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Actividad enzimática sobre la catalasa y amilasa
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
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¡No te pierdas las partes importantes!
Informe de biología: Identificación de enzimas María José herrera Elena Monroy Milagros Oñate Yennifer Pérez Valeria Gómez Andrés Rivas Docente: Sra. Yohana Mangones Universidad de Córdoba Facultad de ciencias de la salud Departamento de Bacteriología Montería – Córdoba 2020
Introducción En el presente informe se da a conocer la temática relacionada con la identificación de proteínas y enzimas, las proteínas que son las que conforman a una de las moléculas más importantes en el organismo ya que esta cumple un gran número de funciones, estas moléculas que en su estructura están presentes aminoácidos que nuestro cuerpo necesita para el para el crecimiento y mantenimiento de nuestras células y tejidos. por otra parte, las enzimas que son proteínas que actúan como catalizadores biológicos ya que estas son de naturaleza orgánica que son producidas por las células para acelerar las reacciones químicas que se dan en el proceso metabólico de los organismos.
Objetivos 1- Al finalizar el laboratorio cada estudiante será capaz de interpretar los mecanismos subyacentes de la acción enzimática sobre sustratos específicos. 2- Al finalizar la práctica cada estudiante será capaz de analizar los mecanismos subyacentes de la actividad de la catalasa en tejido animal y vegetal.
-Sabiendo que la catalasa es un enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos: La catalasa es una enzima de la más abundante en la naturaleza. Cataliza la disminución del peróxido de hidrógeno, el agua oxigenada es el sustrato y al entrar en contacto con la enzima inmediatamente empieza la reacción en forma de pequeñas burbujas, protegiendo la hemoglobina del peróxido de hidrogeno que se genera.
Actividad N1: Hidrolisis del almidón Materiales y reactivos*
Análisis de resultados En los resultados de la prueba de hidrolisis del almidón podemos observar las reacciones de las sustancias empleadas frente a los diferentes reactivos, en el tubo 1 y 3 tenemos que el tubo 1 tiene un color azul lo que representa que no se generó reacción positiva del Fehling contrario del tubo 2 donde si hubo reacción positiva del Fehling por lo que se observa un color más oscuro en la muestra y que indica que se dio hidrolisis del almidón, ahora observamos los tubos 2 y 4 donde el reactivo es lugol y se analiza los resultados del tubo 2 donde no había saliva y se observa un color un poco más café que indica que se formó el complejo yodo almidón y el tubo 2 donde si había saliva vemos que no se formó el complejo yodo almidón lo que indica que hubo hidrolisis positiva del almidón.
Actividad N2: Acción enzimática de la amilasa Materiales y reactivos*
pH 4 se observa un cambio de coloración pero se le ve precipitado en el fondo de la sustancia no es el pH adecuado para la enzima, para pH 7 hay una coloración brillante y no se observó precipitado de color oscuro siendo este un pH óptimo para la actividad de la enzima no hay presencia de almidones y en el pH 10 se observa una coloración más opaca qué en el pH 10 y también tendió a tener precipitados en el fondo del tubo. La tercera parte se analizó la especificidad de la enzima en tres tubos de ensayo se puso un mililitro de la enzima es decir la saliva luego, agregaron a cada tubo una sustancia diferente, al primer tubo se agregó 1 ml almidón, en el segundo tubo se le agregó un mililitro de triptosa y para el tercero un mililitro de lactosa. El objetivo de ver cómo la enzima trabaja en las diferentes sustancias utilizadas para este experimento se agita cada uno de los tubos y se deja reposar por 5 minutos, en el tubo del almidón se agrega Lugol, en el tubo de la triptosa se pondrá Diurex para determinar si hay proteínas y para el tubo que contiene lactosa se adicionará Fehling A Fehling B para determinar la presencia de carbohidratos este tubo se somete a calentamiento. Los resultados obtenidos fueron que, para el tubo que contenía Lugol su presencia de proteínas con una coloración morada, el tubo que contenía el almidón se obtiene que la acción enzimática fue completa y la de Fehling A y Fehling B se obtuvo una coloración rojo ladrillo que determinó la presencia de carbohidratos.
Análisis de resultados En esta prueba se realizan tres procedimientos respectivamente; prueba para determinar la acción de la encima a diferentes temperaturas, en el primer tubo a temperatura de 92 ° la coloración fue oscura que indica la presencia de los almidones por lo tanto la acción de la encima fue nula procedemos con el tubo a 0° donde se da una coloración naranja lo que indica la acción positiva de la enzima por la ruptura del almidón y para el tubo a 37 ° la actividad enzimática fue muy positiva y la coloración adecuada por lo que se determina esta la condición más óptima para el trabajo de la encima. Para la segunda parte analizamos el efecto del pH sobre, para el caso de la solución con pH 4 se observa un cambio de coloración con precipitados oscuros que indican una acción no muy buena para la encima , para el tubo con pH 7 el cambio de coloración es total y no se observaban precipitados oscuros lo que indica una muy buena reacción y para el pH 10 también se presenta un cambio de coloración pero observamos una disminución en la nitidez de la coloración y algunos precipitados oscuros lo que indica que para esta prueba la mejor condición para la acción de la enzima es a pH 7.y para esta última practica se determina la especificad de la encima, para el primer tubo con un agregado de almidón y lugol la encima presenta una especificad o una acción completa sobre los almidones, para el segundo tubo se agrega a la encima triptosa y reactivo Biuret para determinar la presencia de proteína y analizamos una coloración violeta que indica la presencia de proteínas y para el tercer tubo que contiene lactosa y se le agrega reactivo Fehling A y B y luego que se lleva a temperatura 0° se evidencia un color naranja que representa presencia de carbohidratos ,por lo que se concluye que la encima trabaja únicamente con el almidón.
Procedimiento del video: Actividad enzimática sesión 1-Catalasa Para la siguiente actividad, se utilizaron los siguientes reactivos, peróxido de hidrógeno, buffer pH 4, buffer pH 7 y buffer pH 10, los materiales a emplear en esta práctica encontramos Una plancha de calentamiento, vaso de precipitado, bisturí, espátula, tubos de ensayo y como muestras se utilizaron una manzana, hígado de res y corazón, con el fin de analizar cuál es el tejido con mayor acción en la catalasa, se establecieron una determinada cantidad de las muestras de los tejidos anteriormente mencionados la cual fue de 0,5g, luego le añadió cada uno 1 ml, de peróxido de hidrogeno, lo siguiente fue agregar el peróxido de hidrógeno a cada una de los tubos de ensayos. Se observó efervescencia en todos lo cual es una reacción de la catalasa que produce agua más oxígeno, pero, se observa mayor efervescencia en el hígado de res. Se siguieron los siguientes dos experimentos con el hígado de res por tener mayor efervescencia, en el siguiente experimento que se trataría del segundo se tratara de observar cual es el pH óptimo para la actividad enzimática, esto se realizará con buffers de diferentes pH para cada uno de los buffer se tomará 1mL y respectivamente se le agregara a los diferentes tubos de ensayos que contienen el hígado de res al primer tubo se le sumo la adición de buffer de pH 4, al segundo buffer de pH 7 y al tercer tubo buffer de pH 10, luego se dejó diez minutos y finalmente le hicieron la prueba con el peróxido de hidrógeno, según la obtención de los resultados se obtuvo que la acción enzimática de la catalasa su óptima condición para su actividad está en el pH 7, a esta le siguió pH 10 y por último donde las condiciones no son tan óptimas en pH 4. El tercer experimento que se observó fue con el objetivo de determinar a cuál temperatura trabaja mejor la enzima catalasa se utilizó hígado de res para seis tubos de ensayo tres de ellos contenían peróxido de hidrógeno y los otros tres contenían el hígado de res, dos tubos de ensayos que contenían peróxido de hidrogeno y el hígado de res se colocaron a una temperatura de cero
grados, los otros dos tubos que contenían respectivamente lo mismo que los primeros se expusieron a una temperatura de 37° C y por último los otros dos tubos restantes al igual que los otros contenían peróxido de hidrógeno e hígado de res se sometieron a una temperatura de 0°C, 37°C y 92°C, luego se determinó que la temperatura para una mejor actividad catalasa es de 37°C, siguiéndole 0°C y 92°C donde la actividad catalasa fue nula.
Procedimiento casero Acción de la renina sobre la caseína de leche Tubo N Procedimiento y Obtención de resultados Tubo A (Leche + Renina +Vinagre)* (^) En un recipiente de vidrio agregamos 5 ml de leche, en otro recipiente diluimos la pastilla renina y adicionamos 10 gotas de esta a la leche, luego adicionamos 10 gotas de vinagre, pudimos observar inmediatamente que al agregar el vinagre la leche inmediatamente empezó su proceso de coagulación. Después de unos minutos se puede observar una gran cantidad de coágulos formados en el recipiente. Tubo B (Leche + Renina) En un recipiente de vidrio adicionamos 5 ml de leche, con un gotero al recipiente con la leche adicionamos 10 gotas de renina, mezclamos suavemente y pudimos empezar a observar la coagulación que se producía en ella, la leche cortada se podía observar en las paredes del recipiente. Después de algunos minutos se pudo observar una coagulación mucho mayor. Tubo C (Leche + Rennina + sometimiento al calor) (^) En un recipiente de vidrio adicionamos 5 ml de leche, con gotero luego agregamos 10 gotas de renina a la leche, en este punto pequeños coágulos empezaron a aparecer por las paredes del recipiente, luego sometimos la mezcla a calentamiento y pudimos observar que los coágulos se hicieron mayores y estos subieron por las paredes de recipiente.
Actividad de la catalasa: papa e hígado reaccionan a agua oxigenada. Tubos Procedimiento y resultado obtenidos Hígado de res En un recipiente de vidrio adicionamos un pequeño trozo de hígado de res, luego, con un gotero agregamos 10 gotas de peróxido de hidrogeno (agua oxigenada) y observamos como se empiezan a realizan la formación de burbujas, es decir pudimos notar una efervescencia bastante elevada Papa En un recipiente de vidrio adicionamos un pequeño trozo de papa y luego agregamos 5 gotas de peróxido de hidrogeno y observamos como comienza la efervescencia y la formación de pequeñas burbujas como se puede notar en la imagen adjunta
