P.I.M. Genética y Microbiología: Microbiología 1
Práctica 1. MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN
Práctica 1a. Preparación de medios de cultivo bacteriológicos.
Material
- Granatario.
- Botes con los diferentes componentes del medio de cultivo.
- Probetas y vasos de precipitado.
- pHmetro digital.
- Agitador magnético (con placa calefactora) e imanes recubiertos de teflón.
- Matraces o tubos de ensayo.
- Algodón graso.
- Placas de Petri estériles.
- Los medios de cultivo a preparar son el caldo nutritivo y el agar nutritivo, cuya composición es
la siguiente:
Caldo nutritivo:
Peptona 10 g
Extracto de levadura 5 g
Cloruro sódico 5 g
Agua destilada 1000 ml
pH 7,2
Agar nutritivo:
Caldo nutritivo con 15 g/l de agar
Protocolo
- Calcular las cantidades necesarias de cada componente en función del volumen de medio a
preparar (preparar 100 ml).
- En una probeta, medir el volumen de agua destilada necesario. Añadir un poco de esta agua a
un matraz o vaso de precipitado (en función de si se va a preparar agar o caldo nutritivo,
respectivamente).
- Pesar cada uno de los componentes (excepto el agar) e irlos añadiendo al recipiente con el
agua. Añadir el resto del agua y agitar hasta disolución completa.
- Ajustar el pH del medio utilizando HCl 1N o NaOH 1N.
- En el caso del agar nutritivo, añadir el agar al caldo ya preparado y fundirlo por ebullición.
- Repartir los medios de la siguiente forma:
Caldo nutritivo: en tubos de ensayo (5 ml por tubo, con una jeringuilla).
Agar nutritivo para placa: dejarlo en el matraz y taparlo con algodón graso.
Agar nutritivo para tubos inclinados: en tubos de ensayo (5 ml por tubo, con una
jeringuilla). Antes de repartir este medio es muy importante asegurarse de que el agar está
totalmente fundido.
- Esterilizar los medios en el autoclave (121 °C, 15 min.). Los recipientes de rosca no deben
estar herméticamente cerrados (dejar un cuarto de rosca abierto).
- Una vez estériles, los tubos con agar nutritivo se dispondrán de forma inclinada para su
solidificación. El agar nutritivo esterilizado en un matraz se repartirá de forma aséptica en
placas de Petri estériles que se dejarán solidificar en posición horizontal.
