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Presentación primer pracial, Apuntes de Biología

Instituto Politécnico Nacional (IPN)Biología

.................................................

Tipo: Apuntes

2019/2020

Subido el 06/11/2022

jossep-cervantes 🇲🇽

4 documentos

1 / 47

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Equipo 2:

Badillo Medina Paola

Cervantes Sierra Jossep DADY

Escalante Mendoza Kelly Abigail

Galindo Alcántara CuauhtliIancuic

Gutiérrez Roldán Karla Gabriela

DRA. M ARIA CARMEN OLIVARES

IBT. HERNÁN CORTÉS AR ROYO

DR. LUIS LINAR ES FERNÁNDEZ

| 5F V2 | | FEC HA DE ENTREG A: 26/10/20 22

LABORATORIO DE BIOCONVERSIONES

Descubre Apuntes de Biología Instituto Politécnico Nacional (IPN)

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¡Descarga Presentación primer pracial y más Apuntes en PDF de Biología solo en Docsity!

Equipo 2:

Badillo Medina Paola

Cervantes Sierra Jossep DADY

Escalante Mendoza Kelly Abigail

Galindo Alcántara Cuauhtli Iancuic

Gutiérrez Roldán Karla Gabriela

DRA. MARIA CARMEN OLIVARES IBT. HERNÁN CORTÉS ARROYO DR. LUIS LINARES FERNÁNDEZ | 5FV2 | | FECHA DE ENTREGA: 26/10/

LABORATORIO DE BIOCONVERSIONES

CAPACITACIÓN 4 Determinación de azúcares reductores

Figura 2. Diagrama de método de DNS

Metodología de Azúcares Totales por el método de Antrona

Adicionar 0. 2 mL de muestra en un tubo Eppendorf
Adicionar lentamente 1 mL de solución de antrona, agregar la antrona lentamente, es una reacción exotérmica. Cuando este método se realiza con volúmenes mayores, ej.: 1 mL de muestra y 5 mL de antrona, debe realizarse en frío (en baño de hielo porque es muy exotérmica)
Agitar en Vortex y luego llevar a ebullición en baño María durante 10 min (cuidado de que no se abran los tubos, es muy ácido, se recomienda usar tubos con tapón de rosca.
Enfriar en hielo (para detener la reacción).
Posteriormente sacar del hielo y dejar a temperatura ambiente.
Pasar a una celda para leer
Leer a 650 nm(cuando la muestra ya esté a temperatura ambiente).

Resultados

Tabla 2. Resultados de las lecturas

Muestra

(g/L)

Resultado de la lectura

por triplicado

Promedio

M1 0.515 0.425 0.479 0.

M2 0.204 0.244 0.219 0.

y = 0.3342x - 0. R² = 0. -0. 0

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3. Abs 540 nm glucosa [g/L] Figura 3. Gráfica de glucosa.

Tabla 2. Resultados de las lecturas Muestra (g/L) Resultado de la lectura por triplicado Promedio M1 0.515 0.425 0.479 0. M2 0.204 0.244 0.219 0. y = 0.3342x - 0. R² = 0. -0. 0

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3. Abs 540 nm glucosa [g/L] Figura 3. Gráfica de glucosa.

Concentración número 1 = 1.452 g/L

Concentración número 2 = 0.702 g/L

RESULTADOS DE LAS CONCENTRACIONES

CAPACITACIÓN 5 Determinación de proteína

Antecedentes

Existen diversas técnicas que ayudan a estimar la concentración de proteínas, ya sea a

partir de reacciones con los extremos amino y carboxilo, formación de complejos con el

enlace peptídico o diversas determinaciones para algunos grupos R de los aminoácidos.

La determinación de proteína también sirve para determinar la biomasa, en este caso se

debe realizar una hidrólisis de las células previa a la determinación.

Figura 4. Curva estándar de proteína (BSA) de 0 a 1000 mg/L y dos muestras

Metodología método de Bradford

1. Adicionar 0. 25 mL de muestra en una celda de espectrofotómetro.

2. Adicionar 0. 75 mL del reactivo de Bradford y agitar (con la punta de la pipeta)

3. Incubar los tubos a temperatura ambiente por cinco minutos.

4. Determinar la absorbancia de los tubos a una longitud de onda de 595 nm, ajustando la

absorbancia a cero con el blanco.

5. Realizar una regresión lineal con los datos obtenidos y obtener la ecuación de la curva

Metodología de Curva para método de Bradford

Preparar una serie de 10 microtubos de 1. 5 mL (un microtubo por cada dilución), a partir de una solución de BSA 100 μg/mL hacer las diluciones, de 0 a 100 μg/mL, una en cada tubo, a partir de estas se pasarán 0. 25 mL por triplicado.
Preparar una serie de 31 celdas de 1 mL ( 10 triplicados y el blanco) a cada uno de ellos se le adiciona 0. 25 mL de solución Bradford.
Adicionar a cada tubo (con Bradford), 0. 75 mL de cada una de las diluciones preparadas de acuerdo con la curva tipo y/o de las muestras a tratar.
Seguir la metodología de Bradford. Las lecturas con absorbancias mayores a 1 no se consideran para la curva, se hace con los puntos anteriores

Presentación primer pracial, Apuntes de Biología

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Galindo Alcántara Cuauhtli Iancuic

Gutiérrez Roldán Karla Gabriela

LABORATORIO DE BIOCONVERSIONES

Resultados

Muestra

(g/L)

Resultado de la lectura

por triplicado

Promedio

M1 0.515 0.425 0.479 0.

M2 0.204 0.244 0.219 0.

Concentración número 1 = 1.452 g/L

Concentración número 2 = 0.702 g/L

Existen diversas técnicas que ayudan a estimar la concentración de proteínas, ya sea a

partir de reacciones con los extremos amino y carboxilo, formación de complejos con el

enlace peptídico o diversas determinaciones para algunos grupos R de los aminoácidos.

La determinación de proteína también sirve para determinar la biomasa, en este caso se

debe realizar una hidrólisis de las células previa a la determinación.

1. Adicionar 0. 25 mL de muestra en una celda de espectrofotómetro.

2. Adicionar 0. 75 mL del reactivo de Bradford y agitar (con la punta de la pipeta)

3. Incubar los tubos a temperatura ambiente por cinco minutos.

4. Determinar la absorbancia de los tubos a una longitud de onda de 595 nm, ajustando la

absorbancia a cero con el blanco.

5. Realizar una regresión lineal con los datos obtenidos y obtener la ecuación de la curva

Figura 6. Diagrama de curva de BSA por Bradford por triplicado