¡Descarga EXAMEN PRÀCTIQUES y más Ejercicios en PDF de Bioquímica solo en Docsity!
EXAMEN CURS 2012-
- Realitza els següents càlculs:
a) Preparem mostra per carregar a un gel d ’ electroforesi SDS-PAGE. Quina quantitat de volum de tampó de càrrega x5 has d ’ afegir si tens 15 μ L de mostra? (0.5 punts)
b) Quin és el percentatge de saturació final de sals en una precipitació que es realitza barrejant 10 mL de mostra i 5 mL de sulfat amònic saturat? (0.5 punts)
c) Com preparem 850 mL de tampó d ’ elució d ’ electroforesi si tenim una mare de tampó d ’ elució x10? (0.5 punts)
d) Tenim un substrat a 0,8 mM i volem preparar 2 mL d ’ una solució de substrat 150 μ M amb tampó d ’ activitat Tris-HCl pH=7,5. Com la prepararies? (0.5 punts)
- A partir dels següents resultats d ’ electroforesi:
Proteïna Pes Molecular
A. β-lactoglobulina 18300 Da
B. β-galactosidasa 116 kDa
C. Lactat deshidrogenasa 35 kDa
D. Lisozim 14.7 kDa
E. Albúmina Sèrica Bovina 66200 Da
F. Ovoalbúmina 45000 Da
G. Mioglobina 17200 Da
H. RNasa A 13.7 kDa
I. Aprotinina 6500 Da
J. Miosina 200 kDa
a) Assigna a cada proteïna del llistat a les bandes que es veuen en el carril A del següent gel d ’ electroforesi SDS-PAGE. Dibuixa en el carril C on hauries d ’ observar una proteïna de 90 kDa (1 punt)
b) Fas una cromatografia de gel filtració de la barreja de proteïnes de l ’ exercici anterior. Tenint en compte que el marge de fraccionament de la reïna utilitzada és de 15.000 a 50.000 Da, dibuixa el cromatograma que esperaries obtenir. Indica en el gràfic on són cadascuna de les proteïnes de la barreja. (2 punts)
Carril A Carril B Carril C
- Es fa un estudi de l ’ activitat de la polifenol oxidasa (PPO) de còrtex de patata. Aquest enzim catalitza l ’ oxidació d ’ un difenol a la seva quinona corresponent.
L ’ assaig es realitza barrejant en una cubeta d ’ espectrofotòmetre: 425 μ L de solució de prolina 5 mg/mL en tampó fosfat oxigenat (actua com un agent estabilitzador de l ’ enzim) 425 μ L de solució de catecol 2 mg/mL en tampó fosfat oxigenat (el catecol és un difenol) 50 μ L d ’ extracte de patata en tampó fosfat oxigenat (conté una concentració de PPO de 5 μ g/mL)
Ràpidament, es mesura l ’ absorbància a 526 nm i s ’ anota el valor que presenta l ’ espectrofotòmetre cada 10 segons i fins a 1 minut de temps.
a) Com prepararies el blanc d ’ aquesta reacció? (0,5 punts)
b) Descriu de manera ben detallada com es determina la velocitat (en ua/segon) i la corresponent activitat específica de l ’ enzim (1 punt)
c) Si l ’ objectiu fos comprovar si aquest enzim segueix una cinètica de tipus Michaelis-Menten, com dissenyaries l ’ experiment? Fes un esquema el més detallat possible (1,5 punts)
