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Practica de laboratorio de inmunología medica sobre pruebas inmunologicas
Tipo: Apuntes
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Las técnicas inmunológicas de laboratorio se usan ampliamente en los ámbitos clínico y de investigación, y muchas de ellas se basan en el uso de Abs. Además, muchas de las técnicas de biología molecular han proporcionado una información de enorme valor sobre el sistema inmunitario y se están usando también en la actualidad para analizar características de las enfermedades inmunitarias con propósitos diagnósticos.
En la práctica No.4 se analizaron las reacciones de precipitación y aglutinación. En este apartado se discutirán las siguientes técnicas: ELISA, radioinmunoanálisis, inmunofluorescencia, citometría de flujo, western blot, linfoproliferación e inmunohistoquímica.
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA): Es una técnica en la cual uno de los reactantes, el Ab o el Ag, se fija a un soporte sólido previamente a su interacción con la muestra biológica. Esta reacción se evidencia con un Ab secundario acoplado a una enzima que posteriormente reacciona con su sustrato y produce una reacción colorida. La concentración del Ag o Ab problema es directamente proporcional a la intensidad del color (excepto en el ELISA competitivo). Bajo este mismo principio funcionan otras técnicas inmunológicas como el radioinmunoanálisis (RIA) y la prueba radioalergoabsorbente (RAST). Figura 1.
Figura 1. Tipos de ELISA. Se clasifican en 4 tipos: Directo, indirecto, sándwich, y competitivo.
Inmunofluorescencia: Técnica basada en la reacción Ag-Ab donde el Ab esta acoplado a una molécula fluorescente. Se utiliza para la detección de Ags celulares y de inmunocomplejos en cortes histológicos de lesiones que acompañan a muchas enfermedades autoinmunitarias e infecciosas. Figura 2.
Figura 2. Microscopia de fluorescencia. Cortes histológicos renales de un paciente con lupus eritematoso sistémico (1) y de un paciente con síndrome de Goodpasture (2). La imagen muestra en color verde los inmunocomplejos localizados en la membrana glomerular, marcados previamente con un Ab anti-IgG fluoresceinado. Los complejos formados en la sangre y depositados en el riñón, forman los depósitos “grumosos desiguales” (1). El Ab frente a la membrana basal en el síndrome de Goodpasture forma una capa homogénea sobre la membrana basal glomerular (2).
Citofluorometría de flujo (FACS): Esta técnica se basa en la determinación de varias características celulares en forma simultánea y permite cuantificar en una mezcla en suspensión diferentes poblaciones celulares a través el uso de Abs monoclonales acoplados a fluorocromos. Una aplicación de esta técnica es cuantificar los linfocitos T CD4 +^ y T CD8 +, de utilidad en el seguimiento de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (HIV), así como en el diagnóstico de leucemias e inmunodeficiencias primarias, secundarias y perfil inmunológico. Figura 3.
Figura 3. Gráfica de citometría flujo. Se observan las poblaciones de leucocitos de sangre periférica distribuidas por su tamaño y granularidad. A partir de los leucocitos de morfología linfoide, se analizan los leucocitos CD3+^ (linfocitos T) productores de IL-2.
Figura 5. Linfoproliferación. a) Sangre total centrifugada con Ficoll-hypaque, lo cual permite la purificación de las células mononucleares de sangre periférica. b) Cultivo de estas células y adición de los mitógenos policlonales. c) Cuantificación de la división celular por citometría de flujo.
Inmunohistoquímica: Es un método basado en las reacciones inmunoenzimáticas. Se utilizan Abs mono o policlonales para detectar Ags celulares en cortes histológicos. Las interacciones inmunoenzimáticas se visualizan mediante el uso de diferentes enzimas como la peroxidasa o la fosfatasa. Figura 6.
Figura 6. Inmunohistoquímica de ganglio linfático para FasL. Muestra obtenida de un paciente con cáncer de mama ductal invasivo.
Material
CD-3 FITC
CD-56 PE