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tecnicas, Apuntes de Bioquímica

Universidad de Oviedo (UniOvi)Bioquímica
Prof. Carlos López-Otín

Asignatura: Bioquímica, Profesor: Carlos López- Otín, Carrera: Biología, Universidad: UNIOVI

Tipo: Apuntes

2012/2013

Subido el 10/11/2013

biologopin
biologopin 🇪🇸

3.9

(128)

130 documentos

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bg1
1
1
Hibridación de ácidos nucleicos
GTGCAAAAATCAACAAATAAACAGA
:::::::::::::::::::::::::
CACGTTTTTAGTTGTTTATTTGTCT
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:::::::::::::::::::::::
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2
Marcaje de sondas de DNA
5´-CAATGGCGCCCGGTATTCGTAGTTTCTGGCACCGCATTTCGGA-3´
:::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::
3´-GTTACCGCGGGCCATAAGCATCAAAGACCGTGGCGTAAAGCCT-5´
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3´-GTTACCGCGGGCCATAAGCATCAAAGACCGTGGCGTAAAGCCT-5´
DNA polimerasa
dATP, dGTP, dTTP, 32P-dCTP
Oligonucleótidos aleatorios
TAAAGC-5´
5´-GCGCCC 5´-TGGCACCGCATTTCGGA-3´
GGTATTCGTAGT
3´-GTTACCGCGGGCCATAAGCATCAAAGACCGTGGCG
3
RNADNA genómicoDNA viral
Electroforesis de ácidos nucleicos en
geles de agarosa
4
gel Nitrocelulosa
Hibridación de ácidos nucleicos:
Southern blot
pf3
pf4
pf5
pf8

Vista previa parcial del texto

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Hibridación de ácidos nucleicos

GTGCAAAAATCAACAAATAAACAGA:::::::::::::::::::::::::CACGTTTTTAGTTGTTTATTTGTCT

GCACCGCATTTCGGATTCTGTTA:::::::::::::::::::::::CGTGGCGTAAAGCCTAAGACAAT

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GCACCGCATTTCGGATTCTGTTA:::::::::::::::::::::::

Marcaje de sondas de DNA

5

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´

::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: 3

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5

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´

3

´-GTTACCGCGGGCCATAAGCATCAAAGACCGTGGCGTAAAGCCT-

´

DNA polimerasadATP, dGTP, dTTP,

(^32)

P-dCTP

Oligonucleótidos aleatorios

TAAAGC-

´

5

´-GCGCCC

5

´-TGGCACCGCATTTCGGA-

´

GGTATTCGTAGT

3

´-GTTACCGCGGGCCATAAGCATCAAAGACCGTGGCG

RNA

DNA genómico

DNA viral

Electroforesis de ácidos nucleicos en

geles de agarosa

gel

Nitrocelulosa

Hibridación de ácidos nucleicos:

Southern blot

Hibridación de ácidos nucleicos:

Southern blot

Electroforesis

DNA

Autorradiografía

1. Transferencia a

nitrocelulosa o nylon

2. Hibridación con sonda

específica radiactiva

3. Lavado y autorradiografía

Southern blot: RFLP

Polimorfismo en la Longitud de los Fragmentos de Restricción

ElectroforesisDNA genómico

Autorradiografía

EcoRI EcoRI

EcoRI EcoRI

EcoRI

SONDA

(B) (A) (B)

(A)

Mutación del gen de la anemia

falciforme

RFLP del gen de la anemia

falciforme

Colagenasa-

(MMP-8)

Stromelisina-1 (

MMP-

)

Stromelisina-

(MMP-10)

Colagenase-3 (

MMP-

)

Colagenasa-

(MMP-1)

Enamelisina (

MMP-

)

Metaloelastasa (

MMP-12)

Matrilisina (

MMP-

)

Localización por FISH de la colagenasa 3

Filogenéticamente agrupadas

Cromosoma 11 11q

LocalizaciLocalizació

ón cromos

n cromosó

ómica del

mica del

““cluster

cluster”

” de MMPs humanas

de MMPs humanas

Identificación de genes en una

genoteca

Identificación de genes en una

genoteca

The BRCA1 chip

control

patient

control + patient

T GCA

μ m

500

μ m

A poor prognosis signature predicts development of metastasis

(van’t Veer et al, 2002)

Síntesis en fase sólida de una cadena de DNA por el método del triéster fosfito

(Dimetoxitritilo)

(β -cianoetil) Finalmente se añade NH

3 para eliminar los grupos protectores

y liberar el oligonucleótido del soporte sólido

SÍNTESIS QUÍMICA DE ÁCIDOS NUCLEICOS

Vectores de clonación: Plásmidos

ddNTPs: terminadores de cadena

Terminadores de cadena fluorescentes

Secuenciación de DNA

Oligo:^ Molde: 3´--G A A T T C G C T A A T G C ---5´

5´--C T T A A

  • DNA polimerasa- Nucleótidos

dATP, dCTP, dGTP, dTTP

-Terminadores fluorescentes

ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP

5´--C T T A A G -3´5´--C T T A A G C -3´5´--C T T A A G C G -3´5´--C T T A A G C G A -3´5´--C T T A A G C G A T -3´5´--C T T A A G C G A T T -3´5´--C T T A A G C G A T T A -3´5´--C T T A A G C G A T T A C -3´ 5´--C T T A A G C G A T T A C G -3´

Detector defluorescencia

láser

Separación mediante electroforesis capilar de los fragmentos deDNA marcados

G

C

G

A

T

T

A

C

G...

1 tggtcttcagATGTCTGATTCGCTAAATCA

150 accagaagtcTACAGACTAAGCGATTTAGT

31 TCCATCGAGTTCTACGGTGCATGCAGATGA

120 AGGTAGCTCAAGATGCCACGTACGTCTACT

61 TGGATTCGAGCCACCAACATCTCCGGAAGA90 ACCTAAGCTCGGTGGTTGTAGAGGCCTTCT91 CAACAACAAAAAACCGTCTTTAGAACAAAT60 GTTGTTGTTTTTTGGCAGAAATCTTGTTTA

121 TAAACAGGAAAGAGAAGCGTTGTTTACGGg

30 ATTTGTCCTTTCTCTTCGCAACAAATGCCc

Reacción en cadena de la

polimerasa (PCR)