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UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR
CURSOS BÁSICOS DE CIENCIAS DE LA SALUD
CURSO: BIOQUÍMICA
PROFESOR: RAMIREZ CRUZ, FRANCISCO JAVIER MARIA
SECCIÓN: 3I
INFORME DE PRÁCTICAS
PRÁCTICA N°: 1
TÍTULO:
INTEGRANTES:
➢ CACHA PATRICIO, MARGOT RENE VICTORIA
➢ GASTIABURU CASTILLO, PRISCILLA KATHERINE
➢ VASQUEZ CORONADO, JOAN MANUEL
➢ TAIPE HANCCO, JADE JHAZIRA
➢ VELASCO HUACHILLO, CARRIE STEPHANI
HORARIO DE PRÁCTICA
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 26/08/
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 08 /09/
LIMA – PERÚ
ESPECTROFOTOMETRÍA
INTRODUCCIÓN
Durante muchos años, el color se ha utilizado para ayudar a identificar sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano con otros detectores de radiación, se puede estudiar la absorción de sustancias, no solo en el espectro visible, sino también en las regiones ultravioleta e infrarroja. La espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de moléculas. Asimismo, se conoce como espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. Por otro lado, se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza, ya sean contaminantes, biomoléculas, entre otros y estado de agregación (sólido, líquido, gas), además las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna, permitiendo que se dé inicio al ciclo vital de muchos organismos. Para esta técnica experimental se empleará el espectrofotómetro, es un instrumento que sirve para medir en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones, también es usado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Asimismo, tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromático a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. En cuanto a la ley de Beer y Lambert es conocida también como ley de Beer o ley de Beer-Lambert- Bouguer, fue descubierta de diferentes formas e independientes en primero por el matemático y astrónomo francés Pierre Bouguer, luego por el filósofo y matemático alemán, Johann Heinrich Lambert en 1760 y por último el físico y matemático también alemán, August Beer en el año 1852. Esta ley es una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado, por lo que está ley será esencial para entender y para el empleo inteligente de la metodología de la absorción espectrofotométrica. Asimismo, el uso o aplicación más importante es la determinación de concentraciones desconocidas de soluciones de sustancias que absorben en la región U.V- visible.
b) Aplicación:
- Análisis Cuantitativo y cualitativo de una sustancia
- Estandarización de colores de ciertos materiales
- Determinación de impurezas en alimentos reactivos
- Detección de contaminación
- Determinación de la variedad de longitudes a través de onda, rayos X, rayos gamma e infrarrojo lejano.
- Producir las líneas espectrales y poder medir las longitudes de las ondas y las intensidades.
- Su uso es importante para la investigación científica en las áreas de la química, biología y física, porque fortalece y actualiza los estudios de la espectrometría, como una técnica potente y con diversos usos. c) Componentes:
- Monocromador: aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática. Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.
- Fuente de luz: La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos.
- Cubetas: Cubetas y portacubetas (compartimiento de muestra. cuarzo (luz ultravioleta) plano, de plástico (colorimetría, empleando luz visible). son redondas o rectangulares y están construidas de vidrio, cuarzo, sílice fundida o plástico. Es importante que el material de la cubeta no absorba luz en las longitudes de onda en las que se
está midiendo. Debido a que el vidrio óptico absorbe luz por debajo de los 350 nm, se utilizan cubetas de cuarzo para trabajar en el rango UV.
- Detector: detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos: los que responden a fotones; y los que responden al calor
- Dispositivo de enfoque
- Filtro de luz
- Dispositivo de visualización d) Funcionamiento: Según García 2018, menciona que consiste en hacer pasar este rayo de luz a través de un monocromador, luego, la luz seleccionada pasa a través de la cubeta de absorción, que contiene la muestra que se está analizando. Cuando la luz pasa a través de la muestra, parte del espectro es absorbido por la misma. La capacidad de absorción de la radiación depende de la estructura de las moléculas, siendo definida por su grupo funcional. La luz no absorbida por la muestra sale de la cubeta y llega un fotodetector, que registra la transmitancia. Cuando la muestra se encuentra en el aparato se coloca lo suficientemente caliente y emite una luz visible en uno o varios puntos del espectro electromagnético. Luego se dividen las olas de luz que entra en los colores que muestran sus componentes, para luego emitir cual es el material que crea la luz. El diseño de un espectrómetro sencillo se basa en una sola pantalla, la rejilla de difracción y el fotodetector. La pantalla ayuda a que el haz de luz llegue al interior del espectrómetro, ésta pasa por medio de una red de difracción, permitiéndonos medir el espectro de absorción completo de una sustancia.
que contiene a la muestra) y ε es el coeficiente de absorción molar (propia de cada sustancia). Teniendo la absorbancia de la muestra, el largo de la cubeta y la constante, podemos despejar la concentración de nuestra muestra. 2.2. MÉTODOS 2.2.1. PROCEDIMIENTO 2.2.1.1. Solución azul de metileno 1mg/dL: Pesar en la balanza analítica 1mg de azul de metilo. Mezclar 1mg/dL de azul de metileno previamente pesados en 100mL de agua destilada. Agitar hasta que se disuelva completamente. 2.2.2. PARTE EXPERIMENTAL 2.2.2.1. PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Se mezcló 1mL de solución de azul de metileno 1mg/dL con 4mL de agua destilada en un tubo de ensayo. Luego, se procedió a hacer lecturas en el espectrofotómetro a diferentes longitudes de onda (nm) para determinar el pico con máxima absorción en función a las longitudes de onda. El mayor pico de absorbancia fue obtenido a una longitud de onda de 660 nm. Longitud de onda (nm)
Absorbancia 0.160 0.195 0.230 0.350 0.460 0.485 0.380 0.
Para obtener la curva de calibración se preparó en tubos de ensayo las siguientes soluciones: Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Volumen de azul de metileno 1mg/dL 0.5mL 1.0mL 2.0mL 3.0mL 4.0mL Volumen de agua destilada 4.5mL 4.0mL 3.0mL 2.0mL 1.0mL Total 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL Se mezcló y se dio lectura en el espectrofotómetro. Los valores de absorbancia obtenidos se registraron en una tabla y posterior a ello se determinó la curva de calibración. 2.2.2.2. Discusión Según la ley de Lambert y Beer el nivel de absorbancia es proporcional a la longitud de onda, por ello al encontrar que, el mayor pico de absorbancia fue obtenido a una longitud de onda de 660 nm, se concluye que la longitud de onda (nm) adecuada para obtener una mayor absorbancia de azul de metileno es a 660 nm.
V. REFERENCIAS
Salazar J. y Salazar Y. (2018). Guía de prácticas de Bioquímica. 3ra Ed. Lima, Perú: Universidad Científicas del Sur. García R. (201 8 ). Instrumentos que revolucionaron la química: la historia del espectrofotómetro. Avances en Química, 13(80 3), 79-82. Recuperado de: https://ri.conicet.gov.ar/handle/11336/ Roca P, Oliver J, Rodriguez A. Bioquímica Técnicas y métodos [Internet]. España: Ed. Hélice; 2003 [Revisado 06- 09 - 2021]. Disponible en: https://acortar.link/n7LNgI Rodriguez R. (2018) Mantenimiento de laboratorio: Espectrofotómetro. Rekner.
