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REPORTE DE PRÁCTICA N.º 11. Cuantificación de
proteínas
Materia: Procesos Biológicos
Integrantes: Figueroa Pérez Máximo, Gutiérrez Gutiérrez Denisse Adali, Gonzales
Carrizales Paula Ximena, Ortiz Paganoni Alejandra Estefania, Muñoz Ortiz Azura
Letizia. Esther Geraldine Plascencia Tapia
Fecha de entrega: 3 de noviembre 2025
RESUMEN
Introducción :
Las proteínas son macromoléculas fundamentales para la estructura y funcionamiento de los organismos vivos, ya que intervienen en prácticamente todos los procesos biológicos. Son formadas por cadenas lineales de aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos, cuya secuencia y conformación tridimensional determinan su función específica. Estas funciones son: el transporte de moléculas, la catálisis de reacciones bioquímicas, la regulación de procesos metabólicos, la respuesta inmunológica y el mantenimiento estructural celular.
Entre los distintos métodos existentes para la determinación de proteínas, el método colorimétrico de Biuret. Su principio se basa en la reacción de los enlaces peptídicos con iones cúpricos (Cu²⁺) en un medio alcalino, formando un complejo de color violeta cuya intensidad es proporcional a la cantidad de proteína presente. La absorbancia del complejo se mide posteriormente con un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540–560 nm, lo que permite calcular la concentración proteica mediante una curva de calibración.
Además, en el estudio de las proteínas también se aplican pruebas cualitativas complementarias, como la reacción con ninhidrina, que identifica grupos amino libres, y la reacción con acetato de plomo, que revela la presencia de aminoácidos azufrados. Estas pruebas permiten comprender la composición química de las proteínas y los principios básicos de su análisis en el laboratorio.
Objetivo:
Determinar la concentración total de proteínas por medio de la reacción colorimétrica de Biuret, identificando la presencia de grupos amino y azufrados en aminoácidos.
Se realizaron tres experimentos:
● Reacción con ninhidrina para detectar grupos amino libres.
● Reacción con acetato de plomo para identificar aminoácidos azufrados.
● Cuantificación con Biuret para medir la concentración de albúmina por espectrofotometría a 540 nm.
Resultados :
Se observó una coloración violeta en los tubos con proteínas, lo cual confirmó la presencia de enlaces peptídicos. En las pruebas cualitativas, la ninhidrina produjo un color púrpura en los tubos con aminoácidos, mientras que el acetato de plomo formó un precipitado oscuro en los que contenían azufre. En el experimento de Biuret, la absorbancia aumentó proporcionalmente con la concentración de albúmina.
Conclusión:
El método de Biuret permitió determinar la cantidad de proteínas totales con buena exactitud. Las variaciones en color y absorbancia demostraron la relación directa entre la concentración proteica y la intensidad del color.
Discusión:
La práctica permitió reforzar el uso del espectrofotómetro y la importancia de la curva de calibración. Se comprobó que la albúmina puede servir como proteína estándar por su estabilidad. Los errores posibles estuvieron relacionados con la preparación de soluciones o la lectura de absorbancia.
Palabras clave:
Proteínas, Biuret, Albúmina, Ninhidrina, Aminoácidos, Espectrofotometría.
Introducción
Las proteínas son moléculas esenciales para la vida, ya que participan en casi todos los procesos biológicos del organismo. Están formadas por cadenas de aminoácidos unidas por enlaces peptídicos, y según su estructura y composición, pueden cumplir funciones muy diversas: desde actuar como enzimas que aceleran reacciones químicas, hasta formar parte de estructuras celulares, transportar sustancias o participar en la defensa del cuerpo.
En los laboratorios de bioquímica, cuantificar las proteínas totales de una muestra es un procedimiento muy importante, ya que permite conocer la
cantidad de proteína presente y comparar distintos tipos de muestras o tratamientos. Existen varios métodos para hacerlo, y uno de los más utilizados por su sencillez y confiabilidad es el método de Biuret.
Este método se basa en una reacción química entre los enlaces peptídicos de las proteínas y los iones cúpricos (Cu²⁺) en un medio alcalino. Al producirse la reacción, se forma un complejo de color violeta cuya intensidad depende directamente de la concentración de proteínas en la muestra. Luego, este color se mide con un espectrofotómetro a una longitud de onda de alrededor de 540– nm.
El método de Biuret no es el más sensible en comparación con otros, pero tiene la ventaja de ser simple, rápido y poco
violeta indica la presencia de grupos amino libres. En proteínas largas, la reacción es menos intensa porque la mayoría de los grupos amino están formando enlaces peptídicos.
Imagen 1. Experimento 1: Reacción cualitativa para el grupo amino: Tubo izquierdo: El color violeta demuestra que la ninhidrina reacciono con un grupo amino libre que estaba presente en un aminoácido o proteína, como la albúmina. Esta reacción forma un compuesto coloreado conocido como la “púrpura de Ruhemann”, esto significa que hay presencia de grupos amino libres. La reacción ocurre porque la ninhidrina oxida el grupo amino, liberando amoníaco y esto forma el color al. Tubo derecho: Este tubo contiene agua destilada. Al no tener aminoácidos ni proteínas, no hay grupos amino disponibles para reaccionar, por lo que permanece incoloro, indicando ausencia de reacción.
Imagen 2. Experimento 2: Reacción cualitativa para aminoácidos azufrados (Acetato de plomo)
Los aminoácidos que contienen azufre (como cisteína o cistina) liberan iones sulfurosos (S²⁻) al calentarse en medio alcalino. Estos reaccionan con el acetato de plomo (Pb(CH₃COO)₂), formando sulfuro de plomo (PbS), un precipitado negro o café oscuro.
Tubo con aminoácido azufrado (cisteína): después del baño María se tornó a un color café oscuro, lo cual indicó una reacción positiva.
Tubo con aminoácido sin azufre o con agua: permanece incoloro o transparente, demostrando una reacción negativa.
Solo los aminoácidos que contienen azufre reducen el plomo a sulfuro de plomo. La aparición del color oscuro confirma la presencia de azufre en la molécula analizada.
Imagen 3. Experimento 3: Cuantificación de proteínas por el método de Biuret
Imagen 4. Experimento 3: Determinación espectrofotométrica
Tubos con diferentes concentraciones de albúmina estándar: el color violeta aumentó en intensidad conforme aumentó la concentración de proteína.
Tubo con agua (blanco o calibrador): se tiñó de un leve azul claro → absorbancia 0.000.
Tubo problema: desarrollo un color intermedio entre los tubos patrón, su absorbancia se usó para calcular la
concentración mediante la curva de calibración.
Los enlaces peptídicos del grupo carbonilo y amino reaccionan con los iones Cu²⁺ del reactivo de Biuret, formando un complejo coloreado. El espectrofotómetro mide la absorbancia a 540–560 nm, y mediante la interpolación en la curva patrón, se obtiene la concentración de proteínas en la muestra problema.
Análisis de resultados Al analizar los resultados obtenidos en los tres experimentos, pudimos confirmar la presencia y las propiedades químicas de las proteínas y aminoácidos mediante reacciones específicas.
En el primer experimento, observamos que los tubos que contenían aminoácidos o proteínas desarrollaron una coloración violeta al reaccionar con la ninhidrina. Esto confirmó que las sustancias analizadas contenían grupos amino libres, los cuales reaccionaron para formar el compuesto violeta característico. El tubo control permaneció incoloro, lo que nos permitió validar que la reacción positiva dependía directamente de la presencia de grupos amino. Este resultado coincidió con lo esperado teóricamente, demostrando que la ninhidrina es un reactivo sensible y confiable para identificar aminoácidos.
En el segundo experimento, el cambio de color oscuro y la formación de un precipitado en los tubos que contenían aminoácidos azufrados evidenció la presencia de azufre en su estructura. El hecho de que solo las muestras con cisteína produjeran una reacción positiva confirmó que este tipo de aminoácidos
iones cúpricos en medio alcalino. Comprendí que la exactitud de los resultados depende tanto del control experimental como de la correcta calibración del espectrofotómetro. Esta experiencia me permitió fortalecer mi capacidad para analizar resultados y aplicar técnicas bioquímicas esenciales para estudios clínicos y de investigación.
Muñoz Ortiz Azura Letizia Gracias a esta práctica, diferencie y aprendi para que sirve cada métodos colorimétricos. La reacción de Biuret me pareció especialmente interesante porque traduce una reacción química invisible en un cambio de color medible. Aprendí que la relación entre color y concentración no solo demuestra principios químicos, sino que también tiene aplicaciones reales en el diagnóstico médico.
Plascencia Tapia Esther Geraldine A través de esta experiencia logré comprender el valor del trabajo experimental para corroborar principios teóricos sobre las proteínas. Las reacciones con ninhidrina y acetato de plomo me ayudaron a visualizar la presencia de grupos amino y azufrados, mientras que el método de Biuret me enseñó la importancia de la cuantificación objetiva mediante espectrofotometría. Esta práctica reforzó mi precisión en el manejo de materiales y reactivos, así como mi capacidad para analizar resultados bioquímicos con base científica.
Referencias
● McKee, T., & McKee, J. R. (2009). Bioquímica: Las bases moleculares de la vida (7.ª ed.). McGraw-Hill Interamericana.
● Murray, R. K., Granner, D. K., & Rodwell, V. W. (2018). Harper
Bioquímica Ilustrada (31.ª ed.). McGraw-Hill Education.
● Video: Curva de calibración. (s.f.). Recuperado de https://youtu.be/7PZJGGfbU7U
● Universidad del Valle de México (UVM). (2025). Guía de práctica de Procesos Biológicos – Cuantificación de proteínas totales.
