Reporte de Practica - Microbiologia, Ejercicios de Química

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“Esterilización y

Preparación de Medios de

Cultivo”

Práctica #3 y

Universidad de Ciencias

y Artes de Chiapas

Instituto de Ciencias Biológicas

Esterilización y preparación de medios de cultivos. y #

Universidad de Ciencias y Artes de Chiapas

Instituto de Ciencias Biológicas

Microbiología

Práctica N° 3 y 4:

Esterilización y preparación de medios de cultivo

Integrantes:

 Álvarez López Plutarco

 Hernández Álvarez Magdalena

 Díaz Gómez Néstor De Jesús

 Valencia Figueroa Jhovany

Docente:

Biol. Christian Anabí Riley Saldaña

Tuxtla Gutiérrez, Chiapas 01 de Marzo de 2017

CONTENIDO

Esterilización y preparación de medios de cultivos. y #

INTRODUCCIÓN

La Microbiología se puede definir como la “ciencia que trata de los seres vivos muy pequeños, concretamente de aquellos cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano”. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la metodología apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. Precisamente, el origen tardío de la Microbiología con relación a otras ciencias biológicas, y el reconocimiento de las múltiples actividades desplegadas por los microorganismos, hay que atribuirlos a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y técnicas pertinentes. (Osorio, 2012)

Con la invención del microscopio en el siglo XVII comienza el lento despegue de una nueva rama del conocimiento, inexistente hasta entonces. Durante los siguientes 150 años su progreso se limitó casi a una mera descripción de tipos morfológicos microbianos, y a los primeros intentos taxonómicos, que buscaron su encuadramiento en el marco de los "sistemas naturales" de los Reinos Animal y Vegetal. (Osorio, 2012)

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de oxido de etileno (para jeringas y cajas de plástico). (Muñoa, 2005)

No se puede hablar de esterilización sin considerar la idea de microorganismos infecciosos. Mientras la esterilización consiste en la eliminación de todos los microorganismos de un material, la palabra desinfección se aplica a la remoción o destrucción de microorganismos patógenos. Por destrucción total se entiende como un proceso que implica el calentamiento del material, como ocurre con la aplicación de una flama, por ejemplo cuando flameamos un asa de platino o las bocas del tubo de ensayo. (Yousef & Carlstrom, 2003)

Esterilización y preparación de medios de cultivos. y #

Uno de los métodos que se utiliza en esta práctica son los métodos físicos en los que se hace uso del calor; la utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción de calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. El autoclave; se realiza la esterilización por vapor de agua a presión. Esteriliza a 120° a una atmosfera de presión (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. (Osorio, 2012)

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar, tal y como se realiza en esta práctica. La preparación de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y disolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante.. Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:

1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Las bacterias no son capaces de degradarlo.
2. Azúcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos.
3. Extractos. Son preparados de ciertos órganos o tejidos animales o vegetales obtenidos con agua y calor.
4. Agentes reductores. Sustancias que se añaden al medio para crear las condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios.

(Gamazo et al, 2005)

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 Posteriormente se procedió a pesar cada medio de cultivo en la balanza analítica sobre un vidrio de reloj.  Mientras se pesaban los medios de cultivo, etiquetamos los tubos de ensayo y las cajas “Petri”  Después de pesar los medios de cultivo, se colocaron en sus matraces correspondientes. El agar se colocó en el matraz con 110 ml. de agua destilada y el caldo nutritivo en el que contenía 20 ml. de agua de garrafón.  Después se abrió la llave de gas y encendimos el mechero. Colocamos el mechero bajo el tripie y la tela de asbesto y sobre esta última colocamos el matraz con caldo nutritivo y calentamos. Esperamos a que el caldo nutritivo llegara a su punto de ebullición dos veces y lo vertimos en los 5 tubos de ensayo, cada uno con 3 ml.  El mismo procedimiento realizamos con el agar nutritivo. Calentamos y esperamos a que llegara a su punto de ebullición dos veces y lo colocamos en los 7 tubos de ensayo, cada uno con 3 ml.

Esterilización

 Antes de esterilizar se precalentó el autoclave y envolvimos las dos cajas “Petri” con papel estraza y las etiquetamos. A el autoclave entraron 5 tubos con agar nutritivo y 3 col caldo nutritivo, al igual que le matraz con el resto de agar.  No se esterilizaron dos tubos con caldo nutritivo y dos con agar. Los tubos con agar se colocaron en la mesa en posición de pico de flauta sobre un lapicero para que se gelatinizara y los de caldo nutritivo se clocaron en una gradilla de forma vertical.  Entregamos el resto de los materiales y solo conservamos los 2 mecheros y las dos cajas Petri junto con los 2 tubos de agar y los 2 con caldo que no se esterilizarían.  Esperamos alrededor de 40 – 50 min. hasta que el autoclave realizó la esterilización de los materiales y medios de cultivo.

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 Después de sacar los materiales del autoclave, encendimos los 2 mecheros, nos colocamos los cubrebocas y los guantes y procedimos a vaciar el agar nutritivo en las cuatro cajas “Petri”.  Vertimos el agar en las 4 cajas entre los dos mecheros. Al quitar el tapón de algodón del matraz, calentábamos la boca de este y vertíamos en la caja que sosteníamos con la otra mano y la cerrábamos. Ese procedimiento se realiza con las 4 cajas.  Después de haber vertido el agar nutritivo en las cajas “Petri” ,las giramos y esperamos a que se gelatinizara.  Finalmente, colocamos dentro de la incubadora los tubos y las cajas “Petri” por 24 horas. Entraron el lunes 19 de febrero y salieron el martes 21 de febrero.  Después de haber salido de la incubadora se colocaron los materiales con medio de cultivo en el refrigerado a una temperatura de 5°C por 24 horas.

• Sesión 2

 Sacamos nuestros materiales del refrigerador y colocamos sobre una gradilla los tubos y las cajas sobre la mesa de trabajo.  Esperamos a que se acoplaran a la temperatura ambiente y observamos.

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 Caja #1 Esterilizada:

Fig. 3.- Caja "Petri" Estéril #1 sin presencia de contaminación bacteriana

 Caja #2 Esterilizada:

Fig. 4.- Caja "Petri" Estéril #2 sin presencia de contaminación bacteriana

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Tubos de ensayo con caldo nutritivo

Fig. 5.- Tubo con caldo esterilizado (Izquierda). Tubo con caldo sin esterilizar (derecha).

• Tubos de ensayo con agar

Fig. 6.- Tubo con agar sin esterilizar (Izquierda). Tubo con agar esterilizado (Derecha).

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completo todos los microorganismos, entre ellos los virus, siempre y cuando este se realice de la manera adecuada.

Los tubos con caldo nutritivo no esterilizados presentaron contaminación (Fig.5) al igual que los tubos con agar no esterilizado (Fig. 6), siendo este el resultado que se esperaba, ya que al no estar esterilizados presentaron floculos de microorganismos, esto se debe a que estos dos medios de cultivo poseen nutrientes esenciales para el desarrollo bacteriano general (Alexander, 1992)

El método de esterilización utilizado fue el de calor húmedo por ser más efectivo para destruir cualquier forma de microorganismos, ya que, como señala Gaviño (1999), además de penetrar más a medida que aumenta la proporción de humedad, la temperatura de coagulación de las proteínas desciende progresivamente y el vapor distribuye más uniformemente el calor en todas partes del recipiente esterilizador.

CONCLUSIÓN

En esta práctica se logró conocer los diferentes medios de cultivos para la siembra de microorganismos. Las diferentes técnicas que hay para la preparación

También se determinó la importancia que tienen los medios de cultivos en una investigación, ya que gracias a estos se puede lograr un aislamiento de microorganismos y así poder estudiarlos.

Por último y no menos importante; se conoció los diferentes tipos de materiales que se usan para la preparación de medios de cultico, y se destacó el uso del autoclave, ya que es un material indispensable para la esterilización de nuestros materiales.

BIBLIOGRAFÍA

Alexander, P. (1992). Biologia. Mexico : PrenticeHall.

Gamazo, C., López-Goñi, I., & Ramón, D. (2005). Manual práctico de Microbiología (Tercera ed.). Barcelona, España: El sevier.

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Gonzalo, G., Carlos, J., & Héctor, F. (1999). Tecnicas bilógicas selectas de laboratorio y de campo. (Segunda ed.). DF, Mexico: Limusa.

Jorge, M. (11 de Agosto de 2005). Unavarra. Obtenido de http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pd f

Michael, M., John, M., Paul, D., & David, C. (2009). Brock. Biolog'ia de los microorganismos (Duodecims ed.). Madrid, España: Pearson.

Osorio, U. M. (05 de septiembre de 2012). Colegio Cristo Rey. Obtenido de http://colegiocristorey.com/nenuca/ciencias/cctv_apuntes_microbiologia.pdf

Ruíz, P. (14 de Junio de 2010). Microbitos blog. Obtenido de http://www.microbitosblog.com/2010/06/14/morforlogia-colonial-bacteriana/

Yousef, A. E., & Carlstrom, C. (2003). Microbiologia de los alimentos. Manual de labortatorio. Zaragoza, España: Acribia.