L3 génétique moléculaire techniques d’analyse de laboratoire Dr SEMMAME
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La chromatographie
1— Définition
La chromatographie, méthode d’analyse physico-chimique, sépare les constituants d’un mélange (les
solutés) par entraînement au moyen d’une phase mobile (liquide ou gaz) le long d’une phase stationnaire
(solide ou liquide fixé), grâce à la répartition sélective des solutés entre ces deux phases. Chaque soluté est
donc soumis à une force de rétention exercée par la phase stationnaire et une force de mobilité due à la phase
mobile.
Phase stationnaire : phase fixe soit sur la surface intérieure d’une colonne soit sur une surface plane.
Phase mobile : phase qui se déplace à travers la phase stationnaire, en entraînant les analytes. La phase
mobile ne doit pas interagir avec la phase stationnaire, mais uniquement avec les analytes.
2— Principe
Le principe repose sur l’équilibre de concentrations des composés présents entre deux phases en contact : la
phase stationnaire (emprisonnée dans la colonne) et la phase mobile qui se déplace. La séparation est
basée sur l’entraînement différentiel des constituants présents dans la colonne.
Plus une espèce chimique est soluble dans l’éluant et moins elle est adsorbée par la phase fixe, Plus elle est
rapidement entraînée par l’éluant et plus elle migre haut.
3— Application
La chromatographie peut être analytique , visant à l’identification des substances présentes ou préparatifs,
visant à la séparation des constituants d’un mélange. La chromatographie analytique est largement utilisée à
l’échelle du laboratoire, la chromatographie préparatifs est rarement utilisée sur de grandes quantités en
raison de son coût et de sa lenteur.
4— La révélation
La chromatographie est une technique de séparation et d’identification d’espèces chimiques
présentes dans un mélange.
- Dans le cas d’espèces colorées, la technique de chromatographie est couplée à la spectroscopie.
- Dans le cas d’espèces incolores présentes dans le mélange, la révélation, effectuée après l’élution,
consiste à faire apparaître les tâches correspondant aux espèces incolores. Deux types de méthodes
peuvent être utilisés :
4-1 — la révélation aux UV
Si la plaque comporte un révélateur UV, la plaque, soumise à des rayons UV, devient fluorescente : une
espèce incolore absorbant les rayons UV donne alors une tache sombre sur un fond clair.
4-2- les méthodes chimiques
- la plaque peut être plongée dans une solution de permanganate de potassium : une espèce incolore qui
réagit avec le permanganate donne une tache blanche ou jaune sur un fond rose.
- une autre technique de révélation peut se faire avec des vapeurs de diiode.
