¡Descarga tecnicas histologicas y más Apuntes en PDF de Histología solo en Docsity!
Técnicas histológicas
Introducción.
HISTOLOGIA: Del griego Histos: Tejido
Tejido : Asociación de células de naturaleza similar, diferenciadas de modo determinado y ordenadas regularmente con un comportamiento fisiológico común.
CELULA: Unidad estructural y funcional del tejido. Las primeras investigaciones histológicas fueron posibles a partir del año 1600, cuando se incorporó el microscopio a los estudios anatómicos. Marcello Malpighi es el fundador de la histología y su nombre está ligado a varias estructuras histológicas.
En 1665 se descubre la existencia de unidades pequeñas dentro de los tejidos a las cuales se les denomina “Células”.
El desarrollo de la tecnología ha permitido avances en el conocimiento histológico; entre ellos podemos citar a la microscopía electrónica, la inmunohistoquímica (uso de anticuerpos marcados con colorantes fluorescentes dirigidos a un componente celular particular o a una actividad enzimática específica) y la citoquímica (procedimientos químicos que proporcionan mayor detalle en relación a la composición celular).
Técnicas histológicas.
Procedimientos que se utilizan para preparar los tejidos para su estudio.
(^) Obtención del material.
Fijación
Deshidratación
Aclaramiento
Inclusión
Microtomía
Montaje y rehidratación
Tinción
Obtención del material. Se puede hacer de varias formas:
- Biopsia
- Frotis por aposición o impronta
- Fijación. Es el tratamiento del tejido con sustancias químicas, sirve para retardar las alteraciones tisulares subsecuentes a la muerte celular (autolisis). Permite que los tejidos permanezcan sin cambios luego del procesamiento de los mismos. Este procedimiento debe realizarse con inmediatez para que los tejidos no sufran autolisis y puede durar entre 6 y 24 horas dependiendo del tamaño de la muestra.
La fijación permite que los tejidos se endurezcan, pero sin fragmentarse.
La relación fijador – material fijado debe ser 3:1.
a. Calor seco o húmedo
b. Criodesecación, consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es la fijación instantánea por congelación en Nitrógeno líquido y el segundo desecación por sublimación directa del agua confiada a vapor en una bomba de vacío; es un proceso complicado y costoso pero tiene una ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y produce una conservación indefinida, además evita que se produzcan enlaces químicos entre el tejido y el fijador, conservando asila estructura antigénica
c. Criosustitución. Es la sustitución lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un líquido fijador que en ocasiones puede actuar simultáneamente como medio de inclusión. Tras la congelación instantánea del tejido con nitrógeno líquido o isopentano a -50ºC se coloca el tejido congelado en el medio de sustitución, este medio está formado por una mezcla de alcohol etílico, acetona y propilén- glicol. Enfriado a -40ºC, el intercambio del agua tisular por el líquido de sustitución, se realiza dentro de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya del punto de congelación del líquido de sustitución.
d. Congelación. Se utiliza como método para la fijación el enfriamiento por congelación del tejido es el método de elección para realizar estudios morfológicos o funcionales en los que se requiere conservar intacta la estructura antígena del tejido o su contenido enzimático. La clave para una correcta fijación por congelación del tejido es que su realización sea instantánea porque un enfriamiento lento provoca la formación de microcristales titulares de hielo que pueden agregarse con el paso del tiempo produciendo roturas titulares que dificulten el diagnóstico. Normalmente se preparan bloques de no más de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm de espesor de modo que el proceso de congelación instantánea no requiera más de 10 segundos. El mantenimiento continuo de isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70ºC para que quede compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al extraer el líquido del congelador. Al enfriar tanto no actúan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos tejidos utilizamos el microtomo de congelación o un aparato más evolucionado o criostato el cual tiene como ventajas que la temperatura se mantiene más baja y se pueden realizar cortes más finos entre 2 y 15 micras.
- Deshidratación. Se emplea para eliminar el agua de los tejidos. Durante la deshidratación el agua es sustituida por alcohol. Se puede emplear alcohol etanol o alcohol isopropílico, que es más económico y no es una sustancia controlada como el etanol. Se realiza en baños de alcohol incrementando gradualmente el grado alcohólico, el tejido debe permanecer aproximadamente una hora en cada uno. Generalmente se utilizan tres grados, comenzando por el de 50% a 70% hasta llegar al 100% o absoluto.
- Aclaramiento. En el aclaramiento el tejido se sumerge en Xilol hasta que el alcohol haya sido sustituido por este. Sustancias como las grasas y mucinógeno pueden disolverse, lo cual explica que aparezcan espacios vacíos en los sitios de la célula donde esta se encontraba. Con el
eosinato de sodio. Tiñe de color rosa, es un colorante artificial que presenta autofluorescencia espontánea. Otros colorantes ácidos son la fucsina ácida, verde rápido y naranja G.
■ Básicos: Son sales cuya base es la porción que se colorea, los colorantes básicos poseen una carga positiva y reaccionan con los grupos anionicos de las células como ADN y ARN y algunos componentes de la matriz extracelular como los glucosaminoglicanos; la reacción que producen se denomina “BASOFILIA” .Ejemplo: el azul de metileno, la safranina, azul de toluidina y la hematoxilina son colorantes básicos.
■ Neutros: Son sales en los que se tiñe tanto la base como el ácido, tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Ejemplo eosinato de azul de metileno.
■ Indiferentes: No forman sales. No se unen a elementos de los tejidos por afinidad química sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante Sudán III se disuelve en los lípidos y por lo tanto teñirá a las gotas de lípidos, especialmente en los adipocitos.
Tinciones o coloraciones especiales. Se utilizan para resaltar elementos tisulares de manera específica y para ello se usan colorantes que tienen afinidad por dichas estructuras. Por ejemplo:
- Reacción del ácido peryódico de Schiff (PAS) tiñe de color magenta moléculas ricas en CHO y glucógeno.
- Tricrómico de Masson: Tiñe de azul oscuro los nucleos, azul claro el mucinógeno y de rojo el tejido muscular, la queratina y el citoplasma.
- Orceína : Tiñe de pardo a las fibras elásticas.
- (^) Wreight : Colorea de azul a las fibras elásticas.
- Hemetoxilina férrica: Colorea de negro las estriaciones musculares, los núcleos y eritrocitos
- Tinción Argéntica: Tiñe de negro las fibras reticulares.
- Mallory: tiñe el colágeno de verde y las células musculares de rojo.
- Ziel Neelsen tiñe de rojo los BAAR
- Fontana tiñe la melanina de negro
- Gomori Grocott tiñe de negro Coccidioides
Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que tiene en solución se dice que ha ocurrido un fenómeno de metacromasia. Esto se debe a que las propiedades de absorción de la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Por ejemplo, el azul de toluidina se vuelve púrpura cuando se une a ciertos gránulos de los mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el mismo color que en solución se denomina ortocromasia.
