los colorantes más utilizados son: Azul de metileno fenicado, hematoxilina, eosina, verde brillante, verde de metilo, tionina y Lugol, si has teñir granos de almidón... Pasados esos 10 minutos, o más, lava la preparación con agua destilada y coloca encima una gota de aclarante. (Puede ser glicerina o creosota de Haya). Coloca el cubre y a observar al microscopio comenzando con aumentos pequeños Es importante el tipo de microscopio utilizado, Si deseas conservar la preparación , antes de colorearla hay que deshidratarla convenientemente Para ello , se hace pasar por sucesivas graduaciones de alcohol, hasta finalizar con alcohol absoluto (100%). Para pegar el cubre al porta, puedes utilizar una disolución en Xileno de Bálsamo de Canada o bien otras disoluciones en Xileno , como DPX, resina Damar,etc. Con el fin de dejar la preparación muy limpia, antes de etiquetarla, quita las incrustaciones de resinas con un trapito humedecido con xileno Procura dejar pasar al menos un día para que la preparación esté bien seca. OBSERYACIÓN DE GRANOS DE ALMIDÓN —Con el bisturi raspa ligeramente la pulpa interna de una patata. Colóca el raspado en un porta y añade encima una gota de lugol (Disolución yodo-yodurada). Pon el cubre y observa al microscopio Verás claramente granos de almidón teñido de color azul, Si vieras que el azul es demasiado oscuro, te recomiendo que diluyas más el lugol con agua destilada, Observa las típicas capas superpuestas que distinguen la fécula de la patata, que la diferencian de otro tipo de almidones, patata trigo —En un portaobjetos pon una muy pequeña cantidad de levadura de panificación, echa una gota de agua y con una aguja enmangada o un palillo, mézciala bien con el agua. Añade otra gota de agua para que quede más dispersa. Coloca el cubre y observa al microscopio, Con un poca de paciencia, es posible que llegues a presenciar la reproducción por gemación de la ; levadura, 4 OBSERVACIÓN DEL HONGO PENICILIUM Este tipo de hongos aparecen en las frutas podridas. En un trozo de manzana podrida, selecciona ,con la aguja enmangada, unos hilitos blancos que se forman Extiéndelos en el portaobjetos. Añade una gota de agua, pon el porta y observa al microscopio. Prueba de hacer lo mismo, pero, en lugar de una gota de agua, pon una gota de tionina. Este tipo de hongos tienen forma de pincel, en cuyos "pelos" aparecen unos gránulos, que son las esporas. : Otro tipo de hongos los puedes observar dejando, durante unos días ,un trozo de miga de pan humedecido con agua, Observa al microscopio el moho del pan - Desprecia la parte superficial del yoghourt que puede tener conservantes Extiende sobre un portaobjetos bien limpio, una capa MUY FINA de yoghourt. Sécala al aire o bien a una altura de la llama que pueda soportar la mano Pon el porta en posición inclinada y, con el cuentagotas, haz resbalar poco a poco alcohol metílico, que,además de desengrasar al yoghoun, lo fijara fuertemente al porta. Cubre ahora el frotis con disolución de azul de metileno fenicado o con violera de genciana durante unos 10 minutos Lava con agua del grifo y sécala como anteriormente. Pon una gota de glicernma como aclarante y coloca encima el cubreobjetos. Obsérvala al microscopio con un minimo de 600 aumentos. Verás claramente dos clases de bacterias : BACILOS, en forma de baston LACTOBACILOS, y ESTREPTOCOCOS, en forma de cuentas de roSsanio. * TEJIDO ANIMAL 1- Células del tegumento interno de la boca; Con un palillo raspa suavemente la pared interna de un carrillo de la boca o bien debajo de la lengua (No hace falta apretar demasiado). Extiende el producto blanquecino que has obtenido sobre un portaobjetos y sécalo bien a Ja Mama, a una distancia tal que caliente, pero que lo pueda SOPoOrtar tu MANO. Nunca directamente a la llama, De esta manera el tejido celular queda fijado al porta. Tinción; Recubre la preparación con un par de gotas . de azul de metileno y mantenla así unos 5 minutos, Pasado este tiempo, lávala al grifo y seca el porta, Echa encima una gota de glicerina, que actuará como aclarante, Coloca el cubre y obsérvala al microscopio. Comprueba que las células son grandes y con un núcleo bien definido, Í [2 Células sunguineas + Extracción de la sangre: Con una lanceta estéril y desechable haz un ligero pinchazo en el pulpejo de un dedo, previa desinfección con alcohol. - Extensión: Es la operación más difícil pues hay que obtener una capa muy fina y uniforme en el porta. Desengrasa el porta frotándolo co a paño mojado en alcohol. Observa el dibujo: + Fijación: Seca ln preparación a la llama a una altura del mechero que aguante tu mano cúbrela con metanol durante tres minutos, Lávala con agua destilada, - Tinción: Eliminado el metanol, cubre la preparación con una mezcla, recién preparada, de 5 gotas de Giemsa y 2 mi de Agua destilada. Ha de permanecer en tinción unos 15 minutos, Sécala a la llama con la precaución que hemos señalado:anteriormente, Pon Una gota de glicerina como aclarante; Coloca el porta y observa al microscopio, Si utilizas el objetivo de inmersión, pon una gota de aceite de inmersión en vez de la glicerina. Observarás gran cantidad de hematíes. Con paciencia recorre el campo para localizar algún leucocito: es mayor y posee núcleo. Los leucocitos se diferencian entre sí por la forma del ? O núcleo y por los gránulos del citoplasma. Hematí pe) También puedes ver pequeños granitos o agrupados; las plaquetas, plaquetas leucocito CÓMO OBSERVAR PROTOZOOS (Amebas, paramecios, vorticelas) (Los protozoos son tragones de bacterias ) Paramecio Ameba Vorticeia 1 Eugiena PREPARACIÓN DE UNA INFUSIÓN Corta en trozos pequeños un buen puñado de hierbas, secas o verdes, es igual. Ponlas en un vaso, como si fueras a preparar una infusión de menta, Cúbrelas con agua hirviendo y déjalas en reposo unos días, procurando que la infusión esté en contacto con el aire, Las bacterias del aire se asentarán en la infusión para alimentarse de las substancias que el agua ha extraído de las plantas, Observa cómo la infusión se ha enturbiado, Esta turbidez nos demuestra que las bacterias ya han comenzado a multiplicarse dentro del vaso. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE ESAS BACTERIAS Toma un par de gotas de la parte superficial de la infusión y colócalas en un portaobjetos, Coge el porta con los dedos y colócalo encima de ¡a llama del mechero, a una altura que pueda aguantar la maño; así lograrás una fijación de las bacterias, cuando se haya secado completamente. Una vez seca, tiñe la preparación con un par de gotas de azul de metileno o violeta de genciana. Mantenlo en tinción al menos cinco. minutos. Lávala suavemente con agua. Escurre y coloca encima un cubreobjetos. Examina a 600 aumentos. Observarás con claridad colonias de bacterias. Si tu microscopio tiene objetivo 100x (Inmersión), en lugar de colocar el cubre, sécala bien y coloca una gota de aceite de inmersión. Sitúa el objetivo 100x de manera que toque el aceite, enfoca y observa. Las verás con un tamaño mucho mayor, ENGORDE DE PROTOZO0S Acude a un lugar donde haya agua estancada de varios días. Coge con un frasquito una pequeña cantidad, procurando que lleve también algo de materia orgánica. Vierte esta agua en la infusión y mantenla asi durante unos días. Los protozoos que has cogido en la charca se alimentarán de las bacterias que cultivaste en la infusión. Con un palillo o varilla: recoge líquido y materia que flota en la superficie del agua. Colócala en el porta y pon un cubre. Observa a 600 aumentos. Verás un mundo fascinante: Paramecios, amebas, vorticelas, etc... Observa su sistema de locomoción y los artilugios que utilizan para alimentarse... DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS Y Rh SATURNINO VALLE Licenciado en Ciencias Químicas Profesor de Ciencias Experimentales MATERIAL Y PRODUCTOS ( Los puedes adquirir en Torrero y Mas SL ) Sueros humanos: Anti A, Anti B y Anti D (Rh). Portaobjetos. Agitadores de vidrio, Lancetas esterilizadas. Tarjetas para Grupos Sanguíneos. Alcohol. ANTIGENOS; En este caso se trata de substancias de carácter proteico que se encuentran adosadas a la membrana de los hematíes, Se les distingue por las letras A, B, y D. Son los antígenos más conocidos. ANTICUERPOS: Se llaman también aglutininas porque provocan la aglutinación de los hematíes. Se encuentran en el plasma sanguíneo y son: Anti A, Anti B y Anti D. NOTA: Advierte a tus alumnos que las determinaciones de GRUPOS SANGUÍNEOS Y Rh realizadas en la clase, carecen de valor oficial clínico y que dicha práctica tiene como finalidad el estudio de la relación ANTIGENO-ANTICUERPO, PROCEDIMIENTO: Previa desinfección con alcohol, verifica una punción con una lanceta esterilizada y desechable, en el dedo índice o en el pulgar. Ten preparado un portaobjetos bien limpio. Pon una gota de sangre en un extremo del porta, otra en medio y otra en el otro extremo. Encima de la primera deja caer, sin tocar, una gota del suero Anti A (color azul), en la segunda suero Anti B (color amarillo) y en la tercera una gota del suero Ánti D ( Incoloro). Con una varilla agitador remueve bien cada gota, independientemente, procurando que no haya mezcla alguna . Mantenlo en reposo unos 20 segundos y después imprime un suave balanceo al porta y observa la posible aglutinación. Notarás que la aglutinación con los sueros Anti A y Anti B es muy rápida mientras que la del Rh es más lenta. No des ningún diagnóstico antes de tres minutos después de haber hecho la mezcla, : NOTA : Como nuestro diagnóstico no posee canrácter oficial, hemos "ahorrado" la utilización del suero Anti AB, ya que , practicamente, se trata de un simple control. RESULTADOS: Si se aglutina la gota azul ( suero Anti A) y las otras no, el individuo es del grupo A, Rh” Si se aglutina la gota amarilla (Anti B ) y las otras no, se trata de un grupo B, Rh Si se aglutinan a la vez las azul y la amarilla pero no, la (Anti D), el grupo es AB Rh- Si no se aglutina ninguna, el grup es O Rh- Siempre que se aglutíne la gota que lleva el suero Anti D,el individuo es Rh+ é MITOSIS CELULAR (Cromosomas de la raíz) MATERIAL Y PRODUCTOS Vidrio de reloj. Portas y cubres, yY1ICOSCOPIO Mechero de alcohol o Bunsen. Papel de filtro, Bisturi. Orceína A y B Raices finas,terminales de cebolla o ajo... PROCEDIMIENTO —Sirviéndote de un bisturí corta los tres o cuatro milímetros finales de varias raices de una cebolla Puedes poner sobre un vaso con agua un bulbo de cebolla para que vaya creciendo. La cebolla es un buen material, Coloca esos trocitos de raíz en un vidrio de reloj y cúbrelos con alcohol de 70* durante unos 15 minutos, Este alcohol sotúa como fijador. Terminada esta Operación, has de eliminar este alcohol, lavando las raicillas varlas veces con agua desionizada, Si ho eliminas el alcohol te encontrarás con la desagradable sorpresa de una precipitación del colorante, Cubre ahora las raíces con unos mililitros de orceína A. La tinción ha de durar unos 10 minutos Calienta con la llama del mechero; hasta que notes desprendimiento de vapores. ES IMPORTANTE QUE NO LLEGUE A HERVIR. Cuando aparezcan los vapores deja reposar. Repite esta Operación 3 veces, añadiendo orceina A, si 85 necesario, para que no se seque, Arrastra las raices suavemente con una aguja enmangada a lo largo del vidrio de reloj, hasta colocarlas sobre un portaobjetos, Echa sobre las raíces una gota de orceina B, Espera 3 minutos. Coloca el cubre, Encima del cubre pon un trocito de papel de filtro y, con el dedo pulgar, aplasta la preparación ,"squash", haciendo al mismo tiempo un movimiento de presión de unos 60 grados Este trozo de papel de filtro, además de proteger la preparación, elimina el exceso de colorante que pudiera haber. Quita el papel de filtro con cuidado. Observa la preparación al microscopio, primero con pequeño Aumento, para localizar las células y luego con el mayor aumento posible, Puedes observar las distintas fases de la mitosis, jo OBTENCIÓN DE ESENCIAS Utilizaremos el método de DESTILACIÓN POR ARRASTRE A VAPOR, para materializar la práctica obtendremos esencia de tomillo, MATERIAL Y PRODUCTOS 2 Matraces de 500 mi. Refrigeranto Vaso de precipitados de 100 mi, Tubos y gomas para la conducción. 100 g. de tomillo(Hojas y flores). o Tapones con dos agujeros. a ES o. E Tapones con un agujero, ¿Tomi llo _Un matraz de 500 ml. se llena de agua hasta la mitad de su volumen. este matraz sirve para producir vapor. Conviene colocar dentro del matraz trocitos de porcelana porosa o bien trozos de vidrio, que controlen la ebullición y eviten que las burbujas de agua suban demasiado, En el segundo matraz, también de 500 ml., se colocan 100 g. de hojas y flores de tomillo, Desecha las ramas duras. El tubo que desprende vapor ha de llegar al fondo del matraz para asi actuar sobre toda la masa del tomillo. No olvides la corriente de agua que ha de tener el refrigerante. El FUNDAMENTO CIENTÍFICO es sencillo: Cuando se calientan al mismo tiempo el agua y el aceite esencial del tomillo, ambas hierven cuando la suma de las presiones de vapor de ambas es igual a la presión atmosférica, aun cuando la temperatura sea inferior a los puntos de abullición de cualquiera de ambas substancias aisladas... La operación es delicada; pero, cuando se consigue, es apasionante, El olor del laboratorio puede ser muy agradable. Puedes obtener esencia de eucaliptus, de menta, etc... * NOTA: Algunos ponen en el matraz del tomillo una pequeña cantidad de agua y lo calientan iigeramente, Ten en cuenta que la cantidad de esencia que en realidad se obtiene es pequeñísima. Para obtener una cantidad apreciable, habría que destilar una cantidad importante de hojas. Si deseas obtener unas gotas de esencia pura has de extraería con hexano.