1. MÉTODOS EN MICROBIOLOGIA I. AISLAMIENTO Y CULTIVO DE MICROOR-
GANISMOS. Principios de la nutrición microbiana y medios de cultivo. Requerimientos
nutricionales. Factores físico-químicos. Esterilización. Agentes antimicrobianos físicos: calor,
radiaciones, filtración. Agentes antimicrobianos químicos. Técnicas de enriquecimiento y
aislamiento: medios sólidos, líquidos y selectivos. Cuantificación de microorganismos: Recuento
de viables y totales.
PRINCIPIOS DE NUTRICIÓN MICROBIANA y MEDIOS DE CULTIVO
Para crecer los microorganismos en el laboratorio se emplean medios de cultivo. Estos deben
de poseer todos los nutrientes necesarios a las concentraciones adecuadas para permitir el
crecimiento del microorganismo en cuestión. La materia viva está compuesta por:
- C, O, N, H, P, S, K, Na, Ca, Mg (98%)
- Cl, Fe, Mn, Co, Cu, Mo y Zn,
por lo que todos estos elementos deben estar disponibles para el microorganismo. Repasar
forma de aportar los principales macronutrientes (C, O, N, P, S).
Definiciones:
Medio sintético o definido: compuesto por nutrientes químicamente definidos.
Medio complejo o indefinido: contiene ingredientes de composición desconocida (v.g.: extracto
de levaduras).
Prototrofía: capacidad para sintetizar todos los compuestos orgánicos que se necesitan a partir
de la principal fuente de carbono.
Auxotrofía: incapacidad de sintetizar algún compuesto (v.g.: vitaminas).
Además, hay que tener en cuenta tanto los aspectos cualitativos como cuantitativos. Sólo existe
relación lineal entre Velocidad de crecimiento y concentración de nutrientes a valores muy bajos
de esta (Ver también tema 8).
Factores ambientales
Para el desarrollo de un microorganismo además de los requerimientos nutricionales, existen un
gran número de factores ambientales que influyen sobre el crecimiento, supervivencia y
actividades metabólicas de los microorganismos.
pH
Debe ser adecuado y mantenerse durante todo el período de crecimiento.
Temperatura
Determina la velocidad de crecimiento y puede también ser determinante sobre el tipo de
microorganismos que ocupan un ecosistema. La velocidad de una reacción química es
función de la temperatura, y sigue la Ley de Arrhenius:
C+
2.303RT
AH-
=V
10
log
Para microorganismos, sólo hay una relación lineal en un margen de temperaturas,
descendiendo bruscamente tanto por debajo como, muy especialmente, por encima. Ver
concepto de temperatura máxima, óptima y mínima de crecimiento.
Organismos hipertermófilos (t>75°C), termófilos (t>55C), mesófilos (20<t<45C) y psicrófilos o
criófilos (t<10C).
Oxígeno
De acuerdo a su respuesta frente al O2 las bacterias se clasifican como:
aerobias: dependen del O2. Microaerófilas: prefieren concentraciones bajas (2% ).
anaerobias facultativas: utilizan O2 si está presente, pero pueden crecer en su ausencia
