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Asignatura: CCET, Profesor: lluisa moysset, Carrera: Biotecnologia, Universidad: UB
Tipo: Apuntes
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UNIVERSITAT DE BARCELONA^ U B
Cultivo de estructuras no organizadas y variabilidad in vitro****.
Cultivo de callos. Cultivo de células en suspensión e inmovilizadas. Obtención de protoplastos y cultivo. Plating y cocultivo. Hibridación somática. Variación somaclonal. Mutagénesis. Plantas transgénicas.
Suspensiones celulares
Grupo de células o células aisladas - medio líquido (agitación)
a.- Fase de latencia b.- Fase exponencial c.- Fase estacionaria
b
a
c
Suspensiones celulares
Aplicaciones de las suspensiones celulares
Regeneración plantas (organogénesis/embriogénesis)
Inducción y selección de mutantes
Producción de metabolitos primarios o secundarios
Producción de proteínas y enzimas
Biotransformaciones BIOFACTORIAS
cultivos de una sola célula líneas celulares
Biorreactor de 2.2 L. hasta 14 L.
Cultivo de células a nivel investigación y de planta piloto.
Sistema de control mediante una pantalla táctil.
Datos en tiempo real con gráficos estadísticos y de seguimiento.
Protoplastos
la estabilidad del cultivo de protoplastos depende de
la presión osmótica del medio (medios hipertónicos)
Cultivo de Protoplastos: etapas
Enzimas usadas en la obtención de protoplastos
enzima origen Celulasa R-10 Trichoderma viride Micelasa-P Trichoderma viride Hemicelulasa H-2125 Rhizopus sp. Macerozima R-10 Rhizopus sp. Pectinase Aspergillus niger Pectoliasa Y-23 Aspergillus japonicus Pectinol Aspergillus sp. Zimolasa Arthrobacter luteus Driselasa Irpex lactes
Nicotiana tabacum Microcolonia derivada de un protoplasto rojo : autofluorescencia de la clorofila
azul : pared celular teñida con calcofluor blanco
Cámara Neubauer
Etapa 2 - Cultivo de Protoplastos
Medio de cultivo:
(*) alginato en protoplastos termosensibles ( A. thaliana)
(CaCl 2 1mM estimula, NH 4 NO 3 20 mM reduce)
