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Las sustancias que reducen la actividad de una enzima de esta forma se conocen como inhibidores. Los inhibidores actúan a través de varios mecanismos. Inhibición competitiva Una sustancia que compite directamente con su sustrato normal por el sitio de unión a la enzima se conoce como inhibidor competitivo, este tipo se asemeja al sustrato, de forma tal que se una específicamente al sitio activo, pero difiere del sustrato en tanto que no reacciona de la misma forma que este.
Tipo: Apuntes
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencia Biológicas Bioquímica general Práctica sustrato e inhibición. Integrantes: Hernández Nolasco Olga Lilia y Jiménez García Montserrat Sección 3. Grupo 3FM Las sustancias que reducen la actividad de una enzima de esta forma se conocen como inhibidores. Los inhibidores actúan a través de varios mecanismos. Los inhibidores enzimáticos irreversibles, o inactivadores, se unen a la enzima tan fuertemente que bloquean su actividad en forma permanente. Los inhibidores enzimáticos reversibles disminuyen la actividad de una enzima al interactuar de manera reversible con ella. Algunos inhibidores enzimáticos son sustancias que se asemejan en cuanto a la estructura a los sustratos de la enzima, pero no reaccionan o lo hacen con mucha lentitud. Inhibición competitiva Una sustancia que compite directamente con su sustrato normal por el sitio de unión a la enzima se conoce como inhibidor competitivo, este tipo se asemeja al sustrato, de forma tal que se una específicamente al sitio activo, pero difiere del sustrato en tanto que no reacciona de la misma forma que este. Inhibición no competitiva En este tipo de inhibición, el inhibidor se una directamente al complejo enzima-sustrato, pero no a la enzima libre, supuestamente distorsiona el sitio activo, por lo que hace a la enzima inactiva para la catálisis. La inhibición no competitiva requiere que el inhibidor afecte la función catalítica de la enzima, pero no la unión de su sustrato. Realmente es significativa solo para enzimas con varios sustratos. Inhibición mixta Un inhibidor mixto se une a sitios de la enzima que participan tanto en la unión del sustrato como en la catálisis. Tipo de inhibición Efecto del inhibidor Competitiva Aumenta KM No competitiva Disminuye KM y Vmáx Mixta Disminuye Vmáx y puede aumentar KM Objetivo Determinar el tipo de inhibición producido por la anilina sobre la invertasa. Resultados Efecto de la concentración de sustrato Tabla 1. 1 2 3 4 5 6 Abs 0. 3
43
81
97
87
88 AR (μl/ 2 mL) 3.75 5.9 6. 5
5
20
89 Vo 0.37 0.5 0.6 0.8 1.0 1.
(uni. de invera sa) 5 9 15 25 2 [S] (moles /L=M)
8
16
24
32
4 Gráfica 1. 0.01 0.01 0.02 0.02 0.03 0.03 0.04 0.04 0.05 0.05 0. 0
1
Gráfica M-M concentración de sustrato [S] (moles L=M ) Vo (U.I) Tabla 2. Lineweaver-Burk para efecto concentración de sustrato. 1/[S] 1/Vo 125 2. 7 62.5 1. 4
7
31.25 1. 2 25 0. 7
3
3 Gráfica 2. 0 20 40 60 80 100 120 140 0
1
2
3 f(x) = 0.02 x + 0.
1/[S] 1/Vo Vmáx= 1. KM= ˗^
Km
KM=0.0165 x Vmáx = 0. Tabla 3. Inhibición enzimática 1 2 3 4 5 6
2
32
26
77
07
93 AR (μl/ 2 mL) 2.2 2. 5 3.9 4. 5 3.2 4. 5 (uni. invera 0.22 0. 75
9
45
2
55 (moles /L=M)
8
16
24
2
4
48 Gráfica 3.