Primera Unidad
Enzimología y Metabolismo Energético
- DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA --
INTRODUCCION:
Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un alto grado de especificidad y
eficiencia; permitiendo que las reacciones químicas dentro de la célula ocurran rápidamente a través de vías bien definidas. Sin
estas proteínas especializadas, la vida tal como es no podría existir.
Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que cada reacción química debe ser
catalizada por una determinada enzima. El reactante o sustancia química que reacciona para dar un producto en un sistema
enzimático se llama sustrato, entonces en un organismo vivo habría tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes.
Debido que se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada, solo muy pocas enzimas pueden
medirse directamente.
En general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras:
1. Verificando el sustrato no transformado (SUSTRATO RESIDUAL) después de un tiempo determinado de incubación en
condiciones específicas de pH y temperatura.
2. Verificando los productos liberados después (PRODUCTOS FORMADOS) de un tiempo determinado de incubación en
condiciones específicas de pH y temperatura.
FINALIDAD:
Determinar la actividad enzimática, utilizando la enzima amilasa salival que tiene la capacidad de degradar el almidón en
maltosa (disacárido reductor) y algo de glucosa; verificando tanto el sustrato residual y los productos formados en dicha
reacción.
MATERIAL Y EQUIPO:
Solución de almidón pH 6.0 al 1%.
Cloruro de sodio solución 0.1M
Enzima al 1% (amilasa salival).
Ácido Clorhídrico 0.05N
Solución yodada.
Reactivo Folin Wu:
o Solución Cúprica alcalina.
o Solución fosfomolíbdica.
PROCEDIMIENTO:
1) Rotular previamente los tubos de ensayo y preparar el SISTEMA A, Colocando lo que se indica en el siguiente cuadro:
COMPONENTES (en ml)
TUBOS DE ENSAYO
I
II
Solución de almidón pH 6.0 al 1%
5.0
5.0
Solución de Cloruro de sodio 0.1M
1.0
1.0
Agua destilada
4.0
3.0
Mezclar y colocar los tubos a incubación por cinco minutos a 37 °C
Agregar: Amilasa Salival al 1.0%
--
1.0
Mezclar y continuar la incubación por 10 minutos (computar el tiempo desde el momento en que el preparado
enzimático fue agregado al tubo)
