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Asignatura: Bioquímica, Profesor: María Teresa Portolés, Carrera: Biología, Universidad: UCM
Tipo: Apuntes
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Esencialmente una centrífuga es un aparato que separa partículas que están en solución. En Biología estas partículas pueden ser células, orgánulos subcelulares o macromoléculas. Hay dos tipos de procesos de centrifugación: centrifugación preparativa , cuyo objeto es aislar partículas específicas, y centrifugación analítica , con la que se pretenden estimar propiedades físicas de alguna partícula en concreto: sus propiedades hidrodinámicas. Dentro de la centrifugación preparativa hay dos métodos esenciales de separación: la centrifugación diferencial y la centrifugación en gradiente de densidad ( zonal e isopícnica ). Todos estos tipos de centrifugación se explican con detalle en apartados sucesivos. Independientemente del tipo de centrifugación que se vaya a llevar a cabo, el elemento básico necesario es la centrífuga. Se pueden encontrar varios tipos de centrífugas. A.- Tipos de centrífugas.
1. Centrífugas de baja velocidad, de sobremesa o clínicas. Pequeño tamaño. Sin refrigeración. Máxima velocidad: 5000 rpm. Útil para partículas grandes (células, precipitados de sales insolubles…) 1.a. Micrófugas: variante de las anteriores. Velocidades altas: más de 10000 rpm y tubos cortos. Volúmenes muy pequeños. Útiles en Biología Molecular. 2. Centrífugas de alta velocidad.
Velocidad entre 18000 y 25000 rpm. Refrigeradas, algunas con sistema de vacío. Útiles en la separación de fracciones celulares. Insuficientes para la separación de ribosomas, virus o macromoléculas.
3. Ultracentrífugas. Velocidad: a partir de 50000 rpm. Presentan sistemas auxiliares: sistemas de refrigeración, sistemas de alto vacío. 2 tipos: - Analíticas: obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación (s, PM). -Preparativas: aislamiento de partículas de bajo S (microsomas, virus, macromoléculas). B.- Tipos de rotores. Se tres tipos de rotores en las centrífugas:
Ángulo fijo excelente pobre bueno Vertical pobre bueno excelente Flotante ineficiente bueno adecuado A continuación se muestran unos diagramas de la estructura de cada rotor y esquemas que indican cómo sucede la sedimentación con cada rotor, tanto en centrifugación diferencial como en centrifugación en gradiente de densidad. 1.- Rotores flotantes.
En este tipo de rotores la centrifugación se lleva a cabo siempre en un ángulo fijo respecto al eje de rotación. 3.- Rotores verticales.