BLOQUE 4: CITOESQUELETO:
Introducción:
Los componentes del citoesqueleto son microtúbulos (tubulina),
microfilamentos (actina) y filamentos intermedios (tienen una estructura
común en todas la células pero distinta composición).
Para observar el citoesqueleto al microscopio se utiliza microscopía de
fluorescencia para poder reconocer los diferentes componentes del
citoesqueleto:
•Inmunofluorescencia indirecta (tubulina): utilizamos en primer lugar un
anticuerpo antitubulina que se una a ésta. Para detectar este anticuerpo se
añade un anticuerpo secundario unido a un fluorocromo que se va a unir al
primer anticuerpo.
•Fluorescencia (actina): se añade faloidina conjugada con un fluorocromo
para que paralice y estabilice a los microfilamentos de modo que sean
observables. La faloidina se saca de la amanita faloides (seta) y puede ser
mortal por su efecto estabilizador de microfilamentos.
•Contratinción (núcleo): fluorocromo Hoechst 33258.
Normalmente el citoesqueleto se puede observar a microscopio óptico de
fluorescencia.
Funciones:
1. Estuctura y soporte
2. Transporte intracelular
3. Procesos de contracción y motilidad
4. Organización espacial: dependiendo de la localización y estructuración
del citoesqueleto, la célula tiene una forma u otra.
TEMA 15: MICROTÚBULOS:
1) Composición química:
Están compuestos por un heterodímero llamado tubulina, éste se compone de
los monómeros alfa- y beta-tubulina. Ambos monómeros tienen estructuras
globulares y se unen entre sí mediante enlaces no covalentes.
2) Ultraestructura:
Son cilindros huecos con un diámetro exterior de 25 nm, un espesor de pared
de 4nm y de longitud variables. Un microtúbulo está compuesto por 13
protofilamentos. Un protofilamento es una hilera de subunidades de alfa y
beta tubulina de manera alterna. (diámetro de las subunidades de tubulina =
4nm). Los microtúbulos presentan un extremo más y uno menos que NO son
positivo y negativo. El extremo más presenta alfa-tubulina y el menos beta-
tubulina.
En el ensamblaje in-vitro podemos observar como se polimerizan y
despolimerizan estas estructuras. El microtúbulo va añadiendo subunidades
hasta que alcanza un equilibrio (fase de plató), alcanzado el equilibrio, el mt
deja de crecer. Para ello polimeriza por un lado mientras depolimeriza por el
otro. En el extremo más tanto la despolimerización como la polimerización es
más rápida.
3) Inestabilidad dinámica:
Al ir polimerizándose el microtúbulo la tubulina se va uniendo a GTP, cuando
éstas están unidas a GTP, el mt es ás estable que cuando se hidroliza y están
unidas a GDP. El equilibrio de los mt aparece cuando hay un equilibrio entre la
tubulina libre y la polimerizada, cuando la reserva de tubulina es muy baja,
