[S]/v
[S]
1/V
max
K
M
/V
max
-K
M
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Ingeniería Bioquímica Industrial
Ingeniería Enzimática
Trimestre 2015-I 27 de enero de 2015
1. Se ha determinado la velocidad inicial de una reacción catalizada por una enzima
(E
0
=1.0 nM) para diversas concentraciones de sustrato. Los datos obtenidos son:
[S] (µM) V (µM min
-
1
)
5 22
10 39
20 65
50 102
100 120
200 135
a. Calcula V
max
y K
M
utilizando un método de regresión lineal
b. Calcula k
cat
c. Determina el coeficiente de especificidad,
M
cat
K
k
=
α
Solución:
Utilizando la ecuación de Lineweaver-Burk
m = 0.1962 min
b = 0.0061 µM
-1
min
1
max
min93.163
0061
.
0
1
−
⋅⋅== MV
µ
MVK
M
µ
⋅=∗=∗= 16.3293.1631962.01962.0
max
Sabemos que V
max
= k
cat
[E]
t
, por lo tanto
[ ]
15
3
1
max
min10x639.1
10x1
min93.163
−
−
−
⋅=
⋅
⋅⋅
== M
M
E
V
k
t
cat
µ
µ
El coeficiente de especificidad es:
11
15
min33.097,5
16.32
min10x639.1
−−
−
=== M
MK
k
M
cat
µ
µ
α
2. En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a varias
concentraciones de substrato [S]. La concentración de la enzima es 3 nM. Se graficó
[S]/v versus [S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y es 590.6 s y la
pendiente es 0.3684 s µM
-1
. ¿Cuál es el valor de K
M
y el de V
max
para esta reacción
enzimática? ¿Cuál es el valor de k
cat
para esta enzima?
Solución:
Se observa que se utilizó la ecuación de Hanes-Woolf
