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Determinación de la actividad enzimática
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
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PRÁCTICA No. 5 : DETERMINACIÓN DE ENZIMAS EN SUERO
Profesora:
Química Farmacéutica
Doctora en Bioquímica
Docente de la Facultad de Química y Farmacia
Las enzimas son consideradas los catalizadores más eficientes de la naturaleza, cuya
función principal es permitir que las reacciones que tienen lugar en nuestro organismo
puedan desarrollarse en la forma y tiempo adecuado, esto considerando que al cumplir
su papel como catalizadores propician el aumento en la velocidad de la reacción
desarrollada. No obstante, existen algunos factores que pueden afectar la velocidad
enzimática tales como el pH, la temperatura o incluso la concentración. Estas sustancias
poseen la peculiaridad de ser específicas, pues cada tipo de enzima reacciona con un o
un par de sustratos.
La enzima está compuesta por un sitio activo, esta es la parte donde el sustrato se va a
unir con la enzima, tal como se muestra esquematizado en la ilustración 1.
Ilustración 1 Sustrato entrando al sitio activo
La determinación de las enzimas es importante en un contexto clínico, pues su
conocimiento ayuda al diagnóstico, tratamiento y pronóstico de diversas enfermedades.
Un claro ejemplo de ello es la determinación de la enzima amilasa, la cual es producida
en el páncreas y en las glándulas salivales. Se dice que cuando el páncreas se encuentra
enfermo o inflamado este libera elevados niveles de amilasa en la sangre, por ende, se
puede deducir que la identificación de los valores de amilasa puede ser encontrados por
sangre o inclusive orina.
Entre los métodos de determinación de proteínas se destaca la técnica AST/GOT el cual
es el análisis de sangre del aspartato aminotransferasa, una de las enzimas que ayuda
al hígado a transformar el alimento en energía. En el desarrollo de este método se
requiere un espectrofotómetro de 340 nm, un cronómetro, registrador gráfico o
impresoras, cubetas de 1 cm de paso de luz y pipetas de volumen variable para reactivos
y muestras. Así mismo la implementación de diferentes reactivos es indispensable, cada
uno específico para el sustrato AST y la coenzima AST. Dichos reactivos son descritos
en la Tabla 1.
sanguínea.
promedio de los datos registrados.
muestra por medio de cálculos de absorbancia.
Ver guía.
2.2.1.2 Valeria
2.2.1.3 José
2.2.1.4 Andrea
2.2.2 Enzima GPT (Tabla 3 )
Para calcular la concentración de la enzima GPT se utilizan las ecuaciones (1) y ( 3 ):
2.2.2.1 Ricardo
2.2.2.2 Valeria
2.2.2.3 José
2.2.2.4 Andrea
En primer lugar, se evidencia que Ricardo presenta unos niveles altos de las enzima GOT
(68,33 U/L) y GPT (72,49 U/L) con respecto a los valores normales de referencia en
hombres adultos (GOT: 8 – 40 U/L) y (GPT: 10 – 40 U/L), lo cual es, principalmente,
indicador de enfermedad hepática. Un incremento en el nivel de ALT se puede deber a:
cirrosis hepática; necrosis hepática; hepatitis; hemocromatosis; hígado graso; isquemia
hepática; tumor o cáncer de hígado; medicamentos como las estatinas, los antibióticos,
los de quimioterapia, la aspirina, los opioides y los barbitúricos; ejercicio intenso o daño
muscular grave; dosis altas de vitamina A; daño renal o pulmonar; mononucleosis;
pancreatitis; ataque cardiaco o insuficiencia cardiaca. Un incremento en el nivel de AST
puede darse por causa de: daño muscular; ataque cardiaco; pancreatitis; hemólisis; daño
hepático por hígado graso, consumo excesivo de alcohol, hepatitis viral y
medicamentosa, mononucleosis o cáncer. Además, los niveles de AST incrementan
cuando ocurre daño hepático a causa de toxinas como el plomo, mercurio o pesticidas.
Las personas con anorexia también pueden presentar niveles altos de AST.
También se evidencia que Valeria presenta un niveles bajo de la enzima GOT (4,17 U/L),
pero unos niveles normales de GPT (30,83 U/L) con respecto a los niveles normales de
referencia en mujeres adultas (GOT: 6–34 U/L) (GPT: 7 – 35 U/L). La baja concentración
de GOT se considera normal en la mayoría de los casos, sin embargo, existen situaciones
muy puntuales y extremadamente infrecuentes que pueden desembocar en niveles bajos
de GOT. Estas situaciones incluyen: deficiencia de vitamina B6, enfermedad renal crónica
y terapia de reemplazo hormonal.
Seguidamente, José presenta unos niveles ligeramente elevados de GOT y notablemente
elevados de GPT, por lo que se tienen indicios de posible enfermedad hepática. Se
recomienda realizar más pruebas y exámenes para confirmar o descartar lo indicado por
los resultados de GOT y GPT.
A continuación, es posible evidenciar que Andrea presenta un nivel normal de GOT, pero
no así de GPT, que se encuentra supremamente elevada, lo cual sugiere fuertemente la
presencia de hepatitis, diabetes, insuficiencia cardiaca, daño hepático, mononucleosis
infecciosa o miopatía. Sin embargo, niveles elevados de GPT no significan
automáticamente que exista alguna de las anteriores patologías, puesto que, durante el
trascurso del día, los niveles de GPT pueden fluctuar debido a diversas situaciones
normales e, incluso, pueden aumentar por simple ejercicio físico. Por lo tanto, haría falta
realizar más pruebas para confirmar o descartar el padecimiento de alguna de las
enfermedades anteriormente mencionadas.
Comparando los datos obtenidos en esta práctica con los de una práctica similar
1
realiza-
da por estudiantes de Farmacia de la Universidad del Atlántico, Colombia, en el periodo
2018 - 2, se pueden encontrar discordancias y posibles coincidencias.
AMILASA EN sangre [Anónimo]. MedlinePlus - Health Information from the National
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