CARACTERIZACIÓN DE LINFOCITOS; RESPUESTA EFECTORA
La caracterización de los linfocitos y otras células implicadas en respuesta inmunitaria
requiere de la separación e identificación de las subpoblaciones celulares separadas.
-Los linfocitos pueden aislarse a partir de sangre, de médula, órganos linfoides, epitelios
o sitios donde se haya producido una reacción inflamatoria:
Los linfocitos se pueden separar de sangre periférica tratada con heparina
medinte un gradiente de Ficoll (mezcla de polímeros de carbohidratos) y metrizamida.
(Figura 2.22).
La centrifugación de la sangre diluida depositada sobre el “Ficoll-Hypaque”
permite la separación de los eritrocitos, polimorfonucleares y granulocitos (que van al
fondo) de las células mononucleares de sangre periférica (PBLs) que incluyen linfocitos
y algunos monocitos que quedan en la interfase.
En animales de experimentación y ocasionalmente en humanos se pueden
separar linfocitos a partir de otras locacalizaciones (bazo, timo, médula osea, ganglios
linfáticos, tejido linfoide asociado a mucosas). Sin embargo, normalmente el estudio de
las poblaciones de linfocitos se hace en sangre periférica.
-Obtención de poblaciones de linfocitos con especificidades homogeneas:
El estudio de la función efectora de células T depende en buena medida de
contar con poblaciones monoclonales de células T (especificidad única). Esto se puede
alcanzar de varias formas:
1-Como en el caso de los hibridomas B, células T específicas para un ag pueden
fusionarse con líneas celulares derivadas de linfomas de células T para generar híbridos
T. Estos híbridos son excelentes herramientas para el análisis de la especificidad, sin
embargo no se pueden utilizar para el estudio de la proliferación de células T en
respuesta a un ag específico puesto que están continuamente dividiendo.
Por esta razón, el estudio de las funciones efectoras de células T requiere de la
utilización de clones de células T. Son clones de células T derivadas de una sola célula
con especificidad única, a partir de cultivos heterogéneos denominados líneas de células
T, cuyo crecimiento depende de la reestimulación por ag periodica así como de la
adición de factores de crecimiento (Figura 2.31). La obtención de los clones de células
T se obtiene mediante clonación por el método de dilución límite. Cuando se lleva a
cabo esta dilución límite de una mezcla heterogénea de células T, algunos pocillos no
recibirán ninguna célula T específica de un ag determinado, otras una otras 2 etc. Las
células T en los pocillos son activadas con APCs, ag y factores de crecimiento. Después
de varios días en cultivo (necesarios para su crecimiento y diferenciación) las células de
cada pocillo son testadas en cuanto a su respuesta frente al ag (producción de
citoquinas , función efectora etc).
-Marcadores de diferenciación:
Marcador: cualquier característica funcional o estructural que permite definir un tipo o
población de células e incluso separarlas físicamente de las demás. El desarrollo de
anticuerpos monoclonales y tecnologías, como la citometría de flujo, que permite una
detección rápida de las células reconocidas por esos anticuerpos monoclonales, ha
permitido el conocimiento de un gran número de ags. de superficie celular que son
útiles como marcadores de diferenciación. Algunos de estos antígenos son exclusivos de
un determinado linaje celular y otros se expresan en un determinado estadio de
diferenciación y sirven para saber el estado de madurez de un determinada célula. Estas
moléculas han sido incluidas en un sistema de nomenclatura conocido como “CD” (Se
conocen más de 120 CDs diferentes).
