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rotores pcr, Apuntes de Bioquímica

Asignatura: Bioquímica, Profesor: María Teresa Portolés, Carrera: Biología, Universidad: UCM

Tipo: Apuntes

2013/2014

Subido el 28/06/2014

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gontxi52 🇪🇸

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Tipos de centrifugación.
Centrifugación analítica.
Centrifugación preparativa.
Instrumentación. Tipos de centrífugas. Rotores.
Esencialmente una centrífuga es un aparato que separa partículas que están en solución.
En Biología estas partículas pueden ser células, orgánulos subcelulares o
macromoléculas. Hay dos tipos de procesos de centrifugación: centrifugación
preparativa, cuyo objeto es aislar partículas específicas, y centrifugación analítica, con
la que se pretenden estimar propiedades físicas de alguna partícula en concreto: sus
propiedades hidrodinámicas.
Dentro de la centrifugación preparativa hay dos métodos esenciales de separación: la
centrifugación diferencial y la centrifugación en gradiente de densidad (zonal e
isopícnica).
Todos estos tipos de centrifugación se explican con detalle en apartados sucesivos.
Independientemente del tipo de centrifugación que se vaya a llevar a cabo, el elemento
básico necesario es la centrífuga. Se pueden encontrar varios tipos de centrífugas.
A.- Tipos de centrífugas.
1. Centrífugas de baja velocidad, de sobremesa o clínicas.
Pequeño tamaño.
Sin refrigeración.
Máxima velocidad: 5000 rpm.
Útil para partículas grandes (células, precipitados de sales insolubles…)
1.a. Micrófugas: variante de las anteriores.
Velocidades altas: más de 10000 rpm y tubos cortos.
Volúmenes muy pequeños.
Útiles en Biología Molecular.
2. Centrífugas de alta velocidad.
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Tipos de centrifugación.

Centrifugación analítica.

Centrifugación preparativa.

Instrumentación. Tipos de centrífugas. Rotores.

Esencialmente una centrífuga es un aparato que separa partículas que están en solución. En Biología estas partículas pueden ser células, orgánulos subcelulares o macromoléculas. Hay dos tipos de procesos de centrifugación: centrifugación preparativa , cuyo objeto es aislar partículas específicas, y centrifugación analítica , con la que se pretenden estimar propiedades físicas de alguna partícula en concreto: sus propiedades hidrodinámicas. Dentro de la centrifugación preparativa hay dos métodos esenciales de separación: la centrifugación diferencial y la centrifugación en gradiente de densidad ( zonal e isopícnica ). Todos estos tipos de centrifugación se explican con detalle en apartados sucesivos. Independientemente del tipo de centrifugación que se vaya a llevar a cabo, el elemento básico necesario es la centrífuga. Se pueden encontrar varios tipos de centrífugas. A.- Tipos de centrífugas.

1. Centrífugas de baja velocidad, de sobremesa o clínicas. Pequeño tamaño. Sin refrigeración. Máxima velocidad: 5000 rpm. Útil para partículas grandes (células, precipitados de sales insolubles…) 1.a. Micrófugas: variante de las anteriores. Velocidades altas: más de 10000 rpm y tubos cortos. Volúmenes muy pequeños. Útiles en Biología Molecular. 2. Centrífugas de alta velocidad.

Velocidad entre 18000 y 25000 rpm. Refrigeradas, algunas con sistema de vacío. Útiles en la separación de fracciones celulares. Insuficientes para la separación de ribosomas, virus o macromoléculas.

3. Ultracentrífugas. Velocidad: a partir de 50000 rpm. Presentan sistemas auxiliares: sistemas de refrigeración, sistemas de alto vacío. 2 tipos: - Analíticas: obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación (s, PM). -Preparativas: aislamiento de partículas de bajo S (microsomas, virus, macromoléculas). B.- Tipos de rotores. Se tres tipos de rotores en las centrífugas:

  • Rotores flotantes.
  • Rotores de ángulo fijo o angulares.
  • Rotores verticales. Cada tipo de rotor es adecuado para un tipo determinado de separación: Tipos de separaciones TIPO DE ROTOR

SEDIMENTAR CENT.

ZONAL

CENT.

ISOPÍCNICA

Ángulo fijo excelente pobre bueno Vertical pobre bueno excelente Flotante ineficiente bueno adecuado A continuación se muestran unos diagramas de la estructura de cada rotor y esquemas que indican cómo sucede la sedimentación con cada rotor, tanto en centrifugación diferencial como en centrifugación en gradiente de densidad. 1.- Rotores flotantes.

En este tipo de rotores la centrifugación se lleva a cabo siempre en un ángulo fijo respecto al eje de rotación. 3.- Rotores verticales.