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REVISION 2. Página 1 de 1 Laboratorio Número 1 PERIODO 59 CARRERA BIOTECNOLOGÍA SEDE QUITO DOCENTE GABRIELA INES MENDEZ SILVA MATERIA MICROBIOLOGÍA NOMBRE DEYANIRA CHARRO, HERICKA NUÑEZ, STEPHANIE QUINGA, JHONATHAN CASTILLO
Informe de laboratorio 1
Tema: tinciones
Introducción
La tinción en el área de la microbiología se ha usado desde hace décadas atrás, nos ha ayudado a la humanidad principalmente a detectar enfermedades a tiempo y con mucha certeza de que es la bacteria correcta, también para poder clasificarlas según su forma y que tinción es la necesaria para su observación e identificación. Una de las características más importantes de las bacterias es su morfología, la cual se define por el tamaño, la forma, la composición y la estructura. Hay bacterias de modo redondo llamados cocos, los cuales tienen una manera cilíndrica, también existen otros tipos como bacilos, tenemos los espirilos, espiroquetas, Vibrios, etc., cada uno con una forma característica. Estas características se pueden determinar examinando las muestras con un microscopio. Las células no teñidas son prácticamente transparentes, pero pueden verse bajo el microscopio óptico haciendo preparaciones de portaobjetos o con microscopios especiales como los de contraste fase o los microscopios de campo oscuro. Cuando se dispone de un microscopio óptico, las bacterias se pueden teñir para facilitar la visualización, si una muestra de cultivo extendida y fija se tiñe en un portaobjetos con una tinción determinada para su tipo de células, estas adquirirán el color de la tinción añadida y se
podrá observar la forma, el tamaño y la disposición de las células. Objetivo general Identificar y diferenciar las distintas tinciones que hemos visto y el proceso para hacerlas logrando de esta manera identificar cierto grupo de bacterias Objetivos específicos Hacer uso de las diferentes tinciones aprendidas y usarlas para tipo de bacteria Saber el correcto uso y procedimiento de cada tinción Analizar las muestras y describir sus estructuras (color, forma) y anotar los resultados. Manipular perfectamente las herramientas de trabajo para analizar las muestras con sus respectivos colorantes. Metodología En la práctica de las tinciones, necesitaremos el microscopio, un mechero para tener un área de trabajo esterilizado o una cabina de flujo laminar, para mayor y mejor movilidad y trato de la bacteria. Utilizaremos diferentes coloraciones para un tipo especifico de bacterias, para así observar las diferentes tinciones explicadas en clase. Tinción Gram Es una técnica de laboratorio por Christian Gramen en 1884 y su objetivo es diferenciar varios grupos de bacterias por la distribución del peptidoglicano de la pared celular tiñéndola de diferentes formas y las bacterias que no logran tomar una tinción con este método son llamadas Gram negativo y las que si logran tomar tinción se llaman Gram positivas. “Las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram
sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo” (Esaú López-Jácome et al., 2014) Las bacterias tienen un diferente grosor de peptidoglicano en la pared celular, el cristal violeta teñirá esta pared mientras que el Lugol fijara la coloración, el alcohol acetona influye en las bacterias de que no se tiñen con cristal violeta mientras se aplica la safranina dando una coloración fucsia al Gram negativo.
Tinción de flagelos
Los flagelos se encuentran en bacterias móviles y su tinción se realiza con colorante de fucsina básica o pararos anilina. Para realizar la tinción se prepara el portaobjetos con un mordiente para poder engrosar los flagelos, que pueden ser ácido tánico o sulfato de potasio o ácido nítrico, después se enjuaga con alcohol. Después agregamos una gota del medio líquido, la inclinamos para que quede una capa fina y lo dejamos secar. Posteriormente agregamos fucsina básica o pararos anilina esperamos de 5 a 10 min, enjuagamos con agua destilada y podemos visualizar al microscopio de color rosa intenso o rojo.
Tinción de esporas La espora es más impermeable que las células vegetativas; se usa el verde de malaquita aun que es un colorante débil, al entrar en calor también logra penetrar las esporas, en la fase de decoloración el verde de malaquita es fácil de quitar de las células vegetativas con un lavado, pero no de la endospora. Se usa la safranina como un colorante de contraste ya que solo puede teñir las células vegetativas, son usados en cultivos de Bacilus subtilis y Bacilus megaterium , los colorantes son disueltos en agua. “La tinción de esporas es la metodología usada para colorear las estructuras de resistencia que forman algunos géneros bacterianos cuando se encuentran en condiciones desfavorables; estas estructuras corresponden a una forma de
supervivencia” (Marielsa, 2019)
Para la tinción se cubre con papel filtro la platina Koch para evitar la precipitación del colorante sobre la bacteria, se añade el verde malaquita y se espera un tiempo estimado de un minuto seguido de fijación por calor en emisión de vapor por aproximadamente cinco a diez
colonias individuales en agar son redondas, convexas y de 1-4 mm de diámetro con un borde afilado” ( Staphylococcus aureus colony morphology and microscopic A menudo se encuentran en racimos que se asemejan a racimos de uvas” (Gnanamani et al., 2017) “células de forma aproximadamente esférica con superficie lisa [2].
Tabla
No formas esporas y es un gram negativo Candida albicans (Levadura) Pequeño, ovalado. En SDA 2-4 μm de diámetro, agrupadas en pequeños grupos, mientras que, en forma de hongo filamentoso, las células se alargan y se
“Colonias cremosas y pastosas, suaves después de 24-48 horas a 25-37 ° C Olor a levadura (olor)” (https://www.facebook.com/ sag.micro, 2018) diversifican tomando la apariencia de filamentos, pseudo-hifas o pseudo- micelio, redondas u ovaladas son gram positivas Dibujos
- Bacillus thuringiensis (Tinción gram y tinción de esporas) - Tinción de esporas 1. Teñir con verde malaquita. A continuación, con unas pinzas de madera colocar la muestra encima del mechero de forma que el colorante empiece a humear durante 5 min. Nota: evitar que la muestra empiece a hervir. Añadir más colorante si se observa que se
- Clostridium botulinum (Tinción gram y tinción de esporas)
- Tinción de esporas
- Vibrio cholerae (Tinción gram y de flagelos)
- Tinción de flagelos
- Candida albicans (Levadura)-Tinción gram
citoplasmática), lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Las bacterias Gram negativas tienen un espacio periplásmico, es decir, un espacio entre la superficie exterior de la membrana citoplasmática y la superficie interior de la membrana exterior Explicar el tipo de flagelo que tiene el microorganismo en el cual se realizó esta tinción (indicar si es lofótrico, perítrico, etc.) El flagelo contiene filamentos los cuales ayudan a impulsar a la célula bacteriana_. Pseudoma putida_ es un bacilo de gram negativo que puede ser encontrado en el suelo o agua. “La estructura detallada de un flagelo puede verse solo con el microscopio electrónico; así es que se ha demostrado que el flagelo bacteriano está compuesto de tres partes: el filamento, el gancho y el cuerpo basal. El primero sobresale de la superficie de la bacteria y se une a ese nivel con el gancho, que está fijo al cuerpo basal. Éste último está anclado en la membrana plasmática y está compuesto por un cilindro y dos o más juegos de anillos contiguos a la membrana plasmática, el peptidoglicano y, en las bacterias gramnegativas, a la membrana externa” (Pírez & Mota, n.d.) “Los flagelos pueden variar en número, desde uno a cientos. Las especies bacterianas difieren por sus modelos de distribución de flagelos. Las monotricas (trichous: pelo) tienen un solo flagelo que si se sitúa en un extremo de la bacteria y se denomina polar. Las bacterias anfitricas (amphi: en ambos lados) tienen un flagelo en cada polo bacteriano. En cambio, las lofotricas (lopho: mechón) poseen un grupo o penacho de flagelos en uno o ambos extremos. Por último, en las bacterias peritricas (peri: alrededor), los flagelos se distribuyen uniformemente en toda la superficie bacteriana. Los modelos de distribución de los flagelos son útiles para identificar a las bacterias” (Pírez & Mota, n.d.) Explicar el tipo de esporas que forma el microorganismo (terminal, subterminal, etc.) En el microscopio óptico, que significa fresco (no teñido), que se podrían decir que son cuerpos que aparecen o tienen formas esféricas, ovoides, cilíndricas y refractivas.
Las esporas están basadas en el tamaño que tienen y la posición del esporangio, los cuales son taxonomías importantes. Dependiendo el diámetro y la posición de las esporas podemos deducir que tienen diferentes células vegetales que pueden ser: Esporas deformadas las cuales por su posición dentro del esporangio se pueden decir que son (Terminal, Subterminal, Central). En el caso de los esporangios deformantes los cuales no se pueden teñir por los colorantes normales. Se tiene que utilizar otros colorantes los cuales son formados a partir del calor o mordientes, los cuales crean una tinción muy empleada que es de reforzar con verde de malaquita el colorante para estos Esporangios. (Los cuales se dividen en forma de cerilla y Clostridios). Estas estructuras son resistentes a situaciones vitales estresantes como el calor, la desecación, la radiación ultravioleta, los ácidos y los desinfectantes químicos. “Debido a su resistencia y al hecho de que varias especies de bacterias formadoras de esporas son agentes patógenos peligrosos, las esporas tienen gran importancia en microbiología alimentaria, industrial y médica” (Pírez & Mota, n.d.) “La estructura de la espora es compleja y se distinguen de afuera hacia adentro: el exosporio, capa delicada y delgada; la cubierta, compuesta por muchas capas de proteínas, puede ser gruesa; la corteza, constituida por peptidoglicano modificado, con menos enlaces que en la célula vegetativa, puede ocupar la mitad del volumen celular; la pared celular de la espora rodeando al protoplasto y el protoplasto, conteniendo las estructuras celulares normales como ribosomas y un nucleoide.”
- Preguntas
- Describir los requisitos indispensables que debe tener un laboratorio de bioseguridad tipo 2
Diferenci as Gram Negativas Gram positivas Pared celular delgada ( 2 a 7 nm) Pared celular gruesa con una sola capa (20 a 80 nm) Péptido glicano entre el 5 al 10% Péptido glicano con puentes peptídicos Alta cantidad de lipoproteínas Baja cantidad de lípidos No contiene ácidos teicoicos Contiene ácidos teicoicos Conclusiones
- Durante todo el proceso ya podemos reconocer la identificación de distintas bacterias, los materiales y reactivos que utilizaremos para diferenciarlos, con las tinciones aprendidas - Nuestros conocimientos sobre las tinciones han sobre pasado la “teoría” ya que, al graficar, podemos ir observando y encontrando las diferencias entre las bacterias y el resultado de estas al someterlas a una tinción - No podemos decir que logramos manipular a la perfección las herramientas de trabajo, ya que no se ha realizado esta practica presencialmente, pero lo manipulamos en simuladores o en gráficos hechos por nosotros mismos.
- Bibliografía
Esaú López-Jácome, L., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G., & Franco-Cendejas, R. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Realpe, M. E., Hernández, C. A., & Agudelo, C. I. (2002). Especies del género Bacillus: morfología macroscópica y microscópica. Biomédica , 22 (2), 106. https://doi.org/10.7705/biomedica.v22i2.
Gnanamani, A., Hariharan, P., & Paul-Satyaseela, M. (2017). Staphylococcus aureus: Overview of Bacteriology, Clinical Diseases, Epidemiology, Antibiotic Resistance and Therapeutic Approach. Frontiers in Staphylococcus Aureus. https://doi.org/10.5772/ Staphylococcus aureus colony morphology and microscopic appearance, basic characteristic and tests for identification of S.aureus bacteria. Images of Staphylococcus aureus. Antibiotic treatment of staphylococcal infections. (2011). Microbiologyinpictures.com. https://www.microbiologyinpictures.com/staphylococcus %20aureus.html SAHIL BATRA. (2018, May 16). MORPHOLOGY AND CULTURE CHARACTERISTICS OF CLOSTRIDIUM BOTULINUM | BACTERIOLOGY NOTES. Paramedics World. https://paramedicsworld.com/clostridium- botulinum/morphology-culture-characteristics-of-clostridium- botulinum/medical- paramedical-studynotes Vibrio cholerae, serovar 01 - VelocityEHS. (2015). VelocityEHS. https://www.ehs.com/resources/sds-resources/free-safety-data- sheet-index/vibrio- cholerae/ https://www.facebook.com/sag.micro. (2018, May 15). Candida albicans- An Overview Microbe Notes. Microbe Notes. https://microbenotes.com/candida-albicans/ Pírez, M., & Mota, M. (n.d.). TEMAS DE BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA MÉDICA Morfología y estructura bacteriana. Prescott, & Klein, H. y. (2009). MicrobiologiA Madrid: McGRAW-HILL- INTERAMERICANA DE ESPAÑA, S.A.U. Bacterias Gram positivas y Gram negativas. — Microbioenergética. (2014, July 21). Microbioenergética. Microbioenergética. https://microbioenergetica.squarespace.com/bacteriologa/2014/7/21/
