Docsity
Docsity

Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes

Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity


Consigue puntos base para descargar
Consigue puntos base para descargar

Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium


Orientación Universidad
Orientación Universidad


Pdf per treball metood, Guías, Proyectos, Investigaciones de Enfermería

Asignatura: Actuació en situació d'emergència extrahospitalària, Profesor: , Carrera: Infermeria (Gimbernat), Universidad: UAB

Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones

2013/2014

Subido el 29/04/2014

uryy18
uryy18 🇪🇸

3

(4)

3 documentos

1 / 4

Toggle sidebar

Esta página no es visible en la vista previa

¡No te pierdas las partes importantes!

bg1
206 64
Rev Esp Quimioter 2010;23(4):206-209
Rapid identification of
Mycobacterium
tuberculosis
complex from broth cultures by
immunochromatographic assay
SUMMARY
Background: Recently, a simple and rapid commercial
assay (BD MGIT TBc ID) has been developed using a monoclonal
antibody anti-MPT64 for the differentiation of Mycobacterium
tuberculosis complex from other mycobacteria by
immunochromatography.
Methods: We evaluate in this work the clinical usefulness
of the test for the identification of 51 strains of M. tuberculosis
complex and 24 strains of other mycobacteria belonging to 14
different species, compared with the method of hybridization
with DNA probes.
Results: Immunochromatographic method performance
was excellent, with sensitivity, specificity, positive and negative
predictive values of 98, 100, 96.1, and 98.7%, respectively.
Conclusions: These results indicate that
immunochromatographic assay can be safely used for rapid
identification of M. tuberculosis complex in combination with
culture in liquid media. The test is extremely simple, provides
results in just 15 minutes, requires no complex equipment or
specialized personnel and may be a good alternative to
molecular methods, especially in small laboratories.
Key words:
Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis
, mycobacte-
ria, tuberculosis, immunochromatography
INTRODUCCIÓN
La utilización de medios de cultivo líquidos para el
diagnóstico de tuberculosis ha reducido el tiempo de detección
de Mycobacterium tuberculosis1. Sin embargo, desde el punto
de vista clínico, es muy importante la diferenciación del
complejo M. tuberculosis de otras micobacterias con el fin de
aplicar cuanto antes un tratamiento adecuado y prevenir la
diseminación de la enfermedad2. La identificación de
micobacterias es compleja, pero la aparición de los métodos de
RESUMEN
Introducción: Recientemente, se ha desarrollado un
sencillo y rápido método comercial (BD MGIT TBc ID) que
emplea un anticuerpo monoclonal anti-MPT64 para la
diferenciación del complejo Mycobacterium tuberculosis de
otras micobacterias por inmunocromatografía.
Métodos: Evaluamos en este trabajo la utilidad clínica del
método para la identificación de 51 cepas del complejo M.
tuberculosis y 24 cepas de otras micobacterias pertenecientes a
14 especies diferentes, comparándolo con el método de
hibridación con sondas de ADN.
Resultados: El resultado del método inmunocromatográfico
fue excelente, con una sensibilidad, especificidad y valores
predicitivos positivo y negativo de 98, 100, 96,1 y 98,7%,
respectivamente.
Conclusiones: Estos resultados indican que el método
inmunocromatográfico puede ser usado con seguridad para la
identificación rápida del complejo M. tuberculosis en
combinación con el cultivo en medios líquidos. El método es
extremadamente sencillo, ofrece resultados en sólo 15
minutos, no requiere equipamiento complejo ni personal
especializado y puede ser una buena alternativa a los métodos
moleculares, especialmente en pequeños laboratorios.
Palabras clave:
Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis
, mico-
bacterias, tuberculosis, inmunocromatografía,
Identificación rápida en cultivos líquidos del
complejo Mycobacterium tuberculosis mediante
un método inmunocromatográfico
Servicio de Microbiología. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cádiz.
Pedro García-Martos,
Lidia García-Agudo,
María José Rodríguez-
Jiménez,
Manuel Rodríguez-Iglesias.
Correspondencia:
Dr. Pedro García-Martos
Av. Ana de Viya 13, 2-B. 11009 Cádiz
Tfno: 956-003068
Fax: 956003081
Originales
pf3
pf4

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Pdf per treball metood y más Guías, Proyectos, Investigaciones en PDF de Enfermería solo en Docsity!

Rapid identification ofMycobacterium

tuberculosis complex from broth cultures by

immunochromatographic assay

SUMMARY

Background: Recently, a simple and rapid commercial assay (BD MGIT TBc ID) has been developed using a monoclonal antibody anti-MPT64 for the differentiation of Mycobacterium tuberculosis complex from other mycobacteria by immunochromatography. Methods: We evaluate in this work the clinical usefulness of the test for the identification of 51 strains of M. tuberculosis complex and 24 strains of other mycobacteria belonging to 14 different species, compared with the method of hybridization with DNA probes. Results: Immunochromatographic method performance was excellent, with sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of 98, 100, 96.1, and 98.7%, respectively. Conclusions: These results indicate that immunochromatographic assay can be safely used for rapid identification of M. tuberculosis complex in combination with culture in liquid media. The test is extremely simple, provides results in just 15 minutes, requires no complex equipment or specialized personnel and may be a good alternative to molecular methods, especially in small laboratories. Key words:Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, mycobacte- ria, tuberculosis, immunochromatography

INTRODUCCIÓN

La utilización de medios de cultivo líquidos para el diagnóstico de tuberculosis ha reducido el tiempo de detección de Mycobacterium tuberculosis^1. Sin embargo, desde el punto de vista clínico, es muy importante la diferenciación del complejo M. tuberculosis de otras micobacterias con el fin de aplicar cuanto antes un tratamiento adecuado y prevenir la diseminación de la enfermedad 2. La identificación de micobacterias es compleja, pero la aparición de los métodos de

RESUMEN

Introducción: Recientemente, se ha desarrollado un sencillo y rápido método comercial (BD MGIT TBc ID) que emplea un anticuerpo monoclonal anti-MPT64 para la diferenciación del complejo Mycobacterium tuberculosis de otras micobacterias por inmunocromatografía.

Métodos : Evaluamos en este trabajo la utilidad clínica del método para la identificación de 51 cepas del complejo M. tuberculosis y 24 cepas de otras micobacterias pertenecientes a 14 especies diferentes, comparándolo con el método de hibridación con sondas de ADN.

Resultados: El resultado del método inmunocromatográfico fue excelente, con una sensibilidad, especificidad y valores predicitivos positivo y negativo de 98, 100, 96,1 y 98,7%, respectivamente.

Conclusiones: Estos resultados indican que el método inmunocromatográfico puede ser usado con seguridad para la identificación rápida del complejo M. tuberculosis en combinación con el cultivo en medios líquidos. El método es extremadamente sencillo, ofrece resultados en sólo 15 minutos, no requiere equipamiento complejo ni personal especializado y puede ser una buena alternativa a los métodos moleculares, especialmente en pequeños laboratorios.

Palabras clave:Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, mico- bacterias, tuberculosis, inmunocromatografía,

Identificación rápida en cultivos líquidos del

complejo Mycobacterium tuberculosis mediante

un método inmunocromatográfico

Servicio de Microbiología. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cádiz.

Pedro García-Martos, Lidia García-Agudo, María José Rodríguez- Jiménez, Manuel Rodríguez-Iglesias.

Correspondencia: Dr. Pedro García-Martos Av. Ana de Viya 13, 2-B. 11009 Cádiz Tfno: 956- Fax: 956003081 E-mail:[email protected]

Originales

inmunocromatográfico

biología molecular ha posibilitado ampliamente la caracterización de especies y el reconocimiento de nuevos taxones micobacterianos 3,4^. El inconveniente que presentan muchos de estos métodos es su complejidad, aparte del precio elevado y la dificultad para introducirlos en modestos laboratorios. Actualmente, la hibridación con sondas de ácidos nucleicos constituye uno de los métodos más empleado en la identificación de las especies de interés clínico, pero se hace necesario disponer de un método rápido y sencillo.

En los últimos años ha aparecido en el mercado un método inmunocromatográfico que detecta el antígeno MPT64, también denominado MPB64, una fracción proteica micobacteriana de 24 kDa segregada específicamente por el complejo M. tuberculosis durante el crecimiento en el cultivo 5,6^ y que constituye un excelente marcador para su identificación2,7-11. Este antígeno se une en una tira de nitrocelulosa a anticuerpos monoclonales específicos, conjugados con partículas de oro coloidal marcadas, producidos por hibridomas obtenidos de la fusión de células de mieloma P3U1 con células esplénicas de ratón inmunizado con MPT64.

El objetivo de nuestro estudio ha sido evaluar la utilidad del método comercial BD MGIT TBc ID, un inmunoanálisis cromatográfico rápido para la detección cualitativa del complejo M. tuberculosis en cultivos líquidos, en comparación con el método de hibridación con sondas de ADN.

MATERIAL Y MÉTODOS

Estudiamos 75 cepas de micobacterias cultivadas en el medio BBL MGIT™ Mycobacterial Growth Indicador Tube® (Becton Dickinson, USA), entre las que se incluyeron 15 especies diferentes: 50 del complejo Mycobacterium tuberculosis , 1 M. bovis BCG, 4 M. avium , 2 M. intracellulare , 2 M. kansasii , 1 M. marinum , 3 M. fortuitum, 3 M. chelonae , 2 M. abscessus , 1 M. alvei , 1 M. brumae , 1 M. smegmatis , 1 M. peregrinum , 1 M. mageritense , 1 M. senegalense y 1 M. neoaurum. La identificación del complejo M. tuberculosis se realizó por hibridación con sondas de ADN Accuprobe® (Gen- Probe, bioMérieux, Francia); la identificación del resto de micobacterias se llevó a cabo por métodos moleculares.

Todas las cepas se procesaron mediante el método BD MGIT™ TBc ID® (Becton Dickinson, USA) antes de 72 horas de la positividad del cultivo, siguiendo las recomendaciones del fabricante. Un volumen de 100 μl del cultivo fue depositado en el pocillo de muestra de la tira de análisis correspondiente y, transcurridos 15 minutos, se registró el resultado. La observación de dos bandas de precipitación de color rosa-rojo, una en la posición “C” (control) y otra en la posición “T” (análisis), fue considerada indicativa de la presencia de antígeno MPT64 en la muestra; la ausencia de banda en la posición “T” fue interpretada como un resultado negativo; la ausencia de banda en la posición “C” invalidó el resultado.

Con los datos obtenidos, calculamos la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo del método inmunocromatográfico para la

identificación del complejo M. tuberculosis con respecto al método de hibridación con sondas de ADN. Por otra parte, evaluamos el rendimiento del método inmunocromatográfico en las cepas del complejo M. tuberculosis cultivadas en medio sólido de Löwenstein-Jensen. Para ello tomamos 1-3 colonias del cultivo y las depositamos en un tubo con 8-10 perlas de vidrio, las disgregamos en un rotador-mezclador (Vórtex) hasta observar turbidez homogénea en las paredes del tubo y resuspendimos en 1 ml de tampón fosfato pH 7,4 con 0,1% de Tween 80, procediendo posteriormente a la realización del método inmunocromatográfico de la misma forma que para el medio líquido. Empleamos también como diluyente 1 ml de medio Middlebrook 7H9 en 10 de estas cepas y, en otras 10, 1 ml de solución salina.

RESULTADOS

Los resultados obtenidos en la evaluación del método inmunocromatográfico BD MGIT TBc ID sobre las 75 cepas estudiadas se muestran en la tabla 1. Un total de 50 cepas pertenecientes al complejo M. tuberculosis dieron positiva la prueba, pero la cepa de M. bovis BCG dio resultado negativo. El resto de las cepas de micobacterias fueron negativas. La coloración de las bandas de reacción fue perceptible, generalmente, antes de los 10 minutos, pero la intensidad máxima del color apareció a los 15 minutos. Siete cepas con una lectura entre 50.000-90.000 RUL en el método de

Especies M. tuberculosis M. bovis BCG M. avium M. intracellulare M. kansasii M. marinum M. fortuitum M. chelonae M. abscessus M. alvei M. brumae M. smegmatis M. peregrinum M. mageritense M. senegalense M. neoaurum

Número de cepas 50 1 4 2 2 1 3 3 2 1 1 1 1 1 1 1

Positivas 50 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Negativas 0 1 4 2 2 1 3 3 2 1 1 1 1 1 1 1

Tabla 1 Resultados de diferentes especies de micobacterias analizadas mediante el método BD MGIT TBc ID.

inmunocromatográfico

  1. Pfyffer GE, Welscher HM, Kissling P, Cieslak C, Casal MJ, Gutie- rrez J, et al. Comparison of the Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) with radiometric and solid culture for recovery of acid-fast bacilli. J Clin Microbiol 1997; 35:364-8.
  2. Li H, Ulstrup JC, Jonassen JO, Melby K, Nagai S, Harboe M. Evi- dence for absence of the MPB64 gene in some substrains of Mycobacterium bovis BCG. Infect Immun 1993; 61:1730-4.
  3. Hirano K, Aono A, Takahashi M, Abe C. Mutations including IS6110 insertion in the gene encoding the MPB64 protein of Capilia Tb negative Mycobacterium tuberculosis isolates. J Clin Microbiol 2004; 42:390-2.