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DA GRANDE DOURADOS
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IMUNOLOGIA: COOMBS DIRETO E INDIRETO Emissão: 08 /0 9 /2021 Próxima revisão:
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1. OBJETIVOS
- Descrever a técnica empregada na ULACP para a realização de coombs direto (CD) e indireto
(CI).
2. MATERIAL
- Amostra de sangue em tubo EDTA e soro;
- Centrífuga para amostras;
- Centrífuga para cartões (DG Spin);
- Pipetas automáticas de 10μl, 25 μl , 50μl e 1ml;
- Ponteiras;
- Tubos de acrílico para suspensões;
- Cartão DG Gel Coombs;
- Solução de baixa força iônica (DG Gel Sol);
- Hemácias para investigação/identificação de anticorpos irregulares (Serascan Diana 1 e 2 e
Serascan Diana Di
a. .
3. DESCRIÇÃO DOS PROCEDIMENTOS
Os exames de CD e CI são realizados diariamente em duas rotinas, no período matutino após
as 11:00 (todas as amostras que entraram após as 18:00 do dia anterior) e no período vespertino entre 16:
e 17:00.
3.1. Coleta e processamento da amostra
1º Coletar a amostra de sangue em tubos com anticoagulante EDTA (tampa roxa), conforme
protocolo de coleta de amostras (PRT.ULACP.002). O exame de coombs indireto pode ser
realizado em amostra de soro (tampa amarela);
2º Cadastrar o exame no sistema laboratorial e etiquetar a amostra (POP.ULACP. 057 - Cadastro
de amostras);
3º Centrifugar o tubo de sangue com EDTA durante 5 minutos a 3400 rpm. Não devem ser
utilizadas amostras hemolisadas, turvas ou com presença de coágulos. O tubo de soro pode ser
centrifugado por 10 minutos;
4º Encaminhar a amostra junto da lista de pendência dos exames ao setor de imunologia
(POP.ULACP. 059 – Emissão de lista de pendência).
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- Observações :
- Quando o CD e CI são realizados na mesma amostra de hemograma é necessário confirmar
no setor da hematologia se a amostra já foi processada e se tem resultado liberado antes de
centrifugá-la.
- Amostras guardadas sob refrigeração (2- 8
o C ) podem ser utilizadas para o exame até 48
horas após a coleta.
3.2. Procedimento dos testes
3.2.1. Coombs direto
1º Deixar as amostras e os reagentes atingirem temperatura ambiente (18- 25
o C);
2º Inspecionar o estado dos cartões (não utilizar Cartões DG Gel Coombs que estejam com o
lacre de alumínio danificado, que tenham sinais de ressecamento, bolhas de ar no gel, gotas de
gel ou sobrenadante na parte superior do microtubo) e centrifugá-los por 9 minutos;
3º Identificar tubos de acrílico e os cartões a serem utilizados com o número do paciente;
4º Preparar a suspensão de hemácias a 1% (pipetar 1 ml de DG Gel Sol e 10 μl de concentrado
de hemácias no tubo de suspensão) e homogeneizar;
5º Retirar com cuidado o lacre de alumínio do microtubo a ser utilizado, mantendo o cartão na
posição vertical;
6º Pipetar 50 μl da suspensão de hemácias a 1% nos microtubos identificado;
7º Centrifugar o cartão DG gel Coombs por 9 minutos na centrífuga DG Spin;
8º Realizar a leitura.
3.2.2. Coombs Indireto
1º Deixar as amostras e os reagentes atingirem temperatura ambiente (18- 25
o C);
2º Inspecionar o estado dos cartões (não utilizar Cartões DG Gel Coombs que estejam com o
lacre de alumínio danificado, que tenham sinais de ressecamento, bolhas de ar no gel, gotas de
gel ou sobrenadante na parte superior do microtubo) e centrifugá-los por 9 minutos;
3º Identificar três microtubos da placa DG Gel Coombs como 1, 2 e Di
a para cada paciente;
4º Homogeneizar os frascos de hemácias Serascan Diana 1, 2 e Di
a e dispensar nos microtubos
identificados 50 μl (1 gota);
5º OBS: É importante SEMPRE pipetar as hemácias antes do soro ou plasma.
6º Adicionar 25 μl de soro ou plasma do paciente em cada microtubo;
7º Incubar a 37°C por 15 minutos;
8º Centrifugar durante 9 minutos na centrífuga DG Spin;
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Positivo
Escassas aglutinações de tamanho pequeno na metade inferior da
coluna.
1+ Algumas aglutinações de tamanho pequeno na coluna.
2+ Aglutinações de tamanho pequeno ou mediano na extensão da coluna.
Faixa superior de aglutinações de tamanho médio na metade superior da
coluna.
4+ Faixa de glóbulos vermelhos aglutinados na parte superior da coluna.
DP (Dupla população)
Faixa dupla de glóbulos vermelhos, no fundo e na parte superior da
coluna.
Fonte: GRIFOLS. Bula.
3.4. Limitações
- A presença de alguns medicamentos, soluções de dextranos, restos de gel de silicone do tubo
de extração da amostra, podem induzir um resultado positivo no Coombs direto.
- Ao utilizar o plasma, não é possível detectar as reações hemolíticas dependentes do
complemento.
- Restos de fibrina podem reter os glóbulos vermelhos não aglutinados, aparecendo uma capa
rosada no alto do gel.
- A presença de elevadas concentrações de imunoglobulinas ou outras proteínas séricas na
amostra pode neutralizar a antiglobulina humana polivalente inclusive após múltiplas lavagens.
3.5. Liberação dos resultados
Os resultados são inseridos no sistema de interfaciamento laboratorial e deverão ser
liberados após conferência por profissional de nível superior habilitado.
4. REFERÊNCIAS
GRIFOLS. Bula - Bula DG Gel Confirm. Diagnostic Grifols S.A: Espanha.
GRIFOLS. Guia rápido para utilização de DG gel® card. Diagnostic Grifols S.A: Espanha.
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5. HISTÓRICO DE REVISÃO
VERSÃO DATA DESCRIÇÃO DA ALTERAÇÃO
01 01 /0 7 /202 1 Elaboração do POP
Permitida a reprodução parcial ou total, desde que indicada a fonte
Elaboração
Andressa Leite Ferraz de Melo
Janaina Narcizo Rodrigues
Data: 01/ 07 /20 21
Análise
Fernanda Alves Luiz Rodrigues - Ofício - SEI 20
Data: 05/08/
Validação
Janaina Narcizo Rodrigues - GTPME - Ofício - SEI
Fuad Fayez Mahmoud - SVSSP - SEI
SVSSP/GAS/HU-UFGD (15378363)
Viviane Regina Noro – Chefe da ULACP - Ofício -
SEI 20 (15252521)
Paulo Serra Baruki - DADT/GAS/HU-UFGD
Data: 06/08/
Data: 20/08/
Data: 05/08/
Data: 30/08/
Aprovação:
Thaisa Pase – Gerente de Atenção à Saúde Data: 08 /09/
