Cefar Diagnóstica Ltda.
Pesquisa e Desenvolvimento de Produtos para
Diagnósticos
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Discos para Antibiograma, Discos para
Identificação Presuntiva e Taxonômica de
Bactérias, Suplementos e Misturas Seletivas ,
Meios de Cultivo Hidratados, Bactérias
Padrão, Bioindicadores e Laminocultivos.
ANTIBIOGRAMA PASSO A PASSO
Teste de Sensibilidade por disco difusão
(Metodologia de Kirby-Bauer)
Etapa 1: Preparação dos Substratos
Os discos a serem utilizados devem ter passado por controle de qualidade prévio
quanto a sua eficácia para evitar quaisquer desvios na leitura e conseqüente erro ao
reportar o status de sensibilidade de um microrganismo.
Quanto ao meio de cultura, observar seu estado aparente (descolamento da placa,
espessura ≥ 4mm, possíveis contaminações etc.) caso esteja pré-pronto. Ao se optar pela
fabricação do meio de cultivo in house, deve-se determinar qual o meio mais adequado
para o crescimento do microrganismo a ser avaliado. Para testes com microrganismos de
crescimento rápido (p. ex. E. coli e Staphylococcus) usar meio de Mueller Hinton não
suplementado. Para testes com microrganismos nutricionalmente exigentes (Haemophilus
sp., Neisseria sp., pneumococos), usar meio de Mueller Hinton suplementado com sangue
e/ou nutrientes específicos para o desenvolvimento do microrganismo.
Em todos os casos atentar para a validade dos produtos utilizados.
Etapa 2: Preparação do Inóculo
O inóculo deverá ser preparado a partir de colônias isoladas e representativas do
microrganismo, presentes em placa de isolamento primário.
Para tanto, suspender em salina estéril ou caldo de cultivo a colônia a ser testada
de forma a obter uma suspensão com turvação equivalente a 0,5 da escala de McFarlland
(1,5 x 108 UFC/ml). Essa turvação pode ser obtida por:
— pré-incubação do inóculo (método do crescimento), onde a colônia isolada e
suspendida em meio de cultura e seu crescimento e monitorado até que atinja a
concentração desejada, ou por
— inoculação direta (método da suspensão direta), onde se suspende um número
suficiente de colônias para se atingir a concentração desejada.
A confirmação da concentração do inóculo pode ser feita através do método de
comparação visual com padrão de turvação correspondente a 0,5 da escala de McFarlland
ou pelo método turbidimétrico, com leitura do inóculo a 625nm. A D.O. (Densidade óptica –
Espectrofotômetro ) desejada é de 0,08 à 0,10.
Etapa 3: Inoculação na Placa
Imergir um swab estéril na suspensão bacteriana e, retirando o excesso de inóculo
através da compressão do swab nas paredes do tubo, semear a placa uniformemente em
estrias. A placa é uniformemente semeada por rotações a cada 60 graus.
