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Histologia Básica
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - PRODUÇÃO DE LÂMINAS PERMANENTES
No dia 03 de dezembro de 2024 foi dado início às etapas para a produção de lâminas permanentes. As lâminas iam ser feitas com órgãos de roedores que eram utilizados em experimentos. A turma foi dividida em grupos e a primeira etapa que realizamos no laboratório foi a refragmentação do tecido que consiste em fragmentar o material em pedaços pequenos e finos. Posterior a isso, foi realizada a lavagem do material. O nosso grupo selecionou um pulmão para a realização da lâmina, foi necessário a refragmentação do órgão em pedaços de no mínimo 0,5cm (Figura 1), e posterior a isso os pedaços foram colocados em cassetes identificados (Figura 2).
Figura 1 - Pulmão de roedor cortado
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Figura 2 - Cassetes nomeados.
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Na próxima etapa, a lavagem do material, todos os cassetes ficaram dentro de um Becker debaixo de água corrente por 1 hora para retirar todos os resíduos indesejados (Figura 3).
Figura 3 - Cassetes em água corrente
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Depois de 1 hora em água corrente, os cassetes foram transferidos para um Becker maior que continha Álcool Amoniacal (Figura 4 e 5) por mais 1 hora.
Figura 6 - Transferência do Álcool Amoniacal para a água corrente
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Figura 7 - Álcool 70%
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Figura 8 - Amostras em Álcool 70%
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
O próximo processo realizado foi para retirar a água existente entre as células do tecido (desidratação). Após 24 horas foi retirado o material do álcool 70% e colocado em outro becker que continha álcool 95% (Figura 9) por 1 hora, após isso o tecido foi submetido a diferentes banhos de álcool absoluto (100%) em etapas consecutivas, com duração de 1 hora em cada:
● Álcool absoluto II (100%) por 1 hora; ● Álcool absoluto III (100%) por 1 hora; ● Álcool absoluto IV (100%) por 1 hora.
Figura 10 - Amostras sendo transferidas para o Xilol II
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
No terceiro dia, foi iniciada a etapa de inclusão na parafina. Esse processo exigiu o derretimento prévio da parafina (Figura 11), seguido pela colocação de uma pequena quantidade no interior de um molde. Em seguida, o tecido foi posicionado dentro da parafina líquida, e rapidamente (para evitar que a parafina endureça) foi colocado um cassete como tampa. Após isso o molde foi completado com mais parafina líquida para garantir a total imersão do tecido. É importante que o tecido fique bem centralizado na parafina para que o próximo processo dê certo.
Figura 11 - Parafina sendo derretida
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Depois desse processo os blocos foram deixados em cima da bancada esfriando por alguns minutos (para não haver choque térmico) e após isso foram colocados na geladeira até a solidificação completa da parafina. O próximo processo foi a retirada da parafina com o tecido do bloco, ficando somente o cassete como suporte para ser colocado no micrótomo (Figura 12). Após esse processo, os blocos foram colocados no micrótomo para serem cortados em uma espessura de 0,5 μm, gerando fitas de parafina contendo os fragmentos de tecido (Figura 13). As fitas obtidas foram colocadas em um recipiente com álcool a 20% (Figura 14) para se esticarem, facilitando o manuseio para as próximas etapas.
Figura 14 - Amostras em álcool 20%
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
As fitas são transferidas para um banho maria para realizar a pescagem (Figura 15), assim fazendo a transferência dos tecidos para as lâminas previamente higienizadas. As lâminas então foram colocadas em uma superfície quente para a fixação do tecido à lâmina e para a evaporação da parafina restante. Figura 15 - Lâminas sendo aquecidas
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
As lâminas então foram submetidas então a uma bateria de coloração (Figura 16 e 17), feita para termos uma melhor visualização das estruturas do tecido, que se conduziu da seguinte maneira: ● Xilol I desparafinar – 6 minutos; ● Xilol II desparafinar – 6 minutos; ● Álcool 95% I desparafinar – 3 minutos; ● Álcool 95% II desparafinar – 3 minutos; ● Lavar em água corrente – 4 minutos; ● Hematoxilina – 10 minutos; ● Lavar em água corrente – 5 minutos; ● Diferenciador 1% (1 parte de HCl p/ 99 partes de álcool 70%) – mergulhar e retirar rapidamente; ● Lavar em água corrente – 10 minutos; ● Álcool 95% - 1 minuto; ● Eosina – 5 minutos; ● Álcool absoluto I – 1 minuto; ● Álcool absoluto II – 1 minuto; ● Álcool absoluto III – 1 minuto; ● Xilol I – 3 minutos; ● Xilol II – 3 minutos; ● Xilol III – 3 minutos;
Figura 16 - Recipientes preparados para a bateria de coloração
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
Figura 19, 20 e 21 - Imagem das lâminas vistas em microscópio
Fonte: Elaborado pelas autoras (2024).
