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Mecanismos Genéticos Básicos: Replicación y Reparación del ADN, Guías, Proyectos, Investigaciones de Biología

Un trabajo práctico sobre los mecanismos genéticos básicos, centrándose en la replicación y reparación del adn. Explora las propiedades generales de la replicación, como la semiconservación y bidireccionalidad, y las alteraciones del adn causadas por factores ambientales. Se analizan las enzimas intervinientes, como las adn polimerasas, helicasas y topoisomerasas, y se discuten los mecanismos de reparación del adn, incluyendo la reparación por fotoreactivación y escisión de nucleótidos. Además, se aborda la recombinación génica y el papel de los elementos genéticos móviles, como los transposones y plásmidos. El documento concluye con preguntas y esquemas para reforzar la comprensión de los conceptos clave, ofreciendo una visión completa de los procesos que aseguran la estabilidad y variabilidad del material genético. Este recurso es valioso para estudiantes de biología molecular y genética que buscan profundizar en los mecanismos fundamentales que rigen la herencia y la evolución.

Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones

2023/2024

Subido el 01/06/2025

alisson-cisneros-2
alisson-cisneros-2 🇦🇷

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TRABAJO PRÁCTICO N°5
Año 2022
MECANISMOS GENÉTICOS BÁSICOS (PARTE I)
OBJETIVOS
Comprender que el mantenimiento de un alto grado de orden celular deriva de la
información genética almacenada en el ADN que se puede replicar, mantener e
incluso reparar, así como generar variabilidad mediante tres mecanismos
genéticos básicos: REPLICACIÓN DEL ADN, REPARACIÓN DEL ADN Y
RECOMBINACIÓN GÉNICA.
UNIDAD DE CONOCIMIENTO
CONOCIMIENTOS PREVIOS REQUERIDOS: Para abordar el presente Trabajo
Práctico deberán repasarse los contenidos del Trabajo Práctico referido a
Macromoléculas.
TEMARIO 1. REPLICACIÓN DEL ADN
1.1 Propiedades generales del proceso: semiconservación, bidireccionalidad,
dirección de síntesis de cada cadena y semidiscontinuidad.
1.2 Origen, Burbuja y Horquilla de replicación.
1.3 Etapas de la replicación y enzimas intervinientes en cada una de ellas.
1.4 Fidelidad de la réplica. Mecanismos de corrección.
1.5 Comparación del proceso en organismos procariontes y eucariontes.
1.6 Replicación de los telómeros.
2. REPARACIÓN DEL ADN
2.1 Alteraciones del ADN: espontáneas u ocasionadas por la acción de factores
ambientales.
2.2 Estabilización genética por reparación de las diversas alteraciones del ADN:
mecanismos y enzimas intervinientes.
2.3 Mutación del ADN: tipos. Mutaciones génicas: sustitución, inserción y
deleción. Rol biológico y consecuencias de las mutaciones.
3. RECOMBINACIÓN GENÉTICA
3.1 Reordenamiento de secuencias genéticas: recombinación. Propiedades
generales e importancia biológica. Variabilidad.
3.2 Recombinación general y específica de lugar.
3.3 Relación con procesos de reparación.
3.4 Elementos genéticos móviles.
VOCABULARIO ESPECÍFICO DEL TEMA
semiconservativo - cadena conductora - cadena retrasada - fragmentos de
Okazaki - burbujas de replicación - primosoma - replisoma - ARN cebador
(primers) - antiparalelo - complementario - depurinación - depirimidización -
desaminación - gen - locus - loci - alelo - bacteriófago - transposón -
desnaturalización - renaturalización - hibridación.
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TRABAJO PRÁCTICO N°

Año 2022

MECANISMOS GENÉTICOS BÁSICOS (PARTE I)

OBJETIVOS

Comprender que el mantenimiento de un alto grado de orden celular deriva de la información genética almacenada en el ADN que se puede replicar, mantener e incluso reparar, así como generar variabilidad mediante tres mecanismos genéticos básicos: REPLICACIÓN DEL ADN, REPARACIÓN DEL ADN Y RECOMBINACIÓN GÉNICA. UNIDAD DE CONOCIMIENTO CONOCIMIENTOS PREVIOS REQUERIDOS: Para abordar el presente Trabajo Práctico deberán repasarse los contenidos del Trabajo Práctico referido a Macromoléculas. TEMARIO 1. REPLICACIÓN DEL ADN 1.1 Propiedades generales del proceso: semiconservación, bidireccionalidad, dirección de síntesis de cada cadena y semidiscontinuidad. 1.2 Origen, Burbuja y Horquilla de replicación. 1.3 Etapas de la replicación y enzimas intervinientes en cada una de ellas. 1.4 Fidelidad de la réplica. Mecanismos de corrección. 1.5 Comparación del proceso en organismos procariontes y eucariontes. 1.6 Replicación de los telómeros.

2. REPARACIÓN DEL ADN 2.1 Alteraciones del ADN: espontáneas u ocasionadas por la acción de factores ambientales. 2.2 Estabilización genética por reparación de las diversas alteraciones del ADN: mecanismos y enzimas intervinientes. 2.3 Mutación del ADN: tipos. Mutaciones génicas: sustitución, inserción y deleción. Rol biológico y consecuencias de las mutaciones. 3. RECOMBINACIÓN GENÉTICA 3.1 Reordenamiento de secuencias genéticas: recombinación. Propiedades generales e importancia biológica. Variabilidad. 3.2 Recombinación general y específica de lugar. 3.3 Relación con procesos de reparación. 3.4 Elementos genéticos móviles. VOCABULARIO ESPECÍFICO DEL TEMA semiconservativo - cadena conductora - cadena retrasada - fragmentos de Okazaki - burbujas de replicación - primosoma - replisoma - ARN cebador (primers) - antiparalelo - complementario - depurinación - depirimidización - desaminación - gen - locus - loci - alelo - bacteriófago - transposón - desnaturalización - renaturalización - hibridación.

BIBLIOGRAFÍA

  • Alberts, B. y col. “ Biología molecular de la célula ”. 4ta-6ta. edición. Ediciones Omega. Barcelona. 2002- 2016
  • De Robertis (h), Hib y Ponzio. “ Biología Celular y Molecular ”. Editorial El Ateneo. 1996
  • Herrera, E. “ Elementos de Bioquímica ”. Editorial Interamericana. 1993n Material multimedia sugerido: Replicación del ADN: https://www.youtube.com/watch?v=kTbeC7e2kKA Telomerasa y replicación de los telómeros: https://www.youtube.com/watch?v=hszZXlNY9Wc Reparación del ADN: https://www.youtube.com/watch?v=qMZXDKp5laM&list=PLIkvErQDPzbaSv1Ek TLHXureNZmIe6UBg&index= https://www.youtube.com/watch?v=vP8-5Bhd2ag https://www.youtube.com/watch?v=I-oHPDemhOs UNIDAD DE ACCIÓN En su casa : el estudiante deberá investigar usando como base el temario propuesto y contestar el cuestionario guía de estudio a los efectos de autoevaluar si ha adquirido los conceptos fundamentales requeridos para el abordaje del trabajo práctico. Utilizando los conocimientos teóricos adquiridos intentará plantear una solución de los ejercicios de aplicación. Podrá además ejercitarse luego de la clase resolviendo los problemas adicionales. En clase: el estudiante deberá participar en la discusión del temario y resolver con la ayuda del docente los problemas de aplicación, con el fin de reafirmar los conceptos teóricos estudiados en su casa y evacuar las posibles dudas. CUESTIONARIO GUÍA DE ESTUDIO 1. Propiedades generales de la replicación del ADN a) ¿Por qué se dice que es semiconservativa? Por necesita una cadena mol para hacer una nueva cadena b) ¿Empieza en sitios al azar o en un/os punto/s preciso/s? Diferencias entre procariontes y eucariontes al respecto. Don de hay Este origen es una secuencia específica de ADN que se reconoce por las proteínas de iniciación en procariotas comienzan en un sitio especifico llamado origen de replicación En Eucariotas se da en múltiples sitios del cromosoma origen de la replicación Las diferencias principales es que procariotas el ADN es circular y generalmente una sola molécula de ADN Mientras que las Eucariotas tiene ADN lineal y múltiples moléculas de ADN organizadas en cromosomas
  • Características: Tiene actividad polimerasa 5' → 3' y exonucleasa 3' → 5'.
  1. ADN polimerasa II
  • Función: Involucrada en la reparación del ADN y en la respuesta a daños en el ADN.
  • Características: También tiene actividad polimerasa 5' → 3' y exonucleasa 3' → 5'.
  1. ADN polimeraza III
  • Función: Principal enzima responsable de la síntesis de ADN durante la replicación.
  • Características: Tiene alta fidelidad y velocidad, con actividad polimerasa 5' → 3' y exonucleasa 3' → 5'. f) Mencione las ADN polimerasas presentes en eucariotas. Alfa Beta Gama Epsilon y Delta
  1. ADN Polimerasa α (alfa) :
  • Inicia la síntesis de ADN y tiene actividad de primasa. 2.ADN polimerasa β (beta) :
  • Participa en la reparación del ADN.
  1. ADN Polimerasa γ (gamma) :
  • Responsable de la replicación del ADN mitocondrial.
  1. ADN Polimerasa δ (delta) :
  • Principal enzima en la síntesis de la cadena de ADN líder y en la síntesis de la cadena rezagada.
  1. ADN Polimerasa ε (epsilon) :
  • Participa en la síntesis de la cadena líder y en la reparación del ADN. 3. Respecto de las enzimas y proteínas requeridas para la replicación del ADN a) Indique claramente la función desempeñada por: helicasas, topoisomerasas, proteínas de fijación al ADN monohebra (SSBP), primasas y ligasas. Helicasa: va a romper los puentes de hidrogeno intercantenaria proteínas SSB: Impiden la unión de las bases nitrogenadas y mantiene las cadenas separadas Topoisomerasa: impide el enrollamiento de hebras Tipo1 no utiliza energía se encarga de cortar una de las dos cadenas de al hazar esta utiliza la energía que se crea cuando la cadena girasobre la otra Tipo 2 utiliza energía va acortar las dos cadenas y va a necesitar ATP b) ¿A qué se denomina primosoma? Un primosoma es un complejo multiproteico que facilita la preparación del ADN durante el proceso de replicación en las células de E. coli y desempeña un papel crucial en el ensamblaje ordenado del primosoma.

4. En los cromosomas lineales de eucariotas la replicación de los extremos se realiza de una manera diferencial: a) ¿Cómo se denominan específicamente las regiones terminales del cromosoma eucariótico? Las regiones terminales del cromosoma eucariótico se denominan telómeros. b) ¿A qué se debe la manera particular de la replicación del ADN en esta región? La replicación del ADN en los telómeros es particular debido a que: - Problema del extremo de replicación : Durante la replicación, la ADN polimerasa no puede completar la síntesis en los extremos 3' de las hebras, lo que resultaría en la pérdida de información genética en cada ciclo de replicación. c) ¿Qué diferencias funcionales encuentra entre la enzima que cataliza dicha síntesis y las ADN polimerasas descriptas en la pregunta 2? La enzima responsable de la síntesis de los telómeros es la telomerasa , y presenta diferencias funcionales con respecto a las ADN polimerasas descritas anteriormente:

  1. Composición :
  • La telomerasa es una enzima ribonucleoproteica que contiene ARN, el cual actúa como plantilla para la adición de repeticiones de ADN en los telómeros.
  1. Mecanismo de Acción :
  • A diferencia de las ADN polimerasas, que solo pueden extender un cebador existente, la telomerasa puede sintetizar ADN de novo utilizando su plantilla de ARN, permitiendo la adición de nucleótidos en los extremos del ADN.
  1. Función Específica :
  • La telomerasa se activa principalmente en células que se dividen rápidamente (como células madre y células cancerosas) para mantener la longitud de los telómeros, mientras que las ADN polimerasas son responsables de la replicación general del ADN en todas las células.
  1. regulación
  • La actividad de la telomerasa está regulada y generalmente es baja o ausente en la mayoría de las células somáticas, lo que contribuye al acortamiento de los telómeros con cada división celular.
  1. a) ¿Cuáles son las principales causas de la aparición de alteraciones en la secuencia de nucleótidos del ADN? 1.Errores durante la replicación Ocurren cuando la ADN polimerasa incorpora un nucleótido incorrecto 2.Daño por agentes externos
  • Radiación UV : Puede causar la formación de dímeros de timina.
  • Sustancias químicas : Productos químicos pueden modificar bases o causar rupturas en la cadena.

6. Las mutaciones pueden dividirse en: mutaciones génicas y aberraciones cromosómicas: a) ¿Cuál es la diferencia fundamental entre ellas? - Mutaciones Génicas : - Se refieren a cambios en la secuencia de nucleótidos de un solo gen. Estas mutaciones pueden ser puntuales (sustituciones, inserciones o deleciones de nucleótidos) y afectan directamente la información genética de un gen específico. Aberraciones Cromosómicas Implican cambios en la estructuras o número de los cromosomas completos ,esto puede incluir duplicaciones ,deleciones ,inversiones ,translocaciones o aneuploidías (cambio en el numero de cromosomas ) Estas alteraciones afectan múltiples genes y pueden tener efectos mas amplios en el genoma b) ¿Qué consecuencias pueden tener las mutaciones génicas? 1. Alteraciones en la proteína producida : - Las mutaciones pueden cambiar la secuencia de aminoácidos de una proteína, lo que puede afectar su función, estabilidad y actividad. 2. Enfermedades genéticas : - Muchas mutaciones génicas están asociadas con enfermedades hereditarias, como la fibrosis quística o la distrofia muscular. 3. Mutaciones silenciosas : - Algunas mutaciones no alteran la secuencia de aminoácidos debido a la redundancia del código genético, pero pueden afectar la regulación del gen o la expresión de la proteína. 7. Respecto de la recombinación genética:

  1. Intercambio de Material Genético :
  • La recombinación general implica el intercambio de segmentos de ADN entre cromosomas homólogos durante la meiosis, lo que resulta en combinaciones nuevas de alelos.
  1. Diversidad Genética :
  • Este proceso aumenta la variabilidad genética en la población, lo que es esencial para la evolución, ya que proporciona una mayor diversidad sobre la cual puede actuar la selección natural.
  1. Mejora de la Adaptación :
  • La variabilidad generada permite a los organismos adaptarse mejor a cambios ambientales, aumentando sus posibilidades de supervivencia y reproducción.
  1. Formación de Gametos :
  • Durante la formación de gametos, la recombinación asegura que cada gameto tenga una combinación única de genes, lo que contribuye a la variabilidad en la descendencia.

a) Indique los rasgos más salientes de la recombinación general y establezca su relación con la variabilidad de los individuos en organismos sexuados. b) ¿En qué consiste la recombinación específica de lugar? ¿Qué tipos de elementos genéticos móviles conoce? PROBLEMAS DE APLICACIÓN En esta sección, hemos incluido problemas que relacionan los temas estudiados en este TP con problemáticas de importancia médica, identificados con el símbolo: Al final de algunos de estos problemas encontrará un texto breve identificado como “ Lectura complementaria ” que brinda una breve explicación sobre el tema biomédico que se desarrolla en el mismo. Su lectura no resulta indispensable para la resolución del problema, pero brinda información útil para su futura formación como médico tanto generalista como especialista. 1) a) ¿De qué manera almacena información una célula? ¿Cuál es el sentido de flujo de la misma? Las células almacenan información genética en forma de ADN, que se organiza en cromosomas. El flujo de información genética sigue el principio de dogma central : el ADN se transcribe a ARN, que luego se traduce a proteínas. b) Los virus son agentes infecciosos intracelulares obligados que están compuestos por material genético (una molécula de ADN o una de ARN) rodeado por una cubierta proteica. Al infectar una célula, inyectan su material genético en el interior de la célula hospedadora, y utilizan la maquinaria celular para reproducirse, siendo capaces de causar diversas enfermedades. Algunos virus relacionados con el cáncer y el virus causante de SIDA pertenecen al grupo de los retrovirus. La característica principal de este grupo de virus es que su genoma está constituido por ARN. Luego de infectar a una célula, los

  1. Recombinación Específica de Lugar :
    • Este tipo de recombinación ocurre en sitios específicos del ADN y es mediada por proteínas especializadas. A menudo, se observa en la inserción o eliminación de elementos genéticos en el genoma.
  2. Tipos de Elementos Genéticos Móviles :
    • Transposones : También conocidos como "genes saltarines", son secuencias de ADN que pueden moverse de una posición a otra dentro del genoma.
    • Retrotransposones : Se copian a través de un intermediario de ARN y luego se insertan en una nueva ubicación en el ADN.
    • Plásmidos : Pequeñas moléculas de ADN que pueden replicarse independientemente del ADN cromosómico y pueden transferirse entre bacterias.
  • Burbujas de replicación : Regiones donde el ADN se está desenrollando.
  • Origen de replicación : Punto donde comienza la replicación.
  • Horquillas de replicación : Estructuras en forma de Y donde el ADN se separa. b) En el siguiente esquema de una horquilla de replicación del ADN bacteriano ubique todas las enzimas y proteínas intervinientes en el proceso e indique la polaridad de las cadenas de ADN (tanto moldes como hijas). A medida que completa el esquema, mencione ordenadamente la función de cada uno de los elementos presentados. d) ¿Cuál es la enzima responsable de la remoción del cebador en E. coli? ¿Qué otra función tiene esta enzima? La enzima responsable de la remoción del cebador en E. coli es la ADN polimerasa I , que también tiene la función de rellenar los espacios dejados por los cebadores. 4) a) Un cromosoma bacteriano constituido por 8 x 10^6 nucleótidos tarda en duplicarse 1 hora 6 minutos 40 segundos. Calcule la velocidad media de incorporación de nucleótidos por parte de la ADN-polimerasa (nucleótidos/segundo) de esta especie bacteriana. c) Sabiendo que los cromosomas de las células eucariotas son mucho más largos que los de las procariotas y que la velocidad de desplazamiento de sus ADN polimerasas es 10 veces menor ¿Cree Ud. que estas células tardarán más tiempo en duplicar su material genético que las bacterias? Justifique. Para un cromosoma de 8 x 10^6 nucleótidos que tarda 1 hora 6 minutos 40 segundos (4000 segundos): Velocidad=8×106 nucleótidos 4000 s=2000 nucleótidos/s Velocidad= 4000 s8× 106 nucleótidos= 2000 nucleótidos/s

Sí, las células eucariotas tardarán más tiempo en duplicar su material genético debido a que sus ADN polimerasas tienen una velocidad de desplazamiento 10 veces menor. 5) Supongamos que dos tipos de nucleótidos A y B diferentes de los que se encuentran normalmente en el ADN pueden ser producidos sintéticamente. El tipo A es incapaz de unirse a otro nucleótido por su extremo 3’ y el tipo B es incapaz de hacerlo por su extremo 5’. Si se sabe que un virus que crece en un cultivo celular tiene una ADN polimerasa con mayor afinidad por estos nucleótidos que la ADN polimerasa celular ¿Cuál de estos nucleótidos artificiales será un antiviral más efectivo? Justifique teniendo en cuenta que en una de las placas de cultivo están presentes los 4 dNTPs más el nucleótido sintético A y en otra, los dNTPs y el B. El nucleótido A , que no puede unirse por su extremo 3’, será más efectivo como antiviral. Esto se debe a que la ADN polimerasa del virus no podrá incorporar nucleótidos A en la cadena de ADN en crecimiento, inhibiendo así la replicación viral. 6) En los cromosomas lineales de eucariontes la replicación de los extremos se realiza de una manera diferencial. a) ¿Cómo se denominan específicamente las regiones terminales del cromosoma eucariótico? SE llama telómeros b) ¿A qué se debe la manera particular de la replicación del ADN en esta región? La replicación en los telómeros es particular debido a la dificultad de replicar los extremos de las cadenas lineales de ADN. c) ¿Qué diferencias funcionales encuentra entre la enzima que cataliza dicha síntesis y las ADN polimerasas responsables de la síntesis del ADN? La telomerasa cataliza la síntesis de los telómeros y tiene una función diferente a las ADN polimerasas, ya que puede añadir secuencias repetitivas a los extremos del ADN. Recuerde que en la bibliografía puede encontrar videos referidos al tema que lo ayudarán en la resolución del ejercicio. d) Como los telómeros de nuestros cromosomas se van acortando con cada división celular, es probable que se llegue a un punto en el que comience a perderse material codificante y, por esa razón, las células podrían ver afectadas sus funciones y/o morir. Una mutación en el gen que codifica para la telomerasa provoca una rara enfermedad llamada disqueratosis congénita, cuyos síntomas se asemejan a los del envejecimiento prematuro. Por esta razón se han generado numerosos intentos de modificar e incrementar la actividad de esta enzima con el propósito de alargar la vida de las células que presentan baja actividad de la misma. En la actualidad existen proyectos científicos que utilizan este principio como hipótesis para intentar prolongar la vida a través de la estimulación de la telomerasa. Sin embargo, como el envejecimiento es un proceso que obedece a múltiples causas, aún resta mucho camino por recorrer en esta área de

  • ADN glucosilasa : Elimina bases dañadas.
  • AP endonucleasa : Corta el ADN en el sitio AP.
  • Fosfodiesterasa : Elimina nucleótidos no deseados.
  • ADN polimerasa : Rellena la cadena.
  • Ligasa : Une fragmentos reparados.
  1. La reparación de una desaminación implica la participación secuencial deendonucleasa, fosfodiesterasa, ADN glicosilasa, ADN polimerasa y ADN ligasa.2. La formación de dímeros de pirimidina y su reparación de un dímero requiere de unahelicasa.La reparación de una despurinación implica la participación secuencial de endonucleasa,fosfodiesterasa, ADN polimerasa y ADN ligasa e) ¿Conoce otro tipo de daño que pueda sufrir el ADN y que no haya sido representado en los esquemas? Utilizando como base los mecanismos utilizados en las reparaciones anteriores, indique los pasos para su reparación. Un daño adicional es la deaminación de bases. La reparación podría seguir pasos similares a la reparación por escisión 8)- La xerodermia pigmentaria es una enfermedad hereditaria en la que los individuos que la padecen no toleran la luz solar, presentan fibrosis, pigmentaciones y cáncer de piel. Se observó que las células normales irradiadas con luz UV, incorporaban timidina en todo momento (aún cuando no se estaba replicando el ADN). En cambio, las células enfermas irradiadas no incorporaban timidina a menos que estuvieran replicando su ADN. a) ¿A qué se debe la incorporación de timidina en las células normales? b) En base a estos resultados ¿qué defecto presentan las células de las personas que padecen esta enfermedad? c) ¿Qué relación existe entre este defecto y la posibilidad del desarrollo de cáncer de piel?
  • La xerodermia pigmentaria es una enfermedad hereditaria en la que los individuos que la padecen no toleran la luz solar, presentan fibrosis, pigmentaciones y cáncer de piel. Las células normales irradiadas con luz UV, incorporan timidina en todo momento aún cuando no se está replicando el ADN, en cambio, las células enfermas irradiadas no incorporan timidina a menos que estén replicando su ADN, Transferencia horizontal de genes : Transferencia de genes entre organismos diferentes. estos suceden debido a que se trata de la formación de dímeros de pirimidinas y falla su mecanismo de reparación 9) a) ¿Qué mecanismos permiten incrementar la variabilidad génica de una especie? Mutaciones : Cambios en la secuencia de ADN.
  • Recombinación genética : Intercambio de material genético durante la meiosis.
  • Transferencia horizontal de genes ;Transferencia de genes entre organismos diferentes b) ¿Por qué resulta más ventajoso para una especie tener la posibilidad de presentar un amplio espectro de variabilidad génica? La variabilidad génica permite a las especies adaptarse mejor a cambios ambientales y resistir enfermedades. c) ¿Por qué cree Ud que la reproducción sexual está tan extendida en los seres vivos? La reproducción sexual está extendida porque promueve la variabilidad genética, lo que es ventajoso para la evolución. d) ¿Considera Ud. posible el pasaje de información genética por mecanismos naturales desde un organismo dado hasta otro diferente? Fundamente su respuesta citando ejemplos. Sí, es posible a través de mecanismos como la transferencia horizontal de genes , observada en bacterias que pueden adquirir resistencia a antibióticos.