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CURSO FORMACIÓN TÉCNICO EN "LABORATORIO DE
DIAGNOSTICO CLÍNICO"
Mis apuntes y resúmenes
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RESUMEN HEMATOLOGÍA Y CITOLOGÍA (dedicado a Mire...
Resumen Análisis BIOQUÍMICO (fundamentos y técni...
MICROBIOLOGIA Bacteriologia, Medios de cultivo y...
APUNTES MUESTRAS BIOLOGICAS
MICROBIOLOGIA Bacteriologia, Medios de cultivo y
pruebas bioquimicas
Tema 1 Microbiologia Clínica
(evolución histórica, conceptos generales, organización de
laboratorio)
Microbiología la ciencia que estudia los seres vivos no visibles al ojo desnudo (microorganismos; aunque se incluyen metazoos parásitos no microscópicos), que atribuyen el origen de la vida sobre la tierra y el mantenimiento del equilibrio en la biosfera (en vida libre como saprofitos o depredadores con distinto grado de simbiosis => comensalismo, mutualismo o parasitismo), aunque también tienen efectos negativos como producir enfermedades; Los virus y viroides => parásitos endo celulares obligados (no se replica en vida libre); Microbiología medica => estudia a los microorganismos que afectan al hombre (reino procariota/ bacterias, los eucariotas del reino Fungí, los virus y viroides); Parasitología => estudia los eucariotas microscópicas (protozoos) y macroscópicas (metazoos) de endo o ectoparásito (los artrópodos estudiados también como vectores y reservorios de enfermedades transmisibles);
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Microbiología medica: Microbiología general => se estudia conocimientos históricos, clasificación, estructura y fisiología de los microorganismos. Microbiología especial => se estudia 4 grupos de agentes infecciosos (bacteriología, virología, micología y parasitología) + recientemente los viroides (moleculas circulares de ARN de bajo peso molecular que carecen de cubierta proteica) y los priones (proteínas codificadas por genes celulares y actúan como señales reguladoras, responsables de algunas enfermedades neurológicas graves Creutzfeldt Jacob y el Kuru)
Evolución histórica de la microbiología como ciencia especializada no aparece hasta finales del siglo XIX; cuatro periodos: 1º => periodo especulativo (desde la antigüedad hasta los primeros microscopistas) 2º => desde 1675 hasta la mitad del siglo XIX (descubrimiento de los microorganismos por Leeuwenhoek en 1675 constructor de lentes holandes que inventó el microscópio simple) 3º => periodo de cultivo de microorganismos hasta finales de siglo XIX (Pasteur y Koch logro cristalizar a la Microbiología como ciencia experimental bien asentada. 4º => desde principios del siglo XX hasta ahora (se estudian fisiológica, bioquímica, genética, ecológica y surgimiento de virología, inmunológia. Redi, Spallanzani y otros fisicos del siglo XVII demostraron que el microorganismo no se genera espontaneamente (de novo), postularon la teoría de la biogénesis (ser vivo nace de otro ser vivo). Pasteur (1822 1895) demostró que la fermentación era producida por microorganismos en crecimiento. Se dobló el interes de muchos naturalistas tras la publicación de los libros de Darwin. Davaine (1863 1868) encontró grandes cantidades de m.o. en la sangre de las vacas (bacteridios) y Robert Koch (1843 1910) en 1876 aisló con sus técnicas de cultivo puro el bacilo de antrax (Bacillus anthracis); mas tarde Koch y su colegas confirmaron que las esporas son formas diferenciadas y resistentes de bacilos y demostraron que la enfermedad podía transmitir sucesivamente a ratones sanos inoculándose bacilos obtenidos de cultivo puro; basados en los postulados su maestro Henle, Koch postuló siguentes criterios: el microorganismo debe estar presente en todos los individuos enfermos el m.o. debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro la inoculación del m.o crecido en cultivo puro a animales sanos debe provocar la aparición de sintomas específicos de la enfermedad en cuestión (cada enfermedad infecciosa esta causada por un tipo de bacteria diferente) el m.o. debe poder ser re aislado del hospedador infectado de forma experimental. Las 2 décadas siguientes, se aislaron una gran variedad de bacterias patógenas; en Francia el Instituto Pasteur se concentro sobre los procesos infectivos, la inmunidad del hospedador y la obtención de vacunas (vacuna antirrábica ensayada por Pasteur en 1885, contribuye al nacimiento de la inmunológia).
célula procariótica => mas primitiva, no esta organizada y no posee verdadero núcleo (ADN no esta rodeado de una membrana se encuentra libre); no posee mitocondrias, sino mesosomas (repliegues de la membrana celular donde se hallan las enzimas responsables de la respiración); tampoco hay cloroplastos, sino cromatóforos (contienen clorofilas); los ribosomas se encuentran pegados a la membrana citoplasmática que están protegidas por una pared celular (peptidoglicano exclusivo de procariotas, aunque arqueo bacterias y micoplasmas no lo poseen); las arqueo bacterias, las eubacterias y los eucariotas se difieren en => la estructura de RNA polimerasa y en la composicion de los lípidos de su membrana.
los virus => un grupo aparte que no se ha integrado en ningún reino y se discute si son o no seres vivos; es incapaces de reproducirse por si mismos, dependen de un huésped que les proporcione el mecanismo de la replicación y síntesis de macromoléculas); una vez que han conseguido esto, salen de la célula infectada produciendo su muerte; hay virus que infectan a celulas animales, otros a vegetales y otros a bacterias; un virus se define como => un bloque de material genético rodeado por una cubierta proteica que le sirve como vehículo de transmisión; algunos pueden llevar una envoltura circundante compuesta de lípidos y carbohidratos; los viroides (30 especies) => agentes infecciosos (de menor complejidad genética y estructural conocida) que solo afectan a plantas superiores; constituidos por 1 cadena de ARN cíclica corta que no codifica proteínas; tamaño 10 veces menor que los virus (parecen ser una etapa primitiva de los virus); los priones (proteinceous infectious particle) => partículas patógenas de naturaleza proteica sin acido nucleico; identificados en 1982, aunque desde el siglo XVIII se sospechaba de su existencia; las enfermedades "prion" en el hombre (encefalopatías espongiformes transmisibles) afectan al sistema nervioso y se cree que también a los musculos.
Organización de un laboratorio de microbiologia clínica Estructura (depende del tamaño y características, espacio que dispone y numero de personal):
- Áreas/ secciones básicas: Sección de toma de muestras Sección de recepción y registro de muestras Sección de siembra de muestras Sección de medios de cultivo Área de almacén
- Áreas/ secciones especializadas: Sección de bacteriología (se divide en áreas => urocultivos, coprocultivos y parásitos, exudados y anaerobios, hemocultivos) Sección de micobacterias Sección de micología Sección de antibióticos Sección de serología o inmuno microbiología Otras secciones (virología o biología molecular)
Normas de seguridad e higiene en el trabajo tratan de evitar el riesgo de infección al personal que trabaja en el laboratorio así como su extensión a la comunidad (establecidas por el CDC/ centro de control de la enfermedad) americano y del instituto nacional de salud de ese país.
Niveles de seguridad biología: Nivel 1 => valido para laboratorios de enseñanza que trabajan con microorganismo no patógenos bien conocidos y patógenos oportunistas: las puertas permanecen cerradas mientras se trabaja las mesas de trabajo se desinfectan al terminar el trabajo y cuando es necesario (derrame/contaminación) todo material contaminado debe ser esterilizado antes de desecharlo no pipetear aspirando con la boca no comer, fumar, aplicarse cosméticos, morder los lapices, bolígrafos o tener alimentos en el laboratorio. lavarse las manos después de trabajar con microorganismos y al terminar la jornada (uso de guantes). realizar las técnicas correctamente, evitando la producción de aerosoles. llevar bata durante el trabajo que se quitara al salir del laboratorio. los materiales que no pueden ser esterilizados en el propio laboratorio, se transportaran en contenedores cerrados para el traslado hasta su descontaminación; debe existir autoclave para descontaminar en el mismo edificio. deben existir programas de desinfección y desratización el diseño del laboratorio debe permitir una fácil limpieza incluso entre los muebles que deben ser impermeable, resistentes a los ácidos, álcalis y al fuego. cada laboratorio debe tener un lavabo. si las ventanas se pueden abrir, deben estar protegidas con mosquiteros
Nivel 2 => permite el trabajo con microorganismo de peligrosidad potencial moderada (hospitales o centros de salud a nivel primario); ademas de las normas del nivel 1, comprende las siguientes: es obligatorio el uso de bata o pijamas que no deben usarse fuera del laboratorio, especialmente en el comedor o cafetería o salidas fuera del edificio. las técnicas serologícas con Ags sin capacidad infectante pueden realizarse en las mesas de trabajo el acceso al laboratorio debe estar limitado.
- Control de calidad de las muestras => se debe controlar desde su obtención, transporte y procesamiento hasta la emisión de los resultados siguiendo normas elaboradas con criterios claros de rechazo y establecer horarios fijos de recepción de muestras.
- Medios de cultivo => deben ser empaquetados correctamente en bolsas cerradas para evitar la desecación, almacenados correctamente y etiquetados con la fecha de caducidad (a 4ºC dura 8 10 semanas; sin empaquetar a 4ºC dura 2 semanas; los caldos y agar en tubo con tapón a 4ºC 6 meses); los que están preparados en el laboratorio, siguen un control siguiente: Control de esterilidad => comprobar con 1 unidad de cada lote (<100) o 3 unidad si es un gran lote mediante incubación a 37ºC durante 24 horas; si se contaminan, debe rechazarse. Control de crecimiento => se inocula un medio de cada lote con un inoculo reducido microorganismo control (cepas de colección) que asegure el crecimiento o con un inoculo estándar. Control de medios con características selectivas => se inocula con el germen que no debe crecer en ello. Control de las características bioquímicas => se utiliza un control positivo que produce la reacción bioquímica esperada.
- Reactivos de identificación => se deben marcar con la fecha del primer uso y la caducidad. Los reactivos de identificación se deben utilizar siempre con un control positivo y negativo. No deben utilizarse reactivos caducados o cuyo aspecto no sea el adecuado y debe asegurarse su almacenamiento correcto Hay que utilizar siempre el lote o el vial cuya caducidad este mas próxima
- Cepas control => una colección de cepas de ATCC dispone de prácticamente todos los microorganismo que se utilizan en controles de calidad.
- Mantenimiento de las cepas control => se mantiene de manera que no pierdan sus características típicas.
- Control de aparatos => se debe mantener una temperatura ambiente en el laboratorio entre 23 29ºC y la humedad entre 30 50 %; al final de jornada se limpian los superficies con un antiséptico (fenol 5% o glutaraldehido) Limpieza => las neveras y congeladores se limpian y se descongelan periódicamente (mínimo 1 vez al año); las cabinas de seguridad, centrifugas, agitadores de tubos se limpian todos los días al acabar el trabajo con antiséptico fenol 5%; las estufas y baños se limpian cada 6 meses. Temperatura => un control diario de las estufas, baños, neveras y congeladores antes de empezar el trabajo; se usa un termómetro para cada aparato colocado en el interior del mismo Atmósfera de incubación => se controla la cantidad de CO2 de las estufas con un indicador que suele estar acoplado con sistema de alarma; se controla la atmósfera anaerobia mediante catalizadores e indicadores de azul de metileno. Cabinas de flujo laminar => un cambio periódico de los filtros y un control de las lamparas ultravioleta. Autoclaves => control de esterilizacion (físico del aparato, químico tiras y biológico esporas) Microscopios => se limpian con suavidad al terminar la jornada, taparlos con su funda; se limpian cada semana los objetivos con alcohol eter 50%; se realiza periódicamente un ajuste de condensadores y objetivos.
Tema 3 Técnicas de
descontaminación, desinfección y esterilización
En todo laboratorio de microbiologia se debe tener en cuenta: todo material para la recogida de muestra debe estar esterilizado todo material para la realización de las pruebas debe estar estéril antes de cualquier esterilización, el material debe estar limpio y/o desinfectado conviene utilizar material desechable el material de uso aséptico debe guardarse separadamente del uso séptico la limpieza de residuos en el suelo, mesas de trabajo y cualquier superficie se realiza mediante desinfección periódica destreza y formación por parte del personal sanitario de laboratorio (deben trabajar en condiciones de total asepsia) la manipulación de todo material debe seguir el protocolo de trabajo con medidas cautelares para la prevención de accidentes laborales.
Fases de la manipulación del material del laboratorio Material desechable (jeringas, guantes, lancetas) => se utiliza una sola vez y se desecha o se destruye; material punzante o cortante se desecha en recipientes resistentes a la punción; si no es punzante, se auto clavar y se tirar en contenedores especiales. Material reutilizable (de vidrio, de metal, batas, gorro de tela) después de su utilización se limpia, se desinfecta o se esteriliza (según los casos) Todo instrumento se limpia inmediatamente después de utilizar (según el protocolo de cada caso), después se desinfecta o se esteriliza directamente para destruir cualquier forma de vida incluidas formas de resistencia o esporas. Materiales no esterilizados (pero si se desinfecta destruir toda forma de vida patógena) que se pueden utilizar => portaobjetos para la tinción, frascos lavadores con agua destilada, frasco de colorantes, etc.
Principios básicos de descontaminación concepto de limpieza, desinfección y esterilización Limpieza => se separa el material entre los de uso aséptico y séptico, se limpia; los instrumentos se limpian primero con agua fría (la sangre se adhieren con calor), después con agua caliente y jabón frotando en los ángulos, se enjuaga y se volverá a aclarar con agua destilada; se seca y se comprueba su estado; se protege si es necesario. Desinfección => materiales o superficies inertes (suelo, mesa), se utilizan metodos químicos (detergentes, hipocloritos, etc.); desinfección de manos, piel y mucosas corresponde a técnicas de antisepsia (se aplica tópicamente antisépticos). Esterilización => se usa para la reutilización de cualquier material.
Técnicas de descontaminación física A. Tratamientos térmicos por calor seco y húmedo consisten en la esterilización o desinfección de los gérmenes por aplicación de calor seco o húmedo.
- Descontaminación por calor seco (depende de la temperatura, se consigue o no la esterilización) Flameado => exponer un objeto a la llama de un mechero durante un tiempo según el material de que se trate (p.ej. la asa de siembra) Incineración => se usa un horno crematorio para destruir material desechables (jeringas, catéteres) Horno seco => estufas de Pasteur o Poupinel (hornos metálicos de doble pared y bandejas ajustables) mediante resistencias eléctricas, esterilizan durante 2 horas a 180º o 3horas y media a 160ºC; tienen termómetro externo que mide la temperatura en el interior y un selector de temperatura y un reloj;
- Descontaminación por calor húmedo
Rayos gamma => para conseguir esterilización en frió, producidos por isotopos radiactivos; presentan un poder de penetración muy alto, constituyendo el método de esterilización mas utilizado a nivel industrial (materiales de uso único o desechable p.ej. guantes, jeringas, catéteres, prótesis, válvulas y que pudiera alterarse por calor)
- Sistemas de filtración (filtrar a las estructuras que sobrepasen un determinado tamaño, según el tipo de filtro; la efectividad del filtro es proporcional al tamaño del poro, pudiendo conseguirse esterilización); presencia de presión, vació y la carga del filtro (+); las bacterias en medios neutros son ( ). Filtros de membrana => filtros de celulosa muy purificada y con un tamaño de poro fino o muy fino; existe desde sistemas sencillos hasta sistemas de piezas desmontables que llevan acoplada una bomba de vació para ejercer succión sobre el medio a filtrar.
Filtros de vidrio poroso o de fibra de vidrio => se utilizan en casos específicos y tienen mas resistencia que los anteriores.
Filtros de Chamberland => son de porcelana porosa, mas caros que los anteriores y menos utilizados.
Filtros de flujo laminar => dispositivos de filtrado donde entra aire contaminado y sale estéril; utilizados como mecanismo de esterilización en campanas de flujo laminar, en quirófanos y recinto que pretende crear o mantener un ambiente estéril; flujo => vertical u
horizontal.
Ultrasonidos => introducir el material en tanques de distintos tamaños con liquido desinfectante; una vez puesto en marcha el dispositivo, comienza a vibrar a gran velocidad originando pequeñísimas burbujas que entran en todos los recodos del material consiguiendo eliminar los microorganismos; es poco utilizado, caro y poco practico.
Técnicas de descontaminación química
- Metodos químicos de desinfección (desinfectantes que se aplica sobre objetos y superficies y antisépticos que se aplica sobre la piel y mucosas); condiciones que cumplir en un buen método de desinfección: matar el mayor numero de gérmenes o al menos todos los patógenos ser económico no ser corrosivo, toxico ni irritante para los tejidos se deberá diluir al menos en agua tener un olor agradable Los mas utilizados: Detergentes catiónicos => diluidos al 1% para desinfección de manos; mas frecuente para limpieza y desinfección de paredes, suelos, ropa y objetos (sin diluir) Clorofenoles => muy eficaces y se asocian con los detergentes catiónicos para mejorar el grado de desinfección. Compuestos clorados => para desinfección de superficies, ropas, urinarios; se suelen usar diluidos en agua (lejias /hipocloritos) Acido fenico => diluido al 5% para la limpiar objetos y superficies. Amoniaco Los antisépticos mas utilizados: Alcoholes => limpiar y desinfectar la piel, las manos (etanol), el filo de instrumental y superficies pequeñas (metanol) que no tiene contacto con la piel (p.ej. alcohol isopropilico 70%) Mercurio cromo => contiene mercurio y un buen desinfectante para heridas superficiales (las mantiene secas y protegidas) Derivados yodados => para preparar la piel antes de una intervención quirúrgica, en la punción lumbar, antes de punción para hemo cultivo, etc.; son efectivos y ejercen su acción por oxidación (p.ej. betadine, ibetane)
yodo), remitir las botellas de hemocultivos inoculadas inmediatamente; se recomienda 3 muestras de 10 ml (cada extracción para 2 botellas (aerobios y anaerobios) en 24 horas con intervalo de >1 hora (al menos 2 3 extracciones separadas 30 minutes en 24 horas) en sitios diferentes para dilucidar un posible contaminante de la piel; en niños es suficiente extraer 1 5 ml máximo cada extracción; pacientes con tubuladora intravenosa/ catéter, se toma en la vía mas abajo; se extrae lo mas limpio posible para no incluir bacterias saprofitas de la piel; los frascos se marcan con etiqueta del paciente, numero de cama y hora de extracción.
Recogida de LCR (el procesamiento inmediato/ urgente) => se recoge insertando un agua, de forma aséptica, en el espacio sub aracnoideo a nivel lumbar, se recoge en 3 4 tubos estériles con tapa de rosca (tubo 3º o 4º => recuento celular, 1º y 2º => microbiológicos y bioquímicos; si solo se llena 1 tubo => microbiologia retirara de forma aséptica la cantidad necesaria, el resto => citológicos y bioquímicos; el volumen de muestra es importante (10 ml) para la detección (p.ej.M.tuberculosis y C.neoformans); no se deben refrigerar (temperatura ambiente o estufa a 37º) excepto para estudios virales se pueden refrigerarse hasta 24 horas o congelarse a 70ºC si hay una mayor demora; la muestra bacteriana => turbio (meningococo dentro de leucocitos), virales => transparente;
Recogida de otros líquidos estériles la aspiración percutánea de liquido sinovial, pleural, pericárdico y peritoneal se hace de forma aséptica y se inyecta inmediatamente en un frasco o tubo esterilizadas (transporte anaerobio), antes, se expulsar las burbujas de aire de la jeringa; se puede añadir una pequeña cantidad de heparina para evitar la coagulacion.
Recogida de muestras del tracto respiratorio superior: Exudado faríngeo => se realiza mediante una torunda de algodón, dacrón o alginato de calcio frotando vigorosamente ambas áreas amigdalinas, la faringe posterior y las zonas de inflamación, ulceración, exudación o formación de capsulas; la lengua se oprime con un depresor para reducir al mínimo la contaminación del hisopo con secreciones bucales. Exudado nasal => se realiza introduciendo un hisopo profundamente en cada fosa nasal y rotando suavemente. Tractor respiratorio inferior el esputo es una muestra menos relevante por la posibilidad de la contaminación por saliva; una buena muestra => instruir debidamente al paciente para lograr una expectoración profunda (ayudarle con fisioterapia respiratoria/ clapping, hidratación o nebulización); pacientes con traquestomías => se recoge aspirando (en un frasco de Lukens); las secreciones bronquiales se recoge mediante broncoscopio, instilando una pequeña cantidad de SF estéril en el árbol bronquial (también puede estar contaminado por flora del tracto superior, aunque es mas relevante que esputo); una muestra mas profunda se recoge mediante broncoscopio con lavado bronco alveolar (BAL) para buscar Pneumocistis carinii y hongos; cepillado bronquial es una técnica mas agresiva en caso de neumonías por aspiración; muestras de bacterias anaerobias se recoge por una punción transtorácica, biopsia transbronquial y pulmonar abierta.
Recogida de heces (se procesa lo antes posible): Toma de muestras para coprocultivo se recoge con un escobillón que se introduce en un tubo estéril preparado con un medio de transporte adecuado (Cary y Blair) (tubo con una cuchara y liquido rojo/transparente; también se puede utilizar frasco de orina estéril; medio Cary y Blalir mantiene la viabilidad de los patógenos intestinales); basta con impregnar la torunda en las heces en la parte donde se observa sangre, moco o pus; Muestras para estudio parasitológico se recoge durante 3 días consecutivos, se guardan en la nevera en un recipientes cerrados para evitar la desecación (temperatura 3 5ºC); los huevos, las larvas y los quistes de protozoos permanecen viables varios días; la
cantidad de muestra es pequeña (1 cucharilla de café en un frasco con alcohol polivinilico /PVA 1:3); para investigar oxiuros (parásitos) se utiliza preparación con cita de celofán; se proporcionan al paciente 6 portaobjetos (se toma durante 6 días consecutivos) con cinta adhesiva transparente; se toma la muestra a primera hora de la mañana antes de lavarse; se aplica la cinta sobre los margenes del ano con una suave presión, se retira y se coloca de en el porta;
Recogida de orina el frasco estéril no debe abrirse antes de la recogida; las partes genitales se lava solo con agua; se recoge a primera hora de mañana para estudio microbiológico, de forma aséptica, se echa el primer chorro, se recoge la segunda mitad unos 20 30 ml. Sondaje vesical (puncion de sonda) y puncion suprapubica se realiza por el personal de enfermeria
Recogida de muestra de tracto genital se utiliza un tubo con escobillón de algodón como medio de transporte; exudado uretral => el hisopo se introduce 2 cm dentro de la uretra y se rota suavemente antes de retirarlo (muestras separadas para el cultivo de gonococos y clamidias o ureaplasmas => se utiliza 2 escobillones, 1º para estudio de gonococos 2º para clamidias o ureaplasmas); exudado cervical => se inserta un hisopo especial (como uretral) en el canal cervical y rotando lo y moviendo lo durante 30" antes de retirar; exudado vaginal => el hisopo se sumerge en el fornix posterior de la vagina; para aislamiento de gonococos pueden ser transportados en el medio de Stuart modificado o en el medio de Amies con carbón en temperatura ambiente, hasta su inoculación; para aislamiento de clamidias y micoplasmas, el medio es tampon con sacarosa y ATB; se puede refrigerar si hay demora en el proceso.
Procedimiento para muestras en anaerobiosis se obtiene mejor con una jeringa y aguja, a los que debe expulsarse todo el aire.
Transporte de muestras: Metodos convencionales => el mas utilizado es hisopos en tubos de plástico que llevan incorporados diversos medios de transporte que consiste en un agar semi solido, pH regulado, carece de nutrientes, pero contiene tioglicolato de sodio como reductor, para prolongar la viabilidad de los microorganismos cuando exista demora entre la recogida y su cultivo; los mas utilizados => (1) Medio de Stuart (los exudados faríngeos, conjuntivales, nasales y heridas) que mantiene un pH favorable e impide la deshidratación de las secreciones durante el transporte y la oxidación y autodestrucción enzimática de los patógenos presentes (2) Medio de Cary y Blair (muestras fecales) donde las salmonellas y las shigelas pueden recuperarse hasta 49 días después de la toma de muestras y Vibrio cholerae hasta 22 días después.
Transporte de muestras para estudio en anaerobiosis => cuando la muestra se va a procesar dentro de 30 minutos, puede servir como transporte una jeringa con una aguja insertada en un tapón de goma; si la demora va a ser mayor, se usa un tubo /frasco ampolla lleno de CO2 y libre de O2 con N2/ H2 con indicador en agar o caldo; la muestra liquido se inyecta a traves del tapón de goma después de expulsar el aire de la jeringa y aguja; existe también un hisopo en un tubo anaerobiosis
Envió de muestras (las medidas especiales para un envió por correo a un laboratorio de referencia): Muestras que contengan virus deben ser refrigeradas inmediatamente y enviarse en una caja con unidades comerciales refrigerantes La sangre no se envía entera, se separa el suero y se envía en un tubo estéril
permeasa)
Los gérmenes mas frecuentes que podemos encontrar (en orina se identifican especies): E. coli (el mas frecuente) => bacilo Gram , móvil, sensible a Colistina, lactosa (+), indol (+) Streptococcus faecalis => coco Gram+, catalasa ( ), oxidasa ( ). Proteus spp (todas) => bacilo móvil Gram , resistente a Colistina, lactosa ( ), oxidasa ( ), Triptófano Desaminasa/TDA (+), ureasa (+) tardío. Stafilococcus aureus => coco Gram+, catalasa (+), coagulasa (+), B hemolítico, oxidasa( ). Candidas spp (todas) => morfología de levaduras (parece como hematíes) Klebsiella spp => bacilo Gram , inmóvil, sensible a Colistina, ureasa (+), colonias mucosas, lactosa (+), tardío. Pseudomonas spp => bacilo Gram , móvil, sensible a Colistina, lactosa ( ), oxidasa (+)
- Coprocultivos (contenedor especifico para coprocultivo "Cary y Blair" / bote de orina; conservada a 4ºC, procurar procesarla en <24H; se siembran por agotamiento en cuadrantes).
[a] Hecktoen o SS => medios selectivos y diferenciales donde crecerán el genero Salmonella y Shigella; en Hecktoen las Salmonellas spp => colonias lactosas ( ), verdosas y pueden ser SH2/sulfihidrogeno/ acido sulfidrico (+) con fondo negro, son bacilos móviles, sensible a Colistina; las Shigellas spp => lactosas ( ) , SH2 ( ), bacilos inmóviles en fresco y sensibles a Colistina; las colonias lactosas (+) en este medio serán amarillas; en SS las Salmonellas y Shigella serán el del medio (caramelo) y también con el fondo negro (Salmonellas SH+ y lactosa ); colonias lactosa (+) => rojizas; las colonias lactosas+ no son patógenas (coliformes fecales) y no se investigan.
[b] Agar Yersinia CIN => para buscar colonias de Yersinia spp (rosa clarito Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis.) que aparece como lactosa (+), sensible a Colistina y bacilos Gram e móviles, fermentador de manitol. La inhibición selectiva de organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta (inhibidor de Gram+), desoxicolato sódico (inhibidor de Gam+) y los agentes antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina (inhibidor de S.epidermidis).
[c] Agar Campylosel => crecerá Campylobacter spp (bacilos Gram con flagelos) como colonias pequeñas translucidas, sensibles a Nalidixico (especies C. coli y C.jejuni) resistente a Nalidixico el C. fetus, en fresco aparecen en coma/en S, ureasa (+) oxidasa (+) catalasa (+); al hacer la prueba del hipurato C.jejuni seran (+) y C.coli ( ); P. hipurato => un procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de
hidrolizar enzimáticamente (hipuricasa) el hipurato sódico que da lugar a acido benzoico y glicina un compuesto de color morado.
[d] Caldo Selenito => caldo enriquecido para los géneros Salmonella y Shigella. el selenito de sodio inhibe la flora Gram+ y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella spp.
[e] Agar McConkey (solo en algunos protocolos) => los coliformes aparecerán como colonias rojas por ser lactosas (+); no es necesario???
[f] Agar TCBS /tiosulfato citrato bilis sacarosa (detectar Vibrio cholerae) => aparecen colonias de color amarillo sacarosa (+), oxidasa (+) y son bacilos Gram pleomórficos; el extracto de levadura y la peptona proporcionan el nitrógeno y las vitaminas. El citrato sódico, el tiosulfato sódico, la bilis de buey y un pH alcalino fuerte inhiben los organismos Gram+ y suprimir los coliformes (inhibidor para la mayoría de las entero bacterias), favoreciendo el crecimiento de Vibrio cholerae porque este organismo es sensible a los entornos ácidos. La alta concentración de sodio favorece el crecimiento de Vibrio cholerae que es halotolerante (tolera el medio salado) y de otras especies de Vibrio, cuya mayoría es halofílica. La sacarosa (+) es un carbohidrato fermentable, y el cloruro sódico estimula el crecimiento. El tiosulfato sódico es una fuente de azufre y actúa con el citrato férrico como indicador para detectar la producción de ácido sulfhídrico/SH2. El azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH. En Mc, Vibrio Cholerae es lactosa ( ).
- Exudados vaginal y uretral (la muestra llegara en uno o varios escobillones; se siembra por agotamiento en cuadrantes).
- Semen la muestra llegara en contenedor estéril/ bote de orina; se siembra por agotamiento en cuadrante en medios: Cled, McConkey , Agar Sangre, Agar chocolate, Thayer Martin o New York, Roiron, y cultivo de Clamydias, buscando en cada caso los mismos gérmenes que en el caso del exudado vaginal.
- Esputo la muestra ha de llegar en contenedor esteril y conservarse menos de 24H a 4ºC; antes de sembrar se observa por el microscopio si la muestra es valida/ no esta contaminada por saliva; se siembra por agotamiento en cuadrantes; solo se siembra cuando en el Gram, el cociente leucocitos/ celulas epiteliales sea > 2,5 (recuento en fresco/al microscopio); si es < a 1,5 es dudoso. Cuando sean muestras de UCI o provenientes de neumonías se siembran siempre.
[a] Agar Sangre => buscamos colonias de Streptococcus pneumoniae o Branhamella catharralis; S.pneumoniae >> colonias verdosas (alfa hemólisis) y al fresco como coco Gram+, catalasa ( ), sensible a la Optoquina; Branhamella catarralis >> colonias blanco grisáceas y al fresco como cocos Gram , oxidasa (+), catalasa (+) que no utiliza ningún azucar (no es fermentadora), pero reduce los nitratos a nitritos/ nitratasa+ (lo que le diferencia del genero Neisseria que ademas es fermentadora de glucosa y maltosa).
[b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias puntiformes translucidas, que al fresco como coco bacilos, Gram , catalasa y oxidasa variable; agar chocolate polyvitex (contiene factor V/ NAD y factor X /hemina procedente de la degradación de Hb)
[c] Agar McConkey => donde creceran Enterobacterias y otros bacilos Gram.
[d] Medio de Lowestein Jensen (o Coletsos) => para rescatar Mycobacterium tuberculosis, bacilos acido alcohol resistente (Zhiel Neelsen+) de crecimiento muy lento; los niveles bajos de la penicilina y el ácido nalidíxico también están presentes en el medio de LJ para inhibir el crecimiento de lo Gram+ y Gram , con el fin de limitar el crecimiento de especies de micobacterias solamente. Presencia de verde malaquita en el medio inhibe las floras mayoría acompañante; que se desinfecta y se solidifica mediante un proceso de espesamiento; el Glicerol mejora el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis.
[e] Medio Legionella => muestras de UCI; la Legionella pneumophila es bacilo Gram (en realidad, se tiñe muy mal, aerobio exigente, movil; en general, no fermenta ni oxida los azucares, sino que utiliza los aminoacidos; es hipurato+ => un procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimáticamente (hipuricasa) el hipurato sódico; necesita L cisteina para crecer y también iones férricos Fe. La inhibición del crecimiento de las bacterias Gram+, la mayoría de las bacterias Gram , levaduras y mohos, a través de una combinación optimizada de 3 antibióticos. Las
colonias que crecen en medio Agar Legionella y no crecen en medio AS deben considerarse, con alta probabilidad, colonias de Legionella.
- Cepillado bronquial (la muestra vendrá en el cepillo y se conservara a 4ºC < de 24H); se siembra en los mismos medios que en el caso anterior (esputo) añadiendo ademas: agar sangre anaerobios (ASA) o medio AKV (agar sangre kanamicina vancomicina), selectivo para bacilos Gram anaerobios y Bacteroides (bacilo Gram , anaerobio estricto).
- Exudado faringeo y oral (la muestra viene en torunda, se sembrara por agotamiento en cuadrante). [a] Agar sangre => crecera todo tipo de gérmenes (medio general enriquecido) [b] Agar chocolate => crecera todo tipo de gérmenes [c] Agar Mac Conkey => creceran las Enterobacterias y otros bacilos Gram poco exigentes. [d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para Gram+/ inhibe los Gram => para deteccion de Streptococcus B hemoliticos, Enterococcus y Staphylococcus?? [e] Agar Sabouraud (solo en orales) => deteccion de Candidas spp.
- Exudados varios abscesos heridas ... (se sembrara por agotamiento en cuadrantes. La muestra ha de llegar en tubo estéril y se conservara a 4ºC menos de 24H. [a] Agar sangre => crecerá todo tipo de gérmenes [b] Agar chocolate => idem [c] Agar Mac Conkey => crecerán las Entero bacterias y otros bacilos Gram ( ) poco exigentes. [d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para Gram+/ inhibidor Gram => crecerán bien los Steptococcus B hemolíticos. [e] Agar ANA (agar sangre anaerobios/ASA, aunque también puede utilizarse agar AKV, agar sangre kanamicina y vancomicina) => medios selectivos para bacilos Gram anaerobios (estrictos) y Bacteroides. [f] Caldo Tioglicolato => crecen bien todo tipo de bacterias aerobias o anaerobias; permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricional mente exigentes. Además, se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio.
