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Técnica histológica
Se denomina al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.
Los tejidos animales son en su gran mayoría incoloros, excepto aquellos que poseen algún tipo de pigmento como la hemoglobina de la sangre o la melanina de la epidermis. En las plantas, sin embargo, existe una mayor variedad de pigmentos naturales que permiten su observación directa con el microscopio óptico, a lo que también ayuda la presencia de las paredes celulares, las cuales facilitan la delimitación celular y la discriminación entre diferentes tejidos. Cuando se inventaron los primeros microscopios hubo que descubrir cómo teñir los tejidos para poder desentrañar sus características morfológicas.
PROCEDIMIENTOS MEDIATOS O POSTVITALES
Tienen por finalidad preparar células, tejidos y órganos procedentes de seres en los que los procesos vitales se han detenido y es necesario conservar la estructura que tenían en vida. De manera general, para alcanzar este objetivo es necesario realizar los siguientes pasos:
Toma de muestra
La calidad y la fidelidad con que una célula o un tejido muestren una imagen al microscopio, con las características morfológicas que poseían cuando estaban con vida, dependen esencialmente de la prontitud y el cuidado que se aplicó para obtener la muestra a ser procesada mediante los pasos mencionados anteriormente.
Fijación
Es el proceso mediante el cual una sustancia química conserva de forma permanente la estructura de un tejido para sus futuros procedimientos.
Funciones
1.-Abolir el metabolismo celular
2.-Impedir la degradación enzimática de las células y tejido
3.-Endureser el tejido
El fijador más común es la formalina una solución acuosa de formaldehido al 37%
Inclusión
.Los tejidos fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para que, de ellos, se obtengan secciones delgadas. Estas secciones, del orden de algunas milésimas de milímetro (5 a 10 m), se conseguirán cuando los tejidos se infiltren con sustancias denominadas “de inclusión” y adquieran tal dureza que sometidos al filo de una navaja produzcan secciones, cortes o láminas sumamente delgados y transparentes. Las sustancias de inclusión tienen la propiedad de incorporarse e infiltrarse al interior de las células y tejidos con la finalidad de servirles de soporte. Así los tejidos y la sustancia de inclusión forman un bloque homogéneo en dureza y consistencia, a pesar que sus componentes tuvieron originalmente distinta dureza.
Microtomia (OBTENCIÓN DE LOS CORTES) En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo bloque que, posee la dureza y la consistencia suficientes para obtener secciones delgadas y transparentes
El sistema de funcionamiento de los micrótomos consta de cuatro mecanismos principales:
1.- Sujeción del bloque de parafina.
2.- Sujeción de la navaja.
3.- El que permite que el filo de la navaja seccione al bloque en cortes delgados y de grosor uniforme.
4.- El de avance del bloque en un número determinado de micrómetros después que se ha obtenido un corte.
Colorantes mordientes : son aquellos que se usan en combinación con sales metálicas, que actúan como mordiente. Estas sales se pueden emplear junto con el colorante, antes o después. En algunos casos el colorante mordiente puede ser también aniónico o, menos frecuentemente, catiónico. Normalmente se emplean para teñir los núcleos.
Indiferentes o hidrofóbicos : realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad química sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudán se disuelve en los lípidos y por tanto teñirá a las gotas de lípidos, especialmente en los adipocitos.
Tinciones histológicas
Tinciones topográficas
Basadas en la interacción de sustancias colorantes con las estructuras celulares y tisulares
Tinción con hematoxilina y eosina
Es una tinción topográfica. Se utiliza para poner en evidencia las características estructurares del tejido la hematoxilina es básica tiñe sustancias con cargas negativas de color azul la eosina es acida tiñe sustancias con carga positiva de color rosado
Tinciones histoquímicas
Implican una reacción química transformación de un producto en otro con características diferenciales
PAS: Detección de carbohidratos
Lectinas : Detección de grupos glucosilados
Reacción de feulgen: Detección de ADN
Tinciones especiales
Glucógeno : carmín de best
Lípidos: sudan B
Tejido conjuntivo : tricromico de masson
Acidos nucleicos: naranja de acridina
Tinciones inmunocitoquimicas
Se basan en el empleo de anticuerpos dirigidos hacia epitopos
Referencias
