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AISLAMIENTO DE CASEINA Y LACTOSA DE LA
LECHE
Introducción
En ésta práctica el objetivo fundamental de esta práctica es el aislamiento de la caseína y la lactosa para calcular su rendimiento una vez acabado el proceso.
Tanto la caseína como la lactosa están presentes en la leche. La lactosa es un disacárido formado por la unión de una molécula de glucosa y otra de galactosa. Por otro lado la caseína es una fosfoproteína que se encuentra en fase soluble asociada al calcio en un complejo que se denomina caseinógeno.
Material y métodos
El material utilizado fue el siguiente:
-2 vasos de precipitados de 250mL -Leche
-probetas de 100,50 y 25 mL -Ácido acético glacial
-Varilla de vidrio -Etanol del 96%
-Baño termostático a 40º C -Carbón activo
-pHmetro o papel indicador -Carbonato cálcico
-Embudo y trípode
-Pipeta de 2mL
-Quitasaos
-Papel de aluminio
-Gasa
La práctica se puede dividir en dos partes.
Aislamiento de la caseína y la lactosa
Por un lado el aislamiento de la caseína, para ésta colocamos 100ml de leche y la calentamos en un baño de aguan a 40ºC aproximadamente, después añadimos ácido acético al 10%, y fuimos comprobando con un papel indicador que hasta que el pH de mezcla fue de 5. En este punto la caseína toma una apariencia grumosa, la dejamos reposar y filtramos con una gasa de tres capas y un embudo.
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El precipitado resultante, lo lavamos con agua destilada y etanol al 96%, para luego filtrarlo con el embudo Buchner. Durante el filtrado añadimos un par de veces etanol al precipitado.
Una vez filtrado colocamos la lactosa en papel de plata y la dejamos en la estufa.
En esta última parte debemos añadir que la lactosa no quedo con la apariencia esperada, debía ser polvo blanco y resulto grumosa, la causa de esto fue la que antes de filtrar con el embudo Buchner debimos haber removido mejor el precipitado con el etanol al 96%.
Una vez acabado este proceso, con el líquido sobrante del primer filtrado de caseína, aislamos la lactosa. Añadimos 3g de carbonato cálcico en polvo fino colocamos el vaso de precipitado en agua hirviendo y removemos durante 10-15minutos. Filtramos, y nos quedamos con el filtrado deshaciéndonos del precipitado, el filtrado se somete a ebullición poniéndolo sobre una estufa , para que la ebullición sea más homogénea añadimos cinco bolitas de vidrio, durante el proceso de ebullición tuvimos problemas con la espuma que se formaba, y aunque en el guión de prácticas aconseja agitar cuando esto ocurra cuanto más agitábamos mas espuma se producía, la solución que pusimos fue levantarlo un poco cada cierto tiempo.
Cuando quedan 25 ml de l lo que ahora es jarabe añadimos 100 ml de etanol al 96% y 1 g de carbón activo en polvo de color negro, la mezcla resultante la filtramos con un papel de doble filtro, el filtrado tardo 40 minutos aproximadamente, el resultado es un liquido claro que dejamos en el congelador hasta el miércoles, 2 días, para que la lactosa cristalice.
Resultados y conclusiones
Procedimiento de pesado
El miércoles día 13/02/13, pesamos la caseína y la lactosa. Para pesar la caseína lo hicimos primero con el papel de plata y luego pesando solo el papel de plata, la diferencia nos daba el resultado.
Caseína con papel de plata---- 6,1 g
Papel de plata--------------------3,1 g
Peso caseína----------------------3 g
Por otro lado pesamos la lactosa, para ello vaciamos el vaso y lo pesamos, luego lo lavamos y lo volvimos a pesar, la diferencia de esto nos daba el resultado, ya que la lactosa se encuentra cristalizada pegada a los bordes del vaso.
Vaso sin lavar------------------ 36,1 g
Vaso lavado---------------------- 33 g
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X= 69,04%
Nuestro rendimiento es del 69,04%
- ¿Por qué se debe añadir el carbón activo?
Se debe añadir porque el carbón presenta microporos, lo que provoca la cristalización de sustancias, en este caso de la lactosa. Al filtrar solo queda la lactosa, ya que el carbón activo no se une a ésta.
- Al separar la caseína de la lactosa, ¿por qué se añade carbonato cálcico en polvo a la lactosa?
Al añadir el carbonato cálcico junto al incremento de la temperatura lo que conseguimos es que las proteínas que contiene la leche precipiten, en este caso albúminas.
- ¿Qué efecto tiene el etanol sobre la lactosa una vez que obtenemos el jarabe?
El etanol ayuda a formar buenos cristales de lactosa y a que estos precipiten.
- ¿Qué principio de las proteínas se utiliza para aislar la caseína en la práctica?
El principio de desnaturalización de las proteínas, que es un proceso en el cual se pierden todas las estructuras funcionales menos la primaria, en este caso debido a un aumento de temperatura y variación del pH.
Bibliografía
http://dicciomed.eusal.es
David l. Nelson,Lehninger. Principios de la bioquímica. ed 5ª.Omega,2007. 1296p ISBN 9788428214865
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