PRÁCTICA 1
“MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA CÉLULA”:
La célula se conoce mejor debido a los avances en los microscopios.
CAMPO CLARO
ÓPTICOS CONTRASTE DE FASE
FLUORESCENCIA
MICROSCÓPIOS
TRANSMISIÓN (MET)
ELECTRÓNICO
DE BARRIDO (MEB)
l.r. = límite de resolución (distancia mínima a la que debe estar dos puntos para
verlos de forma individual).
MICROSCOPIO ÓPTICO
La fuente es una bombilla, la luz atraviesa diferentes lentes que van aumentando
la imagen, las células son transparentes por lo tanto o se fijan y se colorean (teñir)
o se utiliza el microscopio óptico de contraste de fase (donde se puede ver sin fijar
y sin teñir => células vivas).
En el caso del microscopio óptico de FLUORESCENCIA exige la utilización de
FLUOROCROMOS que son sustancias que absorben una determinada longitud de
onda y emiten una luz de una longitud de onda mayor. Existen dos fluorocromos
importantes:
•RODAMINA F0 E 0 absorbe en verde y emite rojo.
•FLUORESCEINA F0 E 0 absorbe en azul y emite en verde.
Se utilizan para la inmunofluorescencia. Hay dos tipos de reacciones:
1. DIRECTA F 0 E 0 consiste en poner a la célula un anticuerpo contra una
determinada proteína que está marcado con un fluorocromo.
2. INDIRECTA F0 E 0 consiste en poner un anticuerpo primario con un determinado
antígeno y después poner a un anticuerpo secundario frente al primer
anticuerpo, ese segundo anticuerpo va marcado con fluorocromo. En la
directa tienes menor fluorescencia.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
La fuente es un chorro de electrones al vacío, en lugar de lentes son campos
magnéticos, se obtienen imágenes en pantallas que se fotografían (todas las
imágenes serán en blanco y negro => NUNCA A COLOR).
En el microscopio electrónico de transmisión se utiliza la técnica de CRIOFRACTURA,
donde la muestra se congela en Nitrógeno Líquido para que pierda el agua, s ele
pasa una cuchilla y se sombrea con elementos como colorantes pesados. El
microscopio electrónico de barrio es parecido al de transmisión, el chorro de
ITOLOGÍA E HISTOLOGÍA ANIMAL Y VEGETAL
