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CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
- Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología -
CASO 2: MICROSCOPÍA Y COLORACIONES
Blgo. José González Cabeza
A continuación, se presenta una situación problemática, la cual deberá ser abordada por el Grupo de Práctica (03 mesas). Para ello; se realizarán sorteos al azar (docente y alumnos) para cada una delas interrogantes planteadas. Situación problemática: Durante la realización de la Práctica de “Coloraciones y Microscopía” de la asignatura de microbiología, Ud. dispone de una serie de colorantes y de un microscopio compuesto. Consecuencia de lo anterior; su docente desmonto uno de los objetivo; ante lo cual Ud. se percata que el cilindro metálico tiene grabados un conjunto de leyendas (ver figura adjunta). Cuestionario:
1. ¿Cuál es el significado y función de cada una de las leyendas?
2. ¿Qué tipo de imagen producen los objetivos? Sustente lo señalado. Las lentes del objetivo forman una imagen real en el cuerpo del microscopio que actúa como el objeto para la lente ocular. El ocular en cambio actúa como un amplificador simple para formar una gran imagen virtual a la distancia en la que el ojo puede distinguir de la mejor manera (25 cm). **_3. ¿Qué son objetivos acromáticos, apocromáticos y monocromáticos?
- Objetivos Acromáticos.** Son los más comunes, tienen la aberración cromática corregida para el amarillo o verde, en tanto que la esférica está corregida para un solo color. **- Objetivos Apocromáticos.** Son corregidos para tres colores, rojo, verde y violeta, mediante lentes de espato flúor. La aberración esférica se encuentra corregida para dos colores, se utilizan generalmente para microfotografía. **-_** Objetivos Monocromáticos. Son construidos de cuarzo y corregidos para una sola longitud de onda. Se usan en microfotografía con luz UV. Se obtienen buenas imágenes incluso con objetivos frescos o sin teñir, dado el desigual poder de absorción de los diferentes elementos de una preparación histológica a los rayos UV. A igual apertura numérica, estos lentes poseen el doble de poder de resolución. 4. ¿Qué es distancia focal?
Permiten la observación de preparaciones, en su color natural o contrastadas mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo más brillante. Utiliza un condensador especial que bloquea los rayos que ingresan por el centro del condensador (da un campo oscuro) y refleja oblicuamente sobre el objeto los que ingresan por la periferia (hace brillar los objetos o formas celulares suspendidos en el campo oscuro). Se basa en los mismos principios de óptica que para la microscopía común, con diferencia en el manejo y el diseño relacionado con la generación y transmisión de longitudes de onda adecuadas a los fluorocromos que se quieren visualizar, ya sean propios de la muestra o de la coloración utilizada (bien de forma natural o añadidas a la preparación) que emiten fluorescencia en el espectro visible. Asimismo; en esa misma práctica, Ud. emplea una serie de colorantes para las observacionesmicroscópicas, por lo que es necesario tener el conocimiento previo de lo siguiente:
9. ¿Qué es un colorante, y cuáles son sus componentes?. Los colorantes son sustancias que tienen la capacidad de teñir células, estructuras o tejidos; y de acuerdo con su origen. 10. ¿Proponga al menos dos sistemas de clasificación de los colorantes empleados enmicroscopía, señalando ejemplos en cada una de ellos.
1.Tinción simple azul de metileno ( Observación de células epiteliales)
2.Tinción compuesta (Gram - +) (Observación de bacterias)
11. ¿Qué diferencia establece entre una coloración supruvital e intravital? La coloración intravital consiste en inyectar una sustancia inocua para el animal pero que es fagocitada, por ciertas células, como por ejemplo los macrófagos o fagocitos. La coloración supravital es la que colorea a los tejidos vivos pero separados del organismo.
12. ¿Qué diferencia establece entre frotis y extensión, durante una preparación microscópica? La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber. En el frotis, las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas. 13. Fundamento de la coloración Gram. ¿Para qué sirve? La tinción de Gram es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante que permite observar las bacterias mejor que bajo el microscopio. Las bacterias son microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser humano.
la coloración utilizada (bien de forma natural o añadidas a la preparación) que emiten fluorescencia en el espectro visible. Generalmente los procesos de excitación requieren longitudes de onda cortas, en el UV cercano (lámpara de halógeno-
