Proteína C reactiva y, Ejercicios de Inmunología

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Informe de Laboratorio N°2: Proteína C reactiva (PCR)

Tabla de contenido Introducción La proteína C por mucho tiempo se ha convertido en un gran aliado frente a la respuesta inflamatoria ya que esta ha sido parte fundamental para ayudar a encontrar o vigilar inflamación en afecciones agudas o crónicas, incluyendo infecciones bacterianas o virales, y que además ha sido importante como un marcador de inflamación, y es que los niveles elevados de PCR pueden indicar la presencia de inflamación activa en el cuerpo, lo que puede ser útil para detectar y controlar enfermedades como enfermedades cardiovasculares, enfermedades autoinmunes, infecciones y cáncer. La medición de la PCR se realiza a través de un análisis de sangre y ha sido una parte importante en el área clínica, y es que su análisis y estudio a facilitado el diagnóstico temprano de una inflamación en consecuencia a otros factores que pueden conducir hasta la muerte, por ello se considera que los niveles normales de PCR deben estar por debajo de 10 mg/L para así afirmar que todo se encuentra bien. Por ello, si se detectan niveles elevados de PCR, se pueden solicitar pruebas adicionales para determinar la causa y el grado de inflamación. Además, la PCR también se utiliza en la investigación y en estudios clínicos para evaluar la eficacia de tratamientos antiinflamatorios y pronosticar el riesgo de complicaciones en pacientes con enfermedades inflamatorias. En resumen, la proteína C reactiva es una molécula importante en el diagnóstico de diversas patologías que tienen como respuesta a la inflamación en el cuerpo Materiales ● Elementos de protección personal ● Alcohol ● Torundas de algodón ● Kit de venopunción ● Tubo tapa roja ● Kit de aglutinación en látex (PCR) ● Láminas de reacción ● Palillos Métodos

2. Por qué se llama proteína C reactiva El nombre deriva de su capacidad para precipitar al polisacárido somático C del Streptococcus pneumoniae. La PCR forma parte de la inmunidad innata y su síntesis es inducida como respuesta al daño tisular por infecciones, inflamación o neoplasias. Es sintetizada por hepatocitos y células del endotelio vascular y su expresión está regulada por citocinas, particularmente por la interleucina 6 (IL-6) y, en menor grado, la interleucina 1 (IL-1) y el factor de necrosis tumoral α (TNF-α). La PCR pertenece a una familia de proteínas pentaméricas dependientes de calcio llamadas pentraxinas. 3. Unidades de proteína C reactiva La medición de la PCR se realiza a través de un análisis de sangre. Los resultados se informan en miligramos por litro (mg/L). 4. Investigar: ● Hemaglutinación La hemaglutinación es la aglutinación de los hematíes o glóbulos rojos. Se trata de una respuesta biológica común frente a determinados microorganismos, como los virus, y se emplea rutinariamente en técnicas de tipado o clasificación de los grupos sanguíneos o en la determinación de las cargas virales. La hemaglutinación se debe a la presencia de antígenos en los eritrocitos, antígenos capaces de reaccionar con anticuerpos o bien con proteínas específicas de algunos microorganismos (entre las que destacan las hemaglutininas). Un ejemplo de sus aplicaciones se encuentra en la detección del grupo sanguíneo (sistema ABO). Para ello, se añade un antisuero anti-A, anti-B o anti-AB a la sangre tratada con heparina o EDTA tripotásico (dos anticoagulantes). Cuando los glóbulos rojos poseen el antígeno específico para el antisuero empleado, se produce la aglutinación. ● Aglutinación en látex

La prueba de aglutinación en látex se hace en un laboratorio para examinar ciertos anticuerpos o antígenos en fluidos corporales, como la saliva, la orina, el líquido cefalorraquídeo o la sangre. La prueba depende de qué tipo de muestra se necesite. ● Saliva ● Orina ● Sangre ● Líquido cefalorraquídeo (punción lumbar) La muestra se envía a un laboratorio donde se mezcla con gotas de látex cubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico. Si la sustancia sospechosa está presente, las gotas de látex se agruparán (aglutinarse). ● Floculación La floculación es un proceso fundamental que se usa para facilitar la agregación de pequeñas partículas en un líquido o solución para formar grupos más grandes, conocidos como flóculos. Este proceso se suele lograr añadiendo productos químicos especializados conocidos como floculantes, que sirven para promover la aglomeración de partículas y ayudar en la colisión y la unión de las partículas. No se forman precipitados hasta que la cantidad de Ag añadido no exceda ciertos límites. Los flóculos se agregan y sedimentan en rango estrecho de Ag/Ac. ● Aglutinación en gel: Prozona y Postzona La aglutinación en Gel revolucionó el trabajo en los laboratorios de inmunohematología de los grupos sanguíneos.Ha sido desarrollado tanto para la determinación de grupo sanguíneo,investigación, identificación, titulación de anticuerpos irregulares y pruebas de compatibilidad sanguínea pretransfusional en un nuevo formato cuya lectura no admite dudas de interpretación y más aún permite nuevas lecturas hasta 48 horas después de la ejecución de la prueba.

● ELISA

La técnica de ELISA utiliza Acs marcados con una enzima (generalmente la peroxidasa) para poder visualizar la reacción Ag-Ac. La técnica se utiliza tanto para la determinación de Ags como de Acs. Determinación de Ag por ELISA La modalidad más frecuente del método ELISA para la determinación de Ags es el modelo ELISA "Sándwich" directo. En este modelo, el Ac específico para el Ag de interés, se encuentra absorbido en un soporte sólido (placa de petri), sobre el que se añadirá la muestra biológica. En el caso de que en dicha muestra se encuentre el Ag, quedará capturado en la placa y será puesto en evidencia tras la adición de otro Ac específico conjugado con la enzima. Por último, se añade el sustrato incoloro que, por acción de la enzima, dará un producto coloreado que producirá un color observable a simple vista y cuantificable mediante un espectrofotómetro. Determinación de Acs por ELISA Para la determinación de Acs específicos para un determinado Ag se utiliza normalmente la modalidad de ELISA indirecto en donde el Ag de interés se encuentra absorbido en la placa de ELISA. Se pueden utilizar como antígenos, proteínas virales o bacterianas e incluso virus completos, pero cada día es más frecuente absorber exclusivamente las proteínas de interés inmunológico. Esta es una de las técnicas de elección para buscar Acs contra proteínas del virus HIV en sueros de pacientes. ● Nefelometría Las inmunoglobulinas IgM, IgG e IgA también pueden cuantificarse por nefelometría. Para ello, el suero incógnita deberá ser incubado con exceso de anticuerpos específicos (anti-IgM, anti-IgG o anti-IgA) a fin de que se produzca la formación de complejos inmunes. Esta técnica, es un método óptico que cuantifica la luz

dispersada por los complejos inmunes formados, la cual es proporcional a la concentración del antígeno específico. ● Inhibición de activación de complemento Inhibición del complemento o de la activación de alguno de sus productos: las cápsulas de muchas bacterias grampositivas y gramnegativas contienen ácido siálico, que inhibe la activación del complemento por vía alternativa; la proteína M de S. pyogenes impide la vía alterna del complemento; la cápsula y la gruesa capa de peptidoglucano de las bacterias grampositivas inhiben el ensamblaje del complejo lítico (complejo de ataque a la membrana) del complemento en la superficie bacteriana. La inhibición de la activación de la vía alterna del complemento retrasa la respuesta inflamatoria del huésped pero finalmente, en el huésped inmunocompetente, puede ser compensada por la vía de las lectinas y, cuando aparecen las IgM, por la vía clásica. ● Innmunofluorescencia Se utiliza tanto para inmunohistoquímica como para inmunocitoquímica. La presencia del Ac conjugado con el fluorocromo no necesita de ninguna reacción química para hacerse evidente. Los fluorocromos emiten luz de una determinada longitud de onda luego de ser excitados por un haz de luz de longitud de onda menor. Cada fluorocromo es capaz de emitir luz dentro de un determinado espectro de longitud de onda. Por ejemplo, el fluorocromo denominado Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) emite en la gama del verde, mientras que la Ficoeritrina emite en la gama del rojo. El hecho de que existan distintos fluorocromos capaces de emitir a diferentes longitudes de onda, permite que puedan detectarse Ag diferentes en un mismo corte de tejido o célula. La visualización de la fluorescencia puede realizarse utilizando un microscopio de fluorescencia (para cortes de tejido o células en portaobjetos) o por Citometría de flujo (para células en suspensión). ● IRMA

mg/L) e infección bacteriana aguda en pacientes pediátricos con cáncer (≥20 mg/L).

6. Velocidad de sedimentación globular La sedimentación globular, también conocida como velocidad de sedimentación globular (VSG) o velocidad de eritrosedimentación, es una prueba de laboratorio que mide la velocidad a la que los glóbulos rojos (eritrocitos) caen en un tubo de ensayo vertical. Esta prueba se utiliza comúnmente como un indicador de la presencia de inflamación en el cuerpo. El principio detrás de la prueba de sedimentación globular es el siguiente: cuando hay una inflamación en el cuerpo, las proteínas, como la proteína C reactiva (PCR), se liberan en el torrente sanguíneo. Estas proteínas pueden hacer que los glóbulos rojos se agrupen o se peguen entre sí, lo que aumenta su densidad y peso. Como resultado, los glóbulos rojos tienden a sedimentar más rápidamente en el fondo del tubo de ensayo en comparación con una muestra de sangre que no está inflamada. La sedimentación globular se expresa en milímetros por hora (mm/h) y se considera una prueba no específica de inflamación, lo que significa que puede aumentar en respuesta a diversas condiciones inflamatorias, como infecciones, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios crónicos y lesiones. Los valores normales son de 0 a 22 mm/h para los hombres y de 0 a 29 mm/h para las mujeres; este valor puede variar dependiendo de la edad. La VSG por sí sola no puede identificar la causa exacta de la inflamación, por lo que generalmente se utiliza junto con otras pruebas y evaluaciones clínicas para ayudar en el diagnóstico y el seguimiento de enfermedades inflamatorias. Conclusiones Los hallazgos reportados en el laboratorio indican que los resultados de Proteína C reactiva pueden variar significativamente en diferentes individuos, lo que resalta la importancia de entender las diferencias interindividuales en las respuestas inflamatorias. Además, la PCR se presenta como una herramienta valiosa para el

diagnóstico y la monitorización de enfermedades inflamatorias, como enfermedades cardíacas, artritis y otras condiciones médicas. La precisión y la sensibilidad de las técnicas utilizadas es fundamental para la obtención de datos confiables, por ejemplo es gracias a la determinación de datos exactos que se ha podido establecer el factor de riesgo existente en adultos para enfermedades cardiovasculares (Arnett et al., 2019). Es importante subrayar la relevancia clínica de la PCR como un indicador temprano de inflamación, lo que puede ser vital para un diagnóstico rápido y un tratamiento efectivo en pacientes con enfermedades inflamatorias. Además, la comprensión de los mecanismos subyacentes que regulan la producción de PCR puede abrir nuevas vías para el desarrollo de terapias dirigidas y estrategias preventivas. Referencias

1. Cann, Alan J. (2005). Principles of Molecular Virology (4 edición). Burlington, USA: Elsevier. ISBN 0-12-088787-8. 2. ¿Qué es una aglutinación? (2023, junio 10). Unilabs.es; Unilabs. https://www.unilabs.es/glosario/aglutinacion 3. Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2023, octubre 2). Floculación. Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. https://www.mt.com/mx/es/home/applications/L1_AutoChem_Applications/ L2_ParticleProcessing/flocculation.html 4. Camacho, M. (2015). MICROTÉCNICA DE AGLUTINACIÓN EN GEL. https://www.academia.edu/14171122/MICROT %C3%89CNICA_DE_AGLUTINACI%C3%93N_EN_GEL 5. Manejo de las infecciones por Staphylococcus Aureus resistente a la meticilina (SARM). (s/f). Intramed.net. Recuperado de https://www.intramed.net/contenidover.asp?contenidoid= 6. Arnett, D. K., et al. (2019). 2019 ACC/AHA Guideline on the Primary Prevention of Cardiovascular Disease. Circulation, 140(11). https://doi.org/10.1161/cir. 7. Wang, Z., Wang, X., Zou, H., Dai, Z., Feng, S., Zhang, M., ... & Cheng, Q. (2020). The basic characteristics of the pentraxin family and their functions in tumor progression. Frontiers in immunology, 11, 1757. 8. Bojalil, R., Jefe, P., Amezcua-Guerra, L., Springall Del Villar, R., & Parra, R. (2007). Proteína C reactiva: aspectos cardiovasculares de una proteína de fase aguda. https://www.medigraphic.com/pdfs/archi/ac-2007/ac071i.pdf 9. Abbas, A. K., Lichtman, A. H., & Pillai, S. (2022). Inmunología Celular y Molecular (10th ed.). Elsevier.