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Extração e Determinação da Lecitina do Ovo
Tipologia: Notas de estudo
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Docente: Dr. Cláudia M.B. Andrade
Discentes: Arthur César Alves Corso
Camila Kauany da Silva Azevedo
Nayara Tartari
Cuiabá-MT/ Agosto de 2013
A gema do ovo apresenta em sua composição 34% de lipídeos, entre eles a lecitina, que na bioquímica é o termo utilizado como sinônimo de fosfatidilcolina pura. A fosfatidilcolina é um fosfolípideo que tem em sua composição o glicerol, duas moléculas de ácido graxo e, na hidroxila do C3, a colina que é um ácido fosfórico unido a um álcool aminado.
Figura 1. Estrutura molecular da fosfatidilcolina. Fonte: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp? TOPIC_ID=23045.
A fosfatidilcolina é importante na manutenção da integridade das membranas celulares e é vital nos processos biológicos básicos como troca de informações que ocorre entre o DNA e RNA para as proteínas, formação da energia celular e comunicação intracelular ou tradução de sinais. A colina é um precursor da acetilcolina, que é considerado como um neurotransmissor importante no corpo humano.
A extração da lecitina da gema do ovo foi feita através do tratamento com solventes orgânicos, pois, por se tratar de um fosfolipídio é solúvel neste meio e insolúvel em água, o que facilita sua separação dos demais componentes do ovo. Na prática também foi realizada a caracterização dos produtos da hidrólise da lecitina: glicerol, ácidos graxos, colina e fosfato.
OBJETIVOS
Reagentes
Em uma lâmina de vidro, adicionou-se uma gota do filtrado e de lugol (KI +I (^) 2)
concentrado. Cobriu-se com outra lâmina menor e levou-se ao congelador por 10 minutos. O produto da reação entre o iodo e a colina foi examinado ao microscópio, que precipita na forma cristalina a temperaturas menores que 15° C.
Detecção do fosfato
Em um tubo de ensaio, transferiu-se 3 mL do filtrado e a ele adicionou-se n1 mL da solução de molibdato de amônio a 2,5 % em ácido sulfúrico 5 M. O tubo foi submergido em um béquer contendo água previamente fervida. O produto da reação é o fosfomolibdato de amônio.
Extração
A extração da lecitina do ovo foi realizada com base na insolubilidade dos lipídios em água e solubilidade em solventes orgânicos. Esta característica permite sua separação das proteínas, carboidratos e outros componentes da gema do ovo. Primeiramente, utilizou-se a acetona que solubilizou todos os lipídeos presentes na amostra. Como a faixa de hidrofobicidade dos lipídeos é relativamente grande, foi necessário o uso de mais um solvente para a separação da lecitina dos demais lipídeos. O segundo solvente foi o clorofórmio que tem maior apolaridade que a acetona.
Saponificação e hidrólise ácida da lecitina
Ao adicionar hidróxido de sódio no extrato obtido, utilizando o etanol como catalisador, ocorreu a saponificação da lecitina. Na figura 2, encontra-se a forma geral de como ocorre uma reação de saponificação. No caso da lecitina, os produtos gerados são o glicerol, ácidos graxos e a colina.
Figura 2. Reação de saponificação Fonte: http://br.dir.groups.yahoo.com/group/quimicavida/message/
Durante o aquecimento ocorreu a formação de espuma na superfície do líquido, evidenciando a reação. A formação dos ácidos graxos foi observada pela separação das fases oleosa e aquosa.
Detecção da Colina
A detecção da colina foi feita adicionando-se uma gota de lugol concentrado á uma gota do filtrado obtido no procedimento anterior. À temperaturas inferiores a 15° C, o produto da reação entre a colina e o lugol forma precipitados coloridos cristalinos (cristais de Florence) que puderam ser observados no microscópio.
Detecção do fosfato
Como produto da hidrólise da lecitina tem-se também o fosfato. Para determinar a presença do fosfato foi utilizado molibdato de amônio. A reação aconteceu da seguinte forma:
7H3PO 4 + 12(NH4) (^) 3Mo7O 24 + 51H+^ 7(NH4) (^) 3PO4· 12MoO 3 + 51NH 4 +^ + 36H (^) 2O
O produto formado é o fosfomolibdato de amônio que possui coloração amarela, porém, a coloração não se desenvolveu.
Obteve-se uma quantidade relativamente favorável de lecitina através da extração da com solventes orgânicos, indicando que o clorofórmio é um bom extrator de fosfatidilcolina.
Como produto da hidrólise obteve-se ácidos graxos, glicerol, colina e fosfato. Destes, somente a presença do fosfato não foi observada. Como foi possível a determinação dos outros produtos, erros quanto à execução do método de detecção de fosfato podem estar envolvidos.
MASINI, Jorge Cesar. Demonstrando os fundamentos, potencialidades e limitações da análise por injeção sequencial. Química Nova. Vol. 31 nº 3. São Paulo, 2008. Disponível em: http://www.scielo.br/scielo.php? pid=S0100-40422008000300040&script=sci_arttext
LECITINA. Disponível em: http://www.cuidar.com.br/lecitina
LIPÍDEOS. Disponível em: http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/ trabalhos_pos2003/const_microorg/lipideos.htm
