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Practica 5, Pruebas inmunologicas, Apuntes de Inmunología

Practica de laboratorio de inmunología medica sobre pruebas inmunologicas

Tipo: Apuntes

2023/2024

Subido el 06/04/2024

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Competencia: Analizar el fundamento de la reacción antígeno‐anticuerpo y su aplicación.
Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2024‐2 24
PRÁCTICA 5.
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS APLICADAS A LA CLÍNICA II
I. INTRODUCCIÓN
Las técnicas inmunológicas de laboratorio se usan ampliamente en los ámbitos clínico y
de investigación, y muchas de ellas se basan en el uso de Abs. Además, muchas de las
técnicas de biología molecular han proporcionado una información de enorme valor
sobre el sistema inmunitario y se están usando también en la actualidad para analizar
características de las enfermedades inmunitarias con propósitos diagnósticos.
En la práctica No.4 se analizaron las reacciones de precipitación y aglutinación. En este
apartado se discutirán las siguientes técnicas: ELISA, radioinmunoanálisis,
inmunofluorescencia, citometría de flujo, western blot, linfoproliferación e
inmunohistoquímica.
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA): Es una técnica en la cual uno
de los reactantes, el Ab o el Ag, se fija a un soporte sólido previamente a su interacción
con la muestra biológica. Esta reacción se evidencia con un Ab secundario acoplado a
una enzima que posteriormente reacciona con su sustrato y produce una reacción
colorida. La concentración del Ag o Ab problema es directamente proporcional a la
intensidad del color (excepto en el ELISA competitivo). Bajo este mismo principio
funcionan otras técnicas inmunológicas como el radioinmunoanálisis (RIA) y la prueba
radioalergoabsorbente (RAST). Figura 1.
Figura 1. Tipos de ELISA. Se clasifican en 4 tipos: Directo, indirecto, sándwich, y competitivo.
Inmunofluorescencia: Técnica basada en la reacción Ag-Ab donde el Ab esta acoplado
a una molécula fluorescente. Se utiliza para la detección de Ags celulares y de
inmunocomplejos en cortes histológicos de lesiones que acompañan a muchas
enfermedades autoinmunitarias e infecciosas. Figura 2.
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PRÁCTICA 5.

TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS APLICADAS A LA CLÍNICA II

I. INTRODUCCIÓN

Las técnicas inmunológicas de laboratorio se usan ampliamente en los ámbitos clínico y de investigación, y muchas de ellas se basan en el uso de Abs. Además, muchas de las técnicas de biología molecular han proporcionado una información de enorme valor sobre el sistema inmunitario y se están usando también en la actualidad para analizar características de las enfermedades inmunitarias con propósitos diagnósticos.

En la práctica No.4 se analizaron las reacciones de precipitación y aglutinación. En este apartado se discutirán las siguientes técnicas: ELISA, radioinmunoanálisis, inmunofluorescencia, citometría de flujo, western blot, linfoproliferación e inmunohistoquímica.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA): Es una técnica en la cual uno de los reactantes, el Ab o el Ag, se fija a un soporte sólido previamente a su interacción con la muestra biológica. Esta reacción se evidencia con un Ab secundario acoplado a una enzima que posteriormente reacciona con su sustrato y produce una reacción colorida. La concentración del Ag o Ab problema es directamente proporcional a la intensidad del color (excepto en el ELISA competitivo). Bajo este mismo principio funcionan otras técnicas inmunológicas como el radioinmunoanálisis (RIA) y la prueba radioalergoabsorbente (RAST). Figura 1.

Figura 1. Tipos de ELISA. Se clasifican en 4 tipos: Directo, indirecto, sándwich, y competitivo.

Inmunofluorescencia: Técnica basada en la reacción Ag-Ab donde el Ab esta acoplado a una molécula fluorescente. Se utiliza para la detección de Ags celulares y de inmunocomplejos en cortes histológicos de lesiones que acompañan a muchas enfermedades autoinmunitarias e infecciosas. Figura 2.

Figura 2. Microscopia de fluorescencia. Cortes histológicos renales de un paciente con lupus eritematoso sistémico (1) y de un paciente con síndrome de Goodpasture (2). La imagen muestra en color verde los inmunocomplejos localizados en la membrana glomerular, marcados previamente con un Ab anti-IgG fluoresceinado. Los complejos formados en la sangre y depositados en el riñón, forman los depósitos “grumosos desiguales” (1). El Ab frente a la membrana basal en el síndrome de Goodpasture forma una capa homogénea sobre la membrana basal glomerular (2).

Citofluorometría de flujo (FACS): Esta técnica se basa en la determinación de varias características celulares en forma simultánea y permite cuantificar en una mezcla en suspensión diferentes poblaciones celulares a través el uso de Abs monoclonales acoplados a fluorocromos. Una aplicación de esta técnica es cuantificar los linfocitos T CD4 +^ y T CD8 +, de utilidad en el seguimiento de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (HIV), así como en el diagnóstico de leucemias e inmunodeficiencias primarias, secundarias y perfil inmunológico. Figura 3.

Figura 3. Gráfica de citometría flujo. Se observan las poblaciones de leucocitos de sangre periférica distribuidas por su tamaño y granularidad. A partir de los leucocitos de morfología linfoide, se analizan los leucocitos CD3+^ (linfocitos T) productores de IL-2.

Figura 5. Linfoproliferación. a) Sangre total centrifugada con Ficoll-hypaque, lo cual permite la purificación de las células mononucleares de sangre periférica. b) Cultivo de estas células y adición de los mitógenos policlonales. c) Cuantificación de la división celular por citometría de flujo.

Inmunohistoquímica: Es un método basado en las reacciones inmunoenzimáticas. Se utilizan Abs mono o policlonales para detectar Ags celulares en cortes histológicos. Las interacciones inmunoenzimáticas se visualizan mediante el uso de diferentes enzimas como la peroxidasa o la fosfatasa. Figura 6.

Figura 6. Inmunohistoquímica de ganglio linfático para FasL. Muestra obtenida de un paciente con cáncer de mama ductal invasivo.

a b c

II. OBJETIVOS

  1. Entender el fundamento y aplicación de las técnicas inmunológicas como auxiliares en el diagnóstico.
  2. Evidenciar la reacción Ag-Ab en una muestra de corte histológico con tinción de inmunohistoquímica de un ganglio linfático.

III. MATERIAL Y MÉTODOS

Material

  • Corte histológico con tinción de inmunohistoquímica de un ganglio linfático

IV. PROCEDIMIENTO

  1. Observar la preparación con el objetivo de 10X.
  2. Identificar las zonas del ganglio linfático. NOTA: Las zonas positivas para CD3 o CD19 se observan de color café

V. RESULTADOS

  1. Identificar la corteza, folículos linfoides y paracorteza del ganglio linfático.

VI. CUESTIONARIO

  1. En el siguiente histograma identifique las poblaciones celulares de cada región:

CD-3 FITC

CD-56 PE