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I. RESUMEN
En la práctica de laboratorio se visualizó un video para identificar bacterias Gram negativas de los géneros Neisseria spp, Haemophilus spp, Campylobacter spp y Helicobacter spp. Se realizaron pruebas bioquímicas para identificar las especies. El video mostró cómo estas bacterias atacan sistemas del cuerpo humano y causan infecciones. Los hallazgos principales incluyeron la identificación precisa de las bacterias mediante descripción morfológica y pruebas bioquímicas. Se resaltó la importancia clínica de estas bacterias y su impacto en la salud humana. En conclusión, la práctica cumplió los objetivos al familiarizarse con la identificación de bacterias Gram negativas, comprender sus características morfológicas y bioquímicas, y conocer las infecciones que pueden causar. PALABRAS CLAVES: Neisseria spp; Haemophilus spp; Campylobacter spp; Helicobacter spp; Pruebas bioquímicas; Bacterias Gram negativas. II. MARCO TEÓRICO Neisseria spp: Cocos gramnegativos que en forma típica aparecen en pares (diplococos) con los lados opuestos achatados, lo que les da una apariencia de “granos de café”. No tienen movilidad. No forman esporas. Sus paredes celulares son clásicas de las bacterias gramnegativas, con una capa de peptidoglucano y una membrana externa que contiene polisacáridos complejos con lípido y proteínas (Abdalla, 2023, p. 3). Haemophilus spp: Es un pequeño bacilo gram negativo inmóvil, que no forma esporas, con requerimientos nutricionales exigentes, crece aeróbica o anaeróbicamente. El crecimiento aeróbico requiere la presencia de hemina (factor X) y nicotinamida adenina dinucleótida (factor V) (Zepeda, 2007, p. 1). Campylobacter spp: Son bacilos Gram-negativos móviles, con uno o varios flagelos polares, son curvados, espirilados. Son microaerofílicos capaces de crecer en una atmósfera de 5% de oxígeno, 10% de dióxido de carbono y 85% de nitrógeno. La mayoría de estas bacterias crecen a una temperatura de 37 °C (Cervantes García & Cravioto Q, 2007, p. 1). Helicobacter spp: Engloba bacterias Gram negativas que en un principio se consideraban pertenecientes al género Campylobacter, y desde 1989 se clasificaron en un género separado debido a características bioquímicas diferentes, con más de 24 especies identificadas y otras aún en estudio (Mateos Muñoz, y otros, 2013, p. 1). Fecha: 17/05/ Universidad Mariano Gálvez Facultad de Ciencias Químicas y Biológicas Parasitología Instructor: María Alejandra Sandoval Laparra Sección: A Nombre del estudiante : Bryan Alexis Ordóñez Recinos Carné: No.1109-21- Práctica No. 9 Cocos Gram negativo y enfermedades genitourinarias
Medios de Cultivo más utilizados para bacterias Gram negativas: Agar chocolate: Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales, por ejemplo, especies patógenas de Streptococcus , Haemophilus y Neisseria (BRITANIA, 2021, p. 1). Agar sangre: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos. Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis (BRITANIA, 2011, p. 1). Skirrow: Son medios selectivos para el aislamiento de especies de Campylobacter a partir de muestras clínicas (BD, 2019, p. 1). Campy BAP: Es un medio selectivo para el aislamiento primario de Campylobacter jejuni y otras especies de Campylobacter resistentes a la cefalotina, a partir de muestras de heces (BD, 2013, p. 1). Pruebas bioquímicas : Tinción de Gram: La tinción de Gram divide a las bacterias en dos grupos principales. Las bacterias grampositivas conservan un color violeta azulado quitan el color y tiñen con safranina. Esta diferencia en la tinción resulta de la estructura de las paredes celulares de ambos tipos de bacterias. Las bacterias grampositivas tienen una pared gruesa compuesta de peptidoglicanos y polímeros, y es impermeable, por lo que es resistente a la tinción. Las bacterias gramnegativas, por otro lado, tienen una capa delgada de peptidoglicano y una bicapa de lipoproteínas que se pueden descomponer mediante la tinción. (Rodríguez & Arenas, 2018, p. 1) Material para la tinción de Gram: Cristal violeta, yodopovirona (lugol), alcohol- acetona, safranina y aceite de inmersión (Rodríguez & Arenas, 2018, p. 2). Fermentación de azucares: La fermentación de azúcares son pruebas bioquímicas habituales para detectar la fermentación de azúcares por parte de bacterias, de utilidad en microbiología. Los tubos contienen una mezcla de proteínas desecadas y el sustrato de azúcar de la fermentación. Dicha reacción identifica las cepas bacterianas. La fermentación del azúcar se evidencia por el cambio de color de púrpura (negativo) a amarillo del indicador de pH en el medio (MicroPlanet, 2020, p. 1). Prueba de uso de factores de coagulación: Es utilizada para la identificación del género Haemophilus spp ya que requieren los factores de crecimiento protoporfirina (factor X) y/o nicotinamida adenina dinucleótido (NAD, o factor V). Esta prueba se basa en determinar la dependencia de los factores X y V mediante la utilización de discos impregnados con estas substancias (Campos, 2002, p. 1). Pruebas más comunes para la identificación de Campylobacter spp. Métodos microbiológicos tradicionales que incluyeron pruebas morfológicas para la identificación de la bacteria y sus colonias y pruebas bioquímicas como la prueba de hipurato, métodos químicos como fue la identificación de ácidos grasos de la membrana celular y métodos utilizando la prueba de PCR (Ramírez Saad, Díaz González, & Gay Jiménez, 2020, p. 4).
III. RESULTADOS
Cabe destacar que los resultados obtenidos en esta práctica se obtuvieron mediante la observación de un video basado en la práctica asignada en el manual de Bacteriología de la Universidad Mariano Gálvez de Guatemala Campus Guatemala. Tabla no. 1 Morfología de los Gram negativo del género Neisseria spp en agar chocolate y agar sangre. Agares utilizados Agar chocolate Agar sangre Forma Cocos Gram negativo Cocos Gram negativo Tamaño Grande Mediana Agrupación Parejas Parejas Brillo Brillante Brillantes Color Cremosas Incoloras Hemolisis No presenta No presenta Bordes Aplanados Aplanados Elevación Sobre levantadas Sobre levantadas Nota: Las imágenes de la morfología de las colonias de Neisseria spp se pueden observar en el anexo no. 1-2.
Tabla no. 2 Resultados obtenidos de la prueba de fermentación de azucares para las especies más comunes del género Neisseria spp. Especie Glucosa Maltosa Sacarosa Sistema que afecta Moraxella catharrhalis Negativo Negativo Negativo Tracto respiratorio Neiserria gonorrhoeae Positivo Negativo Negativo Genital Neisseria meningitidis Positivo Positivo Negativo Nervioso Nota: Las imágenes de las pruebas realizadas a las especies de Neisseria se pueden observar en el anexo no. 3.
Tabla no. 4 Prueba de uso de factores de coagulación para las especies más comunes del género Haemophilus spp. Especie Factor 5 Factor 10 Factor 15 Sistema que afecta Haempophilus parainfluenzae Positivo Negativo Positivo Tracto espiratorio Haempophilus ducreyi Negativo Positivo Positivo Genital Haemophilus influenzae Negativo Negativo Positivo Tracto respiratorio Nota: Las imágenes de las pruebas de factores de coagulación realizadas se pueden observar en el anexo no. 6.
Tabla no. 5 Características generales y diagnóstico de los Gram negativo del género Campylobacter spp_._ Especie Campylobacter spp Forma Curvada Aspecto Gaviota Enfermedades que causa Infecciones intestinales Diagnóstico Gram modificado. Sensibilidad: 50 - 75%. Cultivo en medios selectivos (Skirrow, Campy BAP) en ambiente microaerofílico. Nota: Las imágenes de las características generales de la especie de Campylobacter spp se pueden observar en anexo no. 7.
IV. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En el presente reporte, se llevaron a cabo diversas pruebas para analizar la morfología y características de diferentes especies de bacterias Gram negativas pertenecientes a los géneros Neisseria spp, Haemophilus spp, Campylobacter spp y Helicobacter spp. Se utilizaron diferentes medios de cultivo y se realizaron pruebas específicas para evaluar la morfología de las colonias, la agrupación, el tamaño, el brillo, el color, la hemólisis, los bordes y la elevación. Además, se llevaron a cabo pruebas de fermentación de azúcares y uso de factores de coagulación para identificar las especies y determinar los sistemas afectados por cada una de ellas. En la tabla no. 1, se presentan los resultados de la morfología de los Gram negativos del género Neisseria spp en agar chocolate y agar sangre. Se observa que las colonias de Neisseria spp en ambos medios presentan forma de cocos Gram negativo, agrupadas en parejas, con un brillo brillante. Sin embargo, hay algunas diferencias en el tamaño y el color de las colonias. En el agar chocolate, las colonias son de tamaño grande y presentan un color cremoso, mientras que en el agar sangre, las colonias son de tamaño mediano y son incoloras. Estos hallazgos concuerdan con la literatura previa sobre las características morfológicas de Neisseria spp. (Zamorano, Porte, Peláez D, & Varela A, 2002, p. 16) En la Tabla no. 2, se muestran los resultados obtenidos de la prueba de fermentación de azúcares para las especies más comunes del género Neisseria spp. Moraxella catharrhalis resultó negativo para la fermentación de glucosa, maltosa y sacarosa, lo que indica que no utiliza estos azúcares como fuente de energía. Neisseria gonorrhoeae fue positivo para la fermentación de glucosa, pero negativo para maltosa y sacarosa. Por otro lado, Neisseria meningitidis resultó positivo para la fermentación de glucosa y maltosa, pero negativo para sacarosa. Estos resultados concuerdan con estudios previos que indican que las diferentes especies de Neisseria spp presentan patrones de fermentación de azúcares específicos, lo cual puede ser útil para su identificación y diagnóstico clínico (Zamorano, Porte, Peláez D, & Varela A, 2002, p. 20). La Tabla no. 3 muestra los resultados de la morfología de los Gram negativos del género Haemophilus spp en agar chocolate. Se observó que las colonias presentaban forma de cocobacilos, agrupación en cadena, tamaño pequeño, brillo brillante, color transparente/grisáceo y no mostraban hemólisis. Los bordes de las colonias eran regulares y presentaban elevación sobre levantadas. Estos resultados son consistentes con las características morfológicas típicas de Haemophilus spp (McCrea, y otros, 2013, p. 5). Lo cual es relevante para su identificación en el laboratorio. En la Tabla no. 4, se presentan los resultados de la prueba de uso de factores de coagulación para las especies más comunes del género Haemophilus spp. Haemophilus parainfluenzae resultó positivo para el Factor 5 y el Factor 15, pero negativo para el Factor 10. Haemophilus ducreyi fue positivo para el Factor 10 y el Factor 15, pero negativo para el Factor 5. Haemophilus influenzae resultó negativo para los tres factores de coagulación. Estos resultados indican que cada especie de Haemophilus spp tiene diferentes capacidades para utilizar los factores de coagulación, lo cual puede estar relacionado con lo cual está relacionado con su papel en las infecciones del tracto respiratorio y el sitio genital.
En la Tabla no. 5 se presentan las características generales y el diagnóstico de los Gram negativos del género Campylobacter spp. Se observó que las especies de Campylobacter spp presentan una forma curvada y un aspecto similar al de una gaviota. Estas bacterias son conocidas por causar infecciones intestinales en los seres humanos. El diagnóstico de Campylobacter spp se basa en diferentes métodos, como el Gram modificado, con una sensibilidad que varía entre el 50% y el 75%. Además, se requiere el cultivo en medios selectivos en ambiente microaerofílico, como el agar Skirrow y el Campy BAP. Estos resultados y métodos diagnósticos concuerdan con la literatura existente sobre Campylobacter spp (OMS, 2020, p. 1). La Tabla no. 6 muestra las características principales de los Gram negativos del género Helicobacter spp, con un enfoque particular en Helicobacter pylori. Estas bacterias presentan una forma curvada y un aspecto similar al de una gaviota. Helicobacter pylori es conocido por causar ácido péptico en la mucosa gástrica, lo que puede resultar en enfermedades gástricas. El diagnóstico de Helicobacter pylori se realiza mediante diferentes métodos, como el Gram modificado de la mucosa gástrica, métodos rápidos, macerado de biopsia y pruebas de ureasa en tejido. Además, se requiere el cultivo en medios selectivos suplementados en una atmósfera microaerofílica a 37°C durante 72 horas. También se pueden utilizar pruebas de determinación respiratoria de carbón radiactivo y serología (Campuzano Maya, 2011, p. 1). Estos métodos diagnósticos son importantes para identificar y tratar las infecciones causadas por Helicobacter pylori. Los resultados obtenidos en este reporte permiten diferenciar las diferentes especies de bacterias Gram negativas de los géneros Neisseria spp, Haemophilus spp, Campylobacter spp y Helicobacter spp. Las pruebas de morfología de colonias, fermentación de azúcares y uso de factores de coagulación son útiles para la identificación y caracterización de estas bacterias. Además, se han establecido métodos diagnósticos específicos para cada género, lo cual es crucial para el diagnóstico clínico y el tratamiento adecuado de las infecciones causadas por estas bacterias. V. CONCLUSIONES
- Las diferentes especies de bacterias Gram negativas presentan características morfológicas y de fermentación de azúcares específicas, lo cual es útil para su identificación y diagnóstico clínico. 2. Se observaron diferencias en la morfología de las colonias de Neisseria spp en agar chocolate y agar sangre, lo cual concuerda con la literatura existente sobre estas bacterias. 3. Las pruebas de fermentación de azúcares en las especies de Neisseria spp revelaron patrones específicos de fermentación, lo que puede ser útil en su identificación y diagnóstico clínico. 4. Los resultados de las pruebas de morfología en agar chocolate para el género Haemophilus spp coinciden con las características morfológicas típicas de estas bacterias, lo cual es relevante para su identificación en el laboratorio.
Ramírez Saad, H. C., Díaz González, G., & Gay Jiménez, F. R. (2020).
Detección e identificación de Campylobacter jejuni en carne y heces de
pollo, utilizando técnicas moleculares, análisis de ácidos grasos, pruebas
morfológicas y bioquímicas.
Rodríguez, P., & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción.
Zamorano, J., Porte, L., Peláez D, J. M., & Varela A, C. (2002).
Manifestaciones inusuales de la infección por Neisseria.
Zepeda, C. A. (2007). Bacteriología Clínica de Haemophilus Influenzae.
VII. ANEXOS
Figura no. 1. Tinción Gram observada al género de Neisseria spp. Figura no. 2. Morfología de las colonias en distintos agares del género Neisseria spp. Agar chocolate: Agar sangre :
Figura no. 3. Pruebas realizadas a las especies del género de Neisseria spp. Moraxella catharrhalis Glucosa: Maltosa: Sacarosa: Neiserria gonorrhoeae Glucosa:
Sacarosa: Figura no. 4. Observación de la forma del género Haemophilus spp mediante microscopía. Figura no. 5. Morfología de las colonias de Haemophilus spp en agar chocolate.
Figura no. 6. Prueba de Factores de coagulación V,X y XV a las especies: Haempophilus parainfluenzae , Haempophilus ducreyi , Haemophilus influenzae del género Haemophilus spp. Figura no. 7. Observación de la forma del género Campylobacter spp mediante microscopía.
