Prof. Rubén Valdivieso
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO ACADÉMICOS DE CIENCIAS
DINÁMICAS
METROLOGÍA y ANÁLISIS INSTRUMENTAL
PRACTICA Nº 7
FOTOCOLORIMETRÍA (ESPECTROFOTOMETRIA) Y UTILIZACION EN EL CAMPO CLINICO.
INTRODUCCIÓN
Se denomina Método Fotocolorimétrico al método óptico de absorción molecular que nos permite cuantificar sustancias y
está basado en la medición de la intensidad de la luz monocromática transmitida a través de una solución coloreada, ya sea
que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal calidad mediante reacciones químicas
adecuadas.
La mayoría de los cuerpos en solución tienen una capacidad de absorción selectiva sobre determinadas radiaciones
luminosas, cuando ésta absorción se realiza en la zona espectral visible, las soluciones las ve el observador de un color
que es producido por las radiaciones que no han sido absorbidas.
Aplicaciones: Para una medición típica solo se precisa una pequeña cantidad de muestra y se trata de un método no
destructivo; las muestras se pueden usar para posteriores análisis. En el campo de las ciencias de la vida, normalmente se
aplica la espectrofotometría ultravioleta-visible en el análisis analitos presentes en el suero sanguíneo (glucosa, colesterol,
lípidos, proteínas acu rico, creatinina, urea, Calcio, etc.); ácidos nucleicos y cultivos de células bacterianas y analitos
presentes en los frutos, vegetales, etc.
1. COMPETENCIAS:
Determina la longitud de onda de máxima absorbancia para una solución coloreada.
Construye e interpreta una curva de calibración.
Reconoce los 2 métodos para la determinación de la concentración de una solución coloreada.
Determina la concentración de una muestra problema haciendo uso de los dos métodos.
MARCO TEORICO
Cuando un haz de luz (LUZ Incidente, Io) atraviesa una solución, una parte de la radiación queda absorbida por las moléculas
del soluto coloreado, sufriendo una reducción de su intensidad (LU Z Transmitida, It), proporcional a la capacidad de
absorción de dichas moléculas, otra parte de la radiación se pierde por fenómenos físicos como reflexión, refracción y
difracción de la luz.
La longitud de onda en la que las moléculas de dicha sustancia absorbe con mayor intensidad a la luz, se denomina
"Longitud de Máxima Absorción" o "Lambda Máximo".
Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad de luz, la intensidad de la luz transmitida por una
solución disminuirá en relación con el número de moléculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador.
Este número varía de acuerdo con la concentración del soluto y el espesor del recipiente que contiene la solución, estos
factores están considerados en la "Ley de Lambert y Beer", que rige los principios de la Colorimetría y cuyas formas de
expresión son:
A=Log (Io / It) = ε l c = D.O. = 2 – Log % T
Io = Intensidad de luz incidente It = Intensidad de luz transmitida
ε = Coeficiente de extinción molar l = longitud (ancho) de la cubeta de lectura (cm).
C = Concentración Molar A = Absorbancia
D.O. = Densidad óptica % T = porcentaje de transmitancia
