PROBLEMAS DE TÉCNICAS
1- Teniendo en cuenta los datos obtenidos para la cadena de la hemoglobina humana. Indique cómo
separaría esta cadena de una mezcla que contiene otras dos proteínas de pI 4,0 y 10,0 y PM 62 y 9
KDa respectivamente
2- Se dispone de una mezcla de ribonucleasa (PM 13600), insulina (PM 5700) y lisozima (PM
14700), cuyos restos ionizables por molécula de proteína vienen dados en la siguiente tabla:
pK Ribonucleasa Insulina Lisozima
α-COOH 4,7 1 2 1
α-NH2 7.8 1 2 1
Asp+Glu 4,7 10 3 10
His 6,5 4 2 1
Tyr 9,9 6 4 3
Lys 10.2 10 1 6
Arg 12,0 4 1 11
a) Dar un valor aproximado de la carga de estas proteínas a pH 4,7 y 11
b) Representar gráficamente el comportamiento electroforético de la mezcla, utilizando cada uno
de estos valores de pH
c) ¿En qué orden eluirán en una columna DEAE-celulosa (intercambiador aniónico) utilizando
el adecuado gradiente de pH
d) ¿En que orden eluirán en un Sephadex (cromatografía de penetrabilidad)
3- En una purificación de una proteína, los dializados de la precipitación fraccionada con sulfato
amónico se cargan en una columna de DEAE-celulosa, obteniéndose en la elución, con un
gradiente de pH, un solo pico. Las fracciones correspondientes a éste se concentran y se cargan
en una columna de Sephadex G-200, apareciendo dos picos en el diagrama de elución. Comente
los resultados obtenidos. ¿Puede tratarse de una proteína que se disocia?.
4- Razone el orden de elución de las siguientes proteínas cuando se someten a una cromatografía de
penetrabilidad en Sephadex G-150 (intervalo de fraccionamiento entre 5 y 300 kDa): mioglobina
(17 kDa), catalasa (248 kDa), citocromo c (13,4 kDa), quimotripsinógeno (25 kDa),
seroalbúmina (66 kDa), miosina (468 kDa), ureasa (481 kDa).
5- Una proteína, en condiciones de pH y temperatura próximas a las condiciones fisiológicas,
presenta un peso molecular de 140000 Da. Cuando la misma proteína se somete a una
electroforesis (PAGE-SDS) en ausencia (1) o presencia (2) de 2- mercaptoetanol se observa la
siguiente separación:
1 2 3
Marcadores:
Albúmina PM= 67000
Ovoalbúmina PM= 43000
Anhidrasa carbónica PM= 30000
Inhibidor tripsina PM= 2000
Indique la estructura completa de la proteína