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" A S-408 DETERMINAÇÃO DE GLICOGÊNIO Carrol, N. V.; Longley, R.W. and Roe, J.H. The determination of glycogen in liver and muscle by use of anthrone reagente. J. Biol. v. 583-590, 1956. I- REAGENTES Reagente de antrona preparado (Dissolvendo-se 200 mg de antrona em 100 ml de H,SO, a 95 %). Hidróxido de potássio Na;SO, saturado. Álcool etílico. II - PROCEDIMENTO A - 300 - 500 mg de tecido (figado ou músculo) são colocados em 2 ml de KOH à 30 % em tubos de centrifugação de 15 ml. B - Cobrir com bola de vidro e hidrolisar em banho-maria por 1 hora e acrescentar 5 gotas de NaySOy saturado ao retirar do banho. € - Colocar 4,5 ml de álcool etílico à 95 % em cada tubo. D - Agitar bem com bastão de vidro e recolocar o tubo com o bastão em banho-maria não muito quente durante 15 segundos até o álcool começar a ferver. E - Escorrer o bastão na parede interna do tubo. Identificar o bastão e colocar de lado. F - Centrifugar à 2000 rpm por 10 minutos. Verificar se há emulsão entre as camadas do sobrenadante. Caso houver, acrescentar mais álcool, agitar e centrifugar novamente. G - Descartar o sobrenadante. H - Inverter o tubo e deixar escorrer. I- Levantar o precipitado com 2 ml de água quente. J - Recolocar o bastão de vidro e aquecer agitando até dissolver o glicogênio. L - Acrescentar 4,5 mi de álcool à 95 %. M - Agitar com o bastão e aquecer durante 15 segundos até o álcool começar a ferver. N - Repetir os itens E, F, G, H, 1. O - Completar para 10 ml com HO destilada. P - Retirar 0,1 ml ou mais e completar o volume para 2 ml com água destilada. Q - Colocar em água fria e adicionar 4 ml do reagente de antrona em 100 ml de H5SO, (95 %) . O reagente de ser adicionado devagar misturando-se bem. R - Colocar os tubos em água fervente por 10 minutos. S - Resfriar à temperatura ambiente e no fotocolorimetro à 620 nm. IH - BRANCO E PADRÕES Branco = 2 ml de H,0O destilada + 4 ml de reagente antrona. Padrões = P5o - 2 ml + 4 ml de antrona Pao - 2 ml + 4 ml de antrona Pso - 2 ml + 4 ml de antrona 
