Técnicas Histológicas: Estudos de Estruturas Teciduais, Resumos de Histologia

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Técnicas histológicas

Profa Simone Marcuzzo

Histologia

• Estudo da estrutura e inter-relação dos

constituintes teciduais de um organismo

• Células e material extracelular

• Tecidos

Macroscopia e microscopia

Anatomia

Histologia

Mikro = pequeno

Skopein = examinar

• Problemas

• Dimensão
• Transparência

• Soluções

• Microscópios
• Colorações

Histologia

Preparo das lâminas

1. Fixação

- prevenção de autólise e ataque bacteriano

- preservar a estrutura e composição das

moléculas dos tecidos

- permite uma coloração adequada

- endurecimento do material

Fixadores

• Reação principal: estabilização das ptns

• Ligação cruzada entre as ptns (ptns solúveis

fixadas às ptns estruturais – gel) – relações

se mantêm.

• Aditivos

• Aditivos se incorporam aos tecidos. A [ ]

diminui, pois vai sendo irreversivelmente

incorporado ao tecido

Imersão

Perfusão

2. Processamento

• Processamento

(desidratação,

diafanização ou

clarificação e

emblocamento em

parafina)

3. Microtomia

4. Coloração

Hematoxilina e eosina (HE)

• hidratar os cortes
• hematoxilina de Mayer 8 min
• deixar os corte em água da torneira

por 20 min

• eosina 0,5% 30 seg
• desidratar em sol de álcoois crescentes
• diafanizar xilol
• cobrir com bálsamo e lamínulas

Cortes

Perfusão

Perfusão

• • VibrVibráátomotomo (cortes(cortes coronaiscoronais

de 200

de 200 μ

μ m);

m);

Dicromato de pot

Dicromato de pot á

á ssio 3%

ssio 3%

por 24h; por 24h;

• • Lavados emLavados em áágua destilada,gua destilada,

colocados colocados emem lamlamíínulasnulas – –

sandu

sandu í

í ches

ches ”

Nitrato de prata (1,5%);

Nitrato de prata (1,5%);

• • Lavados emLavados em ááguagua

destilada;

destilada;

Montados em

Montados em

lâminas, cobertoslâminas, cobertos

com bcom báálsamo dolsamo do

Canad

Canad

á

á

e lam

e lam

í

í

nulas.

nulas.

Nissl

• Os corpúsculos de Nissl ou grânulos de Nissl

ou também denominada substância cromófila ,

são acumulações basófilas , que se encontram

no citoplasma de células nervosas. Recebem

este nome devido a Franz Nissl , neurólogo

alemão (1860-1919).

• Estes grânulos são retículo endoplasmático

rugoso (com ribossomas) e são locais de

síntese de proteínas

H.E. Nissl

Microscopia eletrônica

• Perfusão: paraformaldeparaformaldeíído 4% edo 4% e

glutaraldeglutaraldeíídodo 1,5%, dilu1,5%, diluíídos emdos em

tampão fosfato 0,1 M (pH=7,

tampão fosfato 0,1 M (pH=7,

• Lavagem PBS 30 min (3X)
• Pós-fixação em OsO4 1% 1

hora

• Lavagem PBS 15 min (3X)
• Desidratação:
• Álcool 50% 5 min (2X)
• Álcool 70% 10 min (2X)
• Álcool 96% 20 min (2X)
• Álcool 100% 20 min (2X)
  • Imersão em óxido de propileno

5 min

• Imersão em óxido de propileno

• DURCUPAN 10 min

• DURCUPAN 24 hs (vácuo)
• Polimerização em lâminas

cobertas com DURCUPAN

em estufa 60°C 48 hs

• Cortes semifinos, montados em lâminas
• Corados com azul de toluidina 1% diluído em tetraborato

de sódio 1%

• Analisados no microscópio óptico

Imunoistoquímica

Interpretação