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Facultad de Ciencias de la Salud.
Medicina.
Laboratorio de Bioquímica General.
“Determinación de Aminoácidos”
Grupo 202-9.
Mesa 1.
Guerrero Ramírez Nadya Alexandra.
Moreno Cárdenas Camila Rebeca.
Quinteros Carabalí Evelyn Johanna.
Román Castro Jossue Ismael.
Docente:
María Belén Prado Vivar.
28 de noviembre del 2017.
ÍNDICE
1 ......................................................................................................................
2. OBJETIVOS.
2.1.-Objetivos generales:
- Determinar por métodos colorimétricos la presencia de aminoácidos que actúan juntamente con el grupo R.
- Realizar los diferentes procesos químicos correctamente para la detección de la presencia de aminoácidos por los diferentes métodos.
2.2.-Objetivos específicos:
- Distinguir correctamente las sustancias que tengan proteínas de las que no tengan por la presencia de aminoácidos y su coloración.
- Procesar correctamente las muestras para así obtener resultados acertados.
3. MARCO TEÓRICO.
Existen diferentes métodos para determinar si existen o no aminoácidos los cuales son:
- Método de la ninhidrina: Este método es aplicado cuando existen un grupo carboxilo y aminos que se encuentren libres, no se aplica en la hidroxiprolina y prolina, esta reacciona con un pH 3-4, se colorea de purpura y la intensidad del color aumenta mientras más aminoácidos existan. (Aguilera, 2014)
- Reactivo de Biuret: se produce entre los péptidos y las proteínas, pero no en los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse, su coloración es violeta. (Aguilera, 2014)
- Prueba de coagulación: en esta prueba se identifican albúminas, globulinas, glutelinas, y prolaminas, la existencia de aminoácidos se manifiesta cuando en la muestra se observa un coágulo (Aguilera, 2014)
- Prueba de sulfato de amonio : las proteínas se precipitan al colocar soluciones concentradas que hay de sales de amonio, esto se da debido a que la molécula se va a deshidratar y seguidamente se precipitará. (Aguilera, 2014)
- Ácido acético 30% (5ml)
- Ninhidrina (5ml)
- Acetato de plomo (5ml)
- Naftol (5ml)
- Hipoclorito sodio 2% (5ml)
- Prueba millón (3ml)
4.4.-Métodos:
- Rotulamos a los dos tubos que se va a trabajar. El primero con el nombre de Ninhidrina (caldo de gallina) y el otro con (huevo).
- Primero colocamos la sustancia problema en cada tubo de ensayo; en el primero se coloca 1ml de caldo de gallina y en el segundo tubo de ensayo colocamos 1ml de huevo batido.
- Después con pipetas diferentes aplicamos 1ml de sustancia de Ninhidrina en cada tubo de ensayo
- Luego, prendemos el mechero de alcohol y junto con una pinza calentamos por 1 minuto el tubo de ensayo.
- Por último, se deja enfriar y se observa los cambios.
- Rotulamos a los dos tubos que se va a trabajar. El primero con el nombre de Biuret (caldo de gallina) y el otro con (huevo).
- Primero colocamos la sustancia problema en cada tubo de ensayo; en el primero se coloca 1ml de caldo de gallina y en el segundo tubo de ensayo colocamos 1ml de huevo batido.
- Después con pipetas diferentes colocamos 1ml de sustancia NaOH al 10 % en cada tubo de ensayo.
- Luego, se mezcla de a poco (gota a gota) el sulfato cúprico (CuSO4) al 0.5%
- Por último, se agita y se observa la coloración.
- Rotulamos a los dos tubos que se va a trabajar. El primero con el nombre de xantoprotéica (caldo de gallina) y el otro con (huevo).
- Primero colocamos la sustancia problema en cada tubo de ensayo; en el primero se coloca 1ml de caldo de gallina y en el segundo tubo de ensayo colocamos 1ml de huevo batido.
- Después, colocamos ácido nítrico HNO 3 concentrado al 0.5ml
- Luego, se mezcla y se calienta con el mechero de alcohol por 1 minuto.
- Finalmente, se observa los cambios.
- Rotulamos a los dos tubos que se va a trabajar. El primero con el nombre de coagulación (caldo de gallina) y el otro con (huevo).
- Primero colocamos la sustancia problema en cada tubo de ensayo; en el primero se coloca 2ml de caldo de gallina y en el segundo tubo de ensayo colocamos 2ml de huevo batido.
- Después colocamos en cada tubo de ensayo 4 gotas de Ácido acético al 30%.
- Luego, agregamos en cada tubo de ensayo 1 ml de solución saturada de NaCl
- (^) Posteriormente, se mezcla y calienta en el mechero de alcohol por 1 minuto.
- Finalmente, se observa los cambios.
- Prueba de Sulfato de Amonio
- Rotulamos a los dos tubos que se va a trabajar. El primero con el nombre de sulfato de amonio (caldo de gallina) y el otro con (huevo).
- Primero colocamos la sustancia problema en cada tubo de ensayo; en el primero se coloca 1ml de caldo de gallina y en el segundo tubo de ensayo colocamos 1ml de huevo batido.
- Después, se coloca 1ml de sustancia de sulfato de amonio al 50%
- Luego, se mezcla y se deja reposar por 10 minutos.
- Pasado el tiempo se coloca el tubo de ensayo a la centrifugadora a 3000r.p.m en 10 minutos.
- Por último, se observa la precipitación.
5.1 Tabla de resultados.
5.2.- Registro fotográfico.
6. DISCUSIÓN.
Los resultados obtenidos mediante una serie de reacciones de identificación de los aminoácidos presentes en una muestra 1 con clara de huevo y una muestra 2 con caldo de
- Prueba de Sakaguchi: esta prueba se la realiza para poder reconocer la presencia de arginina y con esta reacción positiva se puede determinar la presencia de proteínas y aminoácidos ya que su coloración es de color rojizo; esto se debe a que presenta un grupo guanidina.
- Prueba de coagulación : en esta prueba se puede observar la existencia de sustancias como la albúmina, globulinas y glutelinas. Aquí para ver si esta prueba está reaccionando da positivo cuando existe la presencia de coágulos esto se genera por una deshidratación de las moléculas.
2.. ¿Cuáles son las aplicaciones prácticas de las pruebas?
Si bien es cierto que los ensayos realizados son de carácter cualitativo, por lo que sirven únicamente de referencia en una o varias muestras problema, desde el punto de vista médico, se necesita saber valores para compararlos con tablas estándares, las cuales nos permiten determinar si se encuentra dentro de los parámetros considerados como normales de un aminoácido especifico, que puede ser vital (esencial) para nuestro metabolismo. Luego del análisis de los respectivos datos, permite tomar acciones frente a cualquier tipo de desviaciones.
7.1.3 Para el siguiente pentapéptido, diga cuales pruebas y porque serán positivas. (ALA-VAL-GLY-GLU-LYS).
Para la tabla que se muestra a continuación, se consideró que se conoce cada uno de los elementos del polipéptido. Pero como se puede evidenciar con las pruebas realizadas en la presente práctica, no podemos llegar a determinar un aminoácido específico, puesto que para esto se necesita pruebas más específicas que incluyen la ruptura del mismo como por ejemplo la cromatografía de capa fina, entre otras.
7.1.4 Defina los siguientes términos: aminoácidos, proteínas, análisis cualitativo, cuantitativo.
- Aminoácidos: El aminoácido es una molécula orgánica de peso molecular relativamente bajo esta contiene un grupo amino y un grupo carboxilo unido a una cadena carbonada lo que les diferencia entre sí es el grupo R que está unido a esta cadena carbonada. Además, los aminoácidos son la unidad básica de las proteínas y de los polipéptidos.
- Proteínas: Biomoléculas orgánicas estructuradas por su unidad básica que son los aminoácidos y en algunos casos por sustancias derivadas. Estas biomoléculas cumplen varias funciones en el cuerpo humano algunas de ellas son: Estructurales, contráctiles, enzimáticas, homeostáticas, etc. Cabe decir que estas biomoléculas son versátiles y diversas.
- Análisis cualitativo: En este análisis el fin es predecir la presencia ya sea de algún elemento, compuesto, sustancia o fase de alguno de estos. Si se está hablando de un
análisis cualitativo orgánico o bioquímico predice la presencia de los grupos funcionales y compuestos orgánicos.
- Análisis cuantitativo: Al contrario que el análisis cualitativo este quiere predecir la cantidad de tal elemento, compuesto en una muestra específica.
5.. Efectúe un enlace peptídico.
8. REFERENCIAS.
Aguilera, C. C. (16 de Marzo de 2014). Bioquímica. Obtenido de http:// laboratoriobioquimica3semestre.blogspot.com/2014/03/materiales-1gradilla-para- tubos-vaso-de.html Garcez, M. (2016). muyfitness. Obtenido de https://muyfitness.com/niveles-de-fructosa-en- una-naranja_13144434/ Mckee. (2014). las bases moleculares para la vida. NN: MC. grawl. hill. Roca, P., Oliver, J., & Rodríguez, A. M. (2003). BioquÍmica, Técnicas y Métodos. Madrid: Editorial Hélice. shalom. (26 de mayo de 2011). Shalom. Obtenido de http://shalom- dtb.blogspot.com/2011/05/practica-de-identificacion-de-la.html
9. TABLA PARTICIPACIÓN GRUPAL.
INTEGRANTES. PARTE INFORME.
Guerrero Nadya. Resultados, discusión, anexos
Moreno Camila. Conclusión, anexos, y carátula.
Román Jossue. Marco teórico, objetivos, anexos.
Quinteros Evelyn. Materiales, métodos, anexos.
