Primera
Unidad
Fundamentos Bioquímicos, Enzimología y Biología Molecular de las
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- NATURALEZA QUÍMICA DE LAS ENZIMAS Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA --
INTRODUCCION:
Las enzimas son proteínas relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización e inactivación, por efecto de diversos
agentes físicos y químicos como: temperatura, ácidos, álcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc.
Las enzimas se encuentran en pequeñas concentraciones en los materiales biológicos, resultando complicada su individualización o
purificación. Para poder verificar directamente las propiedades comunes de la naturaleza proteica que las caracterizan,
experimentalmente se pueden utilizar las propiedades de catalizadores específicos que tienen las enzimas, como indicador de las
alteraciones que pueden sufrir éstas cuando son sometidas a la acción de diferentes agentes físicos y químicos.
La finalidad de la presente práctica, es evidenciar la característica proteica de la enzima que al exponerse a agentes físicos y
químicos varían su comportamiento y actividad catalítica.
PROCEDIMIENTO:
1) Preparar: el primer sistema denominado: SISTEMA A. Rotular previamente los tubos y colocar en cada uno lo que se indica en
el siguiente cuadro:
COMPONENTES (en ml)
TUBOS DE ENSAYO
I II III IV V VI
Amilasa al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 1N - 2.4 - - - -
HCl 3N - - 2.4 - - -
Ácido Tricloro acético 20% - - - 2.4 - -
Sulfato de Cobre al 20% - - - - 2.4 -
Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 2.4 - - - - 2.4
a. Observar el aspecto y color producido.
b. Dejar los 5 primeros tubos del sistema en reposo por 10 minutos a la temperatura ambiente.
c. Colocar el tubo VI en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.
2) Durante este lapso, preparar el segundo sistema llamado SISTEMA B:
COMPONENTES (en ml) TUBOS DE ENSAYO
I II III IV V VI
Almidón al 1.0% en solución acuosa 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Buffer fosfato 0.1 M / pH 6.6 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
NaCl 0.15 M 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua Destilada 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Pre incubar por dos minutos a 37 °C
Agregar enzima tratada, del sistema (A) 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6
PRACTICA N°
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