Practicas microbiologia, Guías, Proyectos, Investigaciones de Microbiología

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PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA

Microbiología e inmunología

Segundo curso, primer semestre

Índice

Práctica 1: Técnica del número más probable(NMP)

La microbiología es el estudio de los microorganismos y nos ayuda en la investigación de los pequeños seres que no se ven a simple vista. El descubrimiento de todos estos organismos permitió hacer un gran avance de la medicina, fermentación de alimentos, la cura de muchas enfermedades y proyectos importantes en la ingeniería genética..

En las práctica que realizaremos, estudiaremos diferentes de bacterias y hongos. Veremos su aspecto físico macroscópico y microscópico. Es importante saber diferenciar las bacterias y utilizaremos diferentes métodos para hacerlo.

En el laboratorio hay diferentes herramientas que debemos utilizar adecuadamente para realizar cualquier tipo de práctica:

• Placa de petri : es una herramienta básica como medio de cultivo. Es importante saber manejarla con una sola mano. - Asa de Kolle: herramienta que usamos para sembrar. Es importante flamear antes y después de cultivar. - Pipeta: herramienta frágil que debemos coger con cuidado por la parte superior, por debajo del algodón. Después de utilizar dejar en el recipiente con lejía. No volver a utilizar. Si no estamos necesitamos el fuego no debemos tenerlo encendido. Cuando trabajemos, siempre cerca del fuego encendido ya que es una zona estéril y segura para trabajar.

Siempre trabajamos al lado del fuego, ya que lo convierte en una zona estéril para evitar que se contaminen tanto las muestras como nosotros.

Tenemos que entender que estamos trabajando con agentes infecciosos por tanto, todo el material se debe utilizar con cuidado y limpiar siempre después de ser utilizado. Hay herramientas delicadas que se pueden romper con facilidad por esa razón, se deben manejar con delicadeza. También es importante tener el lugar despejado para posar proceder con más comodidad. La bata y llevar el pelo recogido son formas efectivas de prevención de cualquier tipo de incidente.

Práctica 1: Técnica del número más probable

Muestra: agua del canal de Lérida Para hacer el análisis correctamente, debemos establecer cuáles son el tipo de bacteria que queremos estudiar y clasificarlas correctamente, ya que sería imposible contar todas las bacterias que hay en el canal, a menos de que las contemos por grupos.

Los coliformes son enterobacterias en forma de bacilo y gram negativas. Son anaerobias facultativas y fermentan la glucosa. Son fáciles de detectar porque también son capaces de fermentar la lactosa y produce gases como producto final. Se cultiva a 37 grados.

• Prueba presuntiva :

Serie 1: tres tubos de ensayo con 10 ml de agua del canal cada uno. Serie 2: Tres tubos con 1 ml con agua del canal Serie 3: Tres tubos con 0,1 ml agua del canal

Cada uno de los tubos contendrá una campana durham, en la que se almacena el gas que es producto del metabolismo(fermentación de la lactosa) de los coliformes.

Medio de cultivo: Caldo lactosado o también llamado BROU. Este medio contiene 3g/l de extracto de carne, 5g/l de peptona y 5g/ de lactosa, y su ph es de 6,9 con variaciones de entre 0,2 pH Es un medio rico en nutrientes y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano, por lo que el crecimiento de coliformes en estas condiciones sería viable, ya que utilizan la lactosa como fuente de carbono y energía.

Temperatura y tiempo de incubación: durante 48h a 37ºC..

Resultados: Para saber si la muestra es positiva en primer lugar la muestra tiene que ser turbia y si hay gas en la cámara. Eso nos podría indicar que hay coliformes, pero al ser una prueba presuntiva se debe confirmar. También es posible que existan otros microorganismos, los descartamos con un cultivo sólido (EMB, azul de metileno) en una placa de Petri. Nuestros resultados fueron:

Serie 1: Encontramos que los 3 tubos estaban turbios y tenían burbuja de gas, por lo que la prueba presuntiva era positiva. Serie 2: 0 Serie 3: 0

Ningún tubo de la serie 2 o 3 presentó gas, aunque sí que estaba turbios. Descartamos estas dos series y analizamos la primera.

Por lo que sólo debemos sembrar con muestras de los tubos de la primera serie.

Práctica 2: Filtración por membrana

Muestra: agua del canal de Lérida (100 ml) diluida al 1%.

Microorganismos a analizar: enterococos, bacterias gram-positivas que como indica su nombre, son de forma de coco. Son anaerobios facultativos(capnofílico), halotolerantes e indican contaminación fecal allá donde se encuentran.

Medio de cultivo: Slanetz y Bartley (SB). Composición: Triptosa 20,00g/l, Extracto de levadura

5,00 g/l, Glucosa 2,00 g/l, Hidrog.Fosfato di-K 4,00 g/l, Azida sódica (Na N 3 ) 0,40 g/ y

Agar-agar 12,00 g/l.

Tiempo y temperatura: durante 48 horas a 37 grados con la placa de petri invertida

Triptosa 20 g/L

Extracto de levadura 5 g/L

Glucosa 2 g/L

K2HPO4 4 g/L

● pH= 7,2 +/- 0,

Número de microorganismos en la muestra: 9 ufc al 1%

Número de microorganismos en el agua del canal: 9000 ufc/100 ml

Conclusiones P1 + P2:

El agua analizada la consideramos no bebible por los animales ya que la presencia de coliformes puede indicar la presencia de heces en el canal y podríamos encontrar otros microorganismos perjudiciales sobretodo para la salud intestinal del animal. Por otro lado, los enterococos también son indicadores de partículas fecales. Se utiliza como referencia para valorar la contaminación de aguas. La comparación de la valoración de los dos microorganismos sirve para diferenciar el origen de las heces, si es origen humano o animal. Si administramos este tipo de agua a nuestro ganado podríamos causar diarreas u otro tipo de patologías.

Práctica 3: Recuento banco de diluciones

Muestra: Pienso (Pastone), un ensilado del grano de maiz inmaduro, en una cantidad d 10 gr y 90 ml peptona salina

Microorganismos que se analizan: aerobios mesófilos. Son el tipo de bacterias que viven en presencia de oxígeno y a una temperatura de unos 30 ºC.

Medio de cultivo: PCA. Composición: Triptona 5,00 g/l,vExtracto de levadura 2,50 g/l,

Glucosa 1,00 g/l y Agar-agar 15,00 g/l.

Temperatura y tiempo de incubación: durante 72 horas a 30 grados

Resultados: A) Diluciones que se retienen y el número contado en cada placa de estas diluciones: Ya que en nuestras placas de petri había demasiados microorganismos hemos observado la placa con menos cantidad, pero nos hemos dado cuenta que tenía más de 300 aerobios mesófilos B) Expresión de los resultado: La placa más diluida ya tenía más de 300 ufc. Por tanto,

300/10 ˆ 0 ufc/g

− = > 3 · 1 ˆ

7

Conclusiones: A) Sobre los resultados de las prácticas a) Utilizaríais este pienso para alimentar vuestros animales de granja?

Calidad Microbiológica

Satisfactoria Aceptable Insatisfactoria

Insatisfactoria

Recuento colonias aerobias

< 3x 106 ufc/g 3x 106 -10x 106 ufc/g >10x 106 ufc/g

Ya que en nuestra muestra se vio que había más de 3x 107 ufc/g en la podemos decir que el pienso es insatisfactorio.

Práctica 4: Tinción gram

Forma y gram de las bacterias:

- B.Cereus: gram positivo → bacilo - P.Hauseri: gram negativo → bacilo

- M. Luteus: gram positivo → coco

Conclusiones:

La diferenciación se basa en la pared de la bacteria Gram positivo (violeta, azul, rojo) Gram negativo: (rosa claro) Para diferenciar los tipos de paredes utilizamos diferentes colorantes.

• Cristal violeta: no nos sirve para clasificar ya que penetra en todo tipo de paredes.
• Lugol: nos sirve como fijador del cristal que hemos puesto anteriormente, por su composición de yodada.
• Alcohol: nos permitirá diferenciar ya que le quitará el color a los gram negativos.
• Fucsina: es el último colorante utilizado para resaltar mejor el contraste entre los dos tipos de paredes, las gram positivas se mantendrán violetas y las gram negativas serán de un color más claro.

Práctica 6: Identificación de hongo Medio de cultivo: El medio de cultivo es PDA a base de patata, también llamado caldo de patata y dextrosa, con un pH de 5, Temperatura y velocidad de crecimiento: UNOS 25ºC y tiempo depende del tipo de hongo. Descripción de hongos:

Nombre: Fusarium Tamaño: pequeño Pigmentos difusibles: Amarillento por arriba y rojzo por deba

Nombre: Alternaria Tamaño: Mediano Pigmentos difusibles: marron oscuro casi negro

Nombre: Penicillium Tamaño: pequeo Pigmentos difusibles: verde en la mitad y blanco alrededor. Otros: solo apreciamos la ramificación

Nombre: Aspergillus Tamaño: grande Pigmentos difusibles: verdoso Otros: esporas fuera

Nombre: Trichoderma Tamaño: pequeño Pigmentos difusibles: verdoso Otros: Observamos muchas ramificaciones juntas.

Nombre: Rhizopus Tamaño: grande Pigmentos difusibles: blanco Otros: esporas dentro.