cuadernillo prácticas de laboratorio, Ejercicios de Biología general

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CUADERNILLO DE PRÁCTICAS DE

LABORATORIO DE BIOLOGÍA Y

GENÉTICA

GRADO EN NUTRICIÓN HUMANA Y

DIETÉTICA

Nombre y Apellidos:

Práctica nº 1:

INTRODUCCIÓN AL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO.

INTRODUCCIÓN:

Microscopio óptico

En al microscopio óptico (también llamado fotónico o lumínico), el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos.

Consta de dos partes:

• Elementos ópticos.
• Elementos mecánicos.

A) Elementos mecánicos:

1. Base: (pie) sostiene el aparato.
2. Columna o brazo: lleva adosado los tornillos de movimiento y sostiene al tubo.
3. Tubo: sostiene en le parte superior al ocular y en la inferior al revólver donde se atornillan los distintos objetivos.
4. Tornillos de movimiento: Macrométrico: permite un enfoque rápido, es decir, sube o baja rápidamente la platina, dando un enfoque aproximado del preparado. Micrométrico: permite terminar de enfocar, es decir, permite un enfoque exacto del preparado.
5. Platina: soporte donde se coloca la preparación a observar, posee un orificio central que permite el paso de la luz proveniente de la fuente lumínica. Posee tornillos de desplazamiento de derecha a izquierda y de adelante hacia atrás. Dos pinzas evitan que la preparación se desplace.

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1- Colocar el preparado con el cubreobjetos hacia arriba, fijándolo con las pinzas de la

platina. A continuación colocar en posición el objetivo adecuado para la observación.

2- Encender la fuente de luz. Precaución: no usar el máximo de luz.

3- Con el tornillo macrométrico se aproxima lo más posible el objetivo SIN TOCAR LA

PREPARACIÓN. Se observa a través del ocular y se eleva muy lentamente el objetivo

hasta enfocar (hasta que aparezca la imagen). Por último se acaba de enfocar con el

tornillo micrométrico.

5- Girar el revólver sin modificar la posición de la platina, para cambiar a un objetivo de

mayor aumento. Precaución!!! mirando por el lateral prestando atención a que la lente

no roce la preparación, para evitar que ambas se dañen. Moviendo el micrométrico se

logra la nitidez deseada.

6- Cuando se utiliza el objetivo de inmersión se coloca una gota de aceite sobre la

preparación y para enfocar se baja el objetivo muy despacio hasta tocar el aceite, CON

MUCHO CUIDADO!!!!. Posteriormente se enfoca normalmente. Prestad especial

atención a que los otros objetivos no toquen el aceite, pues resultarían dañados. Una

vez finalizada la visualización limpiar los objetivos con papel y alcohol especialmente el

de inmersión.

Consideraciones importantes.

• El foco de iluminación se mantiene encendido exclusivamente durante el periodo de

observación. Evitando, por tanto recalentamiento de la lámpara.

• Es completamente necesario dejar el microscopio limpio después de utilizarlo y en el

caso de emplear un objetivo de inmersión hay que limpiarlo meticulosamente (papel

humedecido en alcohol).

PRÁCTICA nº2:

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO. TÉCNICAS DE TINCIÓN.

OBSERVACIÓN DE LAS DISTINTAS CÉLULAS SANGUÍNEAS.

INTRODUCCIÓN

La sangre es un tejido fluido complejo constituido por el plasma y las células sanguíneas: glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas. Contiene también gran cantidad de sustancias y gases como el oxígeno, el anhídrido carbónico, hidratos de carbono, proteínas y hormonas, derivado de su función de transporte en el organismo. Gracias a esta función transportadora ejerce además las funciones: respiratoria, nutritiva, excretora, inmunitaria y reguladora de la temperatura.

Existen, por término medio, 5 litros de sangre, ya que la cantidad varía en función del sexo.

Las células de la sangre se encuentran suspendidas en un medio acuoso complejo denominado plasma que constituye el 55-60 % del volumen sanguíneo. Aunque su composición principal es el agua, contiene también gran cantidad de sustancias químicas de gran interés biológico (sodio, calcio, proteínas, etc), haciendo posible con ello que se conserve la estructura y función del resto de los órganos y tejidos del organismo.

La fracción líquida se separa de la sólida por centrifugación o sedimentación de este modo, una vez eliminada las proteínas implicadas en la coagulación, el resto del plasma se denomina suero. La porción celular es el hematocrito.

 Tipos celulares:

En la sangre se distinguen tres tipos celulares: glóbulos rojos, también llamados eritrocitos o hematíes, glóbulos blancos o leucocitos y plaquetas.

1. Eritrocitos:  Forma de disco bicóncavo de 7,5 u.  Carecen de núcleo, ribosomas, mitocondrias…  Muy deformables.  Función: transportar oxógeno y dióxido de carbono. Contienen hemoglobina, que es una proteína transportadora.

2. Plaquetas o trombocitos:  Pequeños discos en forma de huso u ovales de 2-4 u.  Son fragmentos de megacariocitos por lo que tiene formas irregulares.  Función: Hemostasia, formación del tapón de plaquetas iniciando así la formación de coágulos o trombos. Son fuente de factores de crecimiento. 3. Clasificación de los leucocitos:

Según la morfología del núcleo y la granulación del citoplasma.

 POLIMORFONUCLEARES o GRANULOCITOS: o NEUTRÓFILOS: SEGMENTADOS O CAYADOS. o EOSINÓFILOS o BASÓFILOS

 MONONUCLEARES O AGRANULOCITOS:

o MONOCITOS o LINFOCITOS

ERITROCITO NEUTRÓFILO EOSINÓFILO BASÓFILO LINFOCITO MONOCITO (^) PLAQUETA

Estructura

Disco bicóncavo7,5 mm sin núcleo,ribosomas, mitocondrias…

Núcleo polilobuladoCitoplasma con granulación.

Núcleopolilobulado Citoplasma congranulación

Núcleopolilobulado Citoplasma congranulación

Núcleo nolobulado Citoplasma singranulación

Núcleo polilobuladoCitoplasma sin granulación No núcleo

Función

(^) Transporte de oxígeno y dióxido de carbono (Hb)

Fagocitanpequeños microorganismospatógenos. Gránuloscontienen enzimasdigestivas

Defensa celular,fagocitan grandesmicroorganismos patógenos, comogusanos parásitos. En lasreacciones alérgicas liberansustancias anti- inflamatoria

Segreganheparina (anticoagulante)e histamina (rta. Inflamatoria)

Defensa humoral,segrega anticuerpos.Participa en la rta. y regulación delsistema inmunitario

Capaz de emigrarfuera de la sangre a losespacios hísticos como Macrófagos , célulasfagocíticas que pueden ingerirbacterias, restos celulares ycélulas cancerosas

Hemostasi primaria

Núumero

(^) • Hombres: 5.500.000/mm • Mujeres:^3 4.800.000/mm^3

Leucocitos totales: Adulto 5.000-10.000 uL^ 140.000400.000/- mm^3

CÉLULAS SANGUÍNEAS

Para ello se deposita una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos (la gota de sangre la obtenemos al pincharnos el dedo con una lanceta, previo lavado del dedo con alcohol). Se coloca otro portaobjetos apoyado sobre el primero como indica el dibujo, y se desliza sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre.

A continuación el frotis se tiñe, para lo cual se pueden utilizar diferentes técnicas de tinción como: Hematoxilina-Eosina, Giemsa, May-Grümwald-Giemsa, Wright (Eosina- azul de metileno), Panóptico, etc.

En este caso hemos utilizado la TINCIÓN DE MAY-GRÜNWALD, en la que se emplean dos soluciones colorantes:

 La solución de May-Grünwald , que contiene el colorante ániónico eosina y el colorante catiónico azul de metileno ambos disueltos en metanol.

 La solución de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una serie de productos de la oxidación de este último tales como el azur A, el azur B, el violeta de metilo y el azul de metilo.

Resultado:

 Los núcleos aparecen en colores que van del color azul al púrpura-negro.

 Los citoplasmas de las células maduras aparecen de un color violeta muy pálido o marrón muy pálido.

 Los glóbulos rojos, ricos en hemoglobina aparecen de colores entre rosados y beige.

 Los gránulos de los neutrófilos aparecen de colores entre violeta y marrón, debido a que poseen compuestos de carácter neutro por lo que fijan ambos colorantes simultáneamente.

 Los gránulos de los eosinófilos aparecen de color naranja debido a que contienen sustancias de carácter básicos que fijan los colorantes ácidos.

 Los gránulos de los basófilos de color entre azul y negro, poseen sustancias de carácter ácido que fijan los colorantes básicos

 Los gránulos de los linfocitos grandes aparecen de color púrpura.

 Las células con gran producción de ARN (como linfocitos productores de inmunoglobulinas y células inmaduras) presentan un citoplasma de color azul intenso.

Cabe destacar que las coloraciones finales obtenidas son muy dependientes del pH de las soluciones de tinción y de las soluciones de lavado, por lo que los tonos pueden variar bastante, teniendo un aspecto más verdoso cuando el pH final obtenido es cercano a 5 y un tono rojizo cuando el pH final es cercano a 9. Para evitar estos efectos se suelen utilizar soluciones amortiguadoras de pH neutro para preparar las soluciones de tinción y las soluciones de lavado.

Plaquetas y neutrófilos eosinófilos basófilos monocitos linfocitos.

OBJETIVOS

Conocer las células sanguíneas y observarlas al microscopio. Realizar frotis sanguíneos. Realizar las tinciones hematológicas corrientes. Manipular con seguridad material contaminado.

RESULTADOS:

En las preparaciones realizadas, identificar los diferentes tipos celulares y dibujarlos realizando una descripción de los detalles morfológicos (tamaño, forma, presencia y forma del núcleo).

PRÁCTICA nº3:

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO. PLASMÓLISIS EN PLANTAS.

INTRODUCCIÓN:

El agua es el componente más abundante de las células; constituye el 90% o más del peso fresco de algunos tejidos. Se distribuye por toda la célula, y en vegetales se encuentra en mayor proporción en la vacuola (3/4 partes).

Dentro de su pared de celulosa, la célula vegetal posee una o varias vacuolas grandes de savia celular. Esta savia es una solución de distintas sales, azúcares, y otras sustancias orgánicas en agua. Las membranas plasmáticas y vacuolas que separan la savia celular del líquido fuera de la célula, son de permeabilidad diferencial: las moléculas de agua atraviesan fácilmente las membranas biológicas tanto la membrana plasmática como la membrana de la vacuola (tonoplasto) y lo hacen principalmente a través de canales proteicos denominados acuaporinas, sin embargo, las sustancias disueltas en el agua no lo hacen con tanta facilidad o no lo hacen.

El proceso de difusión de agua a través de una membrana semipermeable (membrana permeable al disolvente pero no a los solutos) se denomina ósmosis. Esta difusión de agua se produce desde una región de mayor concentración de agua a una región de menor concentración de agua.

Fenómeno de plasmólisis

PROTOCOLO:

1. Cortar un fragmento de tejido vegetal, en este caso la hoja de cebolla y obsérvalo al microscopio haciendo una preparación en fresco : colocar una gota de agua sobre el portaobjetos y poner encima el fragmento de cebolla. Es conveniente que realices un esquema de las células que estás observando, para que puedas hacer la comparación con las células plasmolizadas.
2. Cortar nuevamente una lámina de cebolla y añadirle unas gotitas de colorante, Rojo neutro al 0,01%. Dejar actuar 5 minutos y observar al microscopio.
3. En un vaso de precipitado de 100 ml prepara una solución salina saturada agregando en un poco de NaCl hasta que se forme un precipitado que ya no pueda disolverse.
4. Con un cuentagotas tomar un poco de ésta solución y colocarla en la placa petri. Colocar en la solución la lámina de cebolla teñida anteriormente, la cual es hipertónica con respecto a la célula. Dejarla 15 minutos reposando, lavarla y sacarla.
5. Observar al microscopio y describir la morfología de las células en comparación con las que se observaron en el paso 1 y/o 2.

Figura.2 Plasmólisis 40x. a) Antes b) Después

CUESTIONARIO:

1. ¿A qué se debe que las moléculas como las sales atraviesan la membrana celular con menor facilidad?

2. ¿Es lo mismo turgencia y plasmólisis? Explique.

nuevos núcleos hijos. A continuación tiene lugar la división del citoplasma, denominada

citocinesis.

Profase Metafase

Anafase Telofase

RESULTADOS: OBSERVACIÓN DE LAS PREPARACIONES

¿Cuántas células en mitosis has podido identificar? ¿En qué etapa se encontraba cada una? Dibuja algunas de las observadas indicando siempre el objetivo con el que las has observado.

¿Por qué la anafase es la fase crucial de la mitosis?

¿Has podido observar alguna estructura en células en interfase? Dibuja cómo se veía.