Docsity
Docsity

Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes

Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity


Consigue puntos base para descargar
Consigue puntos base para descargar

Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium


Orientación Universidad
Orientación Universidad


Presentació vegetal T13, Apuntes de Biotecnología

Asignatura: CCET, Profesor: lluisa moysset, Carrera: Biotecnologia, Universidad: UB

Tipo: Apuntes

2014/2015

Subido el 10/07/2015

maikuenta
maikuenta 🇪🇸

5

(1)

5 documentos

1 / 24

Toggle sidebar

Esta página no es visible en la vista previa

¡No te pierdas las partes importantes!

bg1
UNIVERSITAT DE BARCELONA
U
B
TEMA 13
Otras aplicaciones del cultivo in vitro
Conservación de germoplasma: crioconservación
Obtención de metabolitos secundarios, colorantes,
antioxidantes, productos de interés farmaceútico,
compuestos con actividad biocida, biopolímeros,
proteínas y anticuerpos.
pf3
pf4
pf5
pf8
pf9
pfa
pfd
pfe
pff
pf12
pf13
pf14
pf15
pf16
pf17
pf18

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Presentació vegetal T13 y más Apuntes en PDF de Biotecnología solo en Docsity!

UNIVERSITAT DE BARCELONA^ U B

TEMA 13

Otras aplicaciones del cultivo in vitro

Conservación de germoplasma: crioconservación Obtención de metabolitos secundarios, colorantes, antioxidantes, productos de interés farmaceútico, compuestos con actividad biocida, biopolímeros, proteínas y anticuerpos.

Conservación del germoplasma

• Método tradicional

  • propagación por semillas – banco de semillas
  • propagación vegetativa – propagación clonal en campo

• Técnicas de cultivo in vitro

- cultivo stock en condiciones óptimas de crecimiento

  • cultivo stock en condiciones de crecimiento reducido
  • criopreservación

Aplicaciones de la criopreservación

 almacenar un cultivo a largo plazo conservando la estabilidad genética

 preservar genomas de variedades salvajes, nuevas o raras

 mantener el material libre de patógenos

 retener el potencial morfogénico de un cultivo

 estudiar el mecanismo de aclimatación al frío

Factores que afectan la viabilidad

del material congelado

• material vegetal

• velocidad de enfriamiento

• temperatura de almacenamiento

• crioprotector(es)

• método de descongelación

Material vegetal

• suspensiones celulares (fase exponencial)

• embriones somáticos

• semillas artificiales

• ápices de brotes

• segmentos nodales

  • especies aclimatadas al frío per se
  • aclimatar las plantas o cultivos al frío antes de la criopreservación
  • tratamiento del material con ácido abscísico
  • Crioselección de material no aclimatado

Estrategias para aumentar la supervivencia del

material vegetal

Plantas de clavel (– 4ºC, 3-5 días) x 2 el % de supervivencia de los ápices congelados x 6-7% el % de formación de primordios foliares

Congelación en dos etapas

Velocidad enfriamiento (lenta versus rápida)

Crioprotección química

  • compuestos permeables o impermeables que:

a) reducen la temperatura de congelación del citosol b) alteran el tipo de cristales de hielo que se forman

- Crioprotectores :

  • alcoholes: glicerol, sorbitol, manitol
  • compuestos con azufre: dimetilsulfoxido (DMSO)
  • polímeros: polietilenglicol (PEG); polivinilpirrolidona (PVP)

Crioprotector eficiente : compuesto de bajo peso molecular no tóxico a baja concentración permeable y fácilmente lavable

Criopreservación de germoplasma

  • tratamiento del material vegetal con elevada concentración

de sustancias crioprotectoras Plant vitrification solutions (PVS)

  • al enfriarse rápidamente el agua pasa de una fase líquida

a una amorfa (no se forman cristales)

Vitrificación

PVS2: 0,4 M sacarosa 3,2 M glicerol 2,4 M etilenglicol 1,5 M dimetilsulfoxido (DMSO)

Encapsulación - deshidratación

  • basada en la tecnología de las semillas artificiales
  • encapsulación en alginato , deshidratación y congelación

Scheme of the cryopreservation procedure for the Gentiana cruciata suspension culture (white arrows) and sources of somatic embryos for assessment of the influence of cryotreatment on somatic embryogenesis efficiency (black arrows). Osmotic dehydration (OD) was conducted by increasing the concentration of sucrose from 0.3, 0.5, 0.75 M (48 h for each) to 1.0 M (1 day)

Descongelación del material

  • evitar la recristalización y formación de cristales de hielo.
  • eliminar los compuestos crioprotectores (vitrificación).

 Metodología:

  • inmersión del material en un baño maria estéril (37-40ºC, 1-2 min).
  • hidratación a temperatura ambiente (material deshidratado).

Evaluación de la criopreservación

  • Test de viabilidad :

tinción diacetato de fluoresceína reducción de sales de tetrazolium

  • Medidas de crecimiento :

índice mitótico número de células plasmolisis – de-plasmólisis peso fresco – peso seco cinética de crecimiento (suspensión celular) regeneración de plantas (cultivo de meristemos)