Determinación de vitamina C
La espectrofotometría indirecta sirve para la determinación de vitamina C en alimientos, un método
adecuado es el de 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH). Este métodose basa en dos reacciones:
Materiales:
Probeta
Vaso de pp de 100 y 250 ml
Embudo de cuello deslgado
Matraz de 150 ml
Papel filtro
Matraz volumetrico
Pipetas
Tubos de ensaye
Reactivos:
Espectrofotometro
Centrifuga
Procedimiento:
El ácido ascórbico se oxida al ácido dehidroascórbico por la acción de soluciónde bromo
El ácido L-dehidroascórbico reacciona con DNPH y produce una osazona queen tratamiento con
85% ácido sulfúrico forma una disolución coloreada roja. Lacoloración de DNPH depende de la
concentración de AA añadida.
Se determinan las absorbancias de los distintos patrones y de la muestraproblema a 521 nm. Con
dichas absorbancias se construye una recta de calibrado. Estarecta de calibrado cumple la ley de
Lambert-Beer (A=Ɛ·b·c).
Conociendo la absorbancia de la muestra problema, se puede calcular la concentración de
osazona que es proporcional a la concentración de ácido ascórbico
Preparar los estandares de trabajo tomando alicuotas de 0.1,0.3,0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5 y 4 ml de acido
ascorbico al 0.1% y llevar a volumenes de 50 ml con una solucion de acido oxalico al 0.4% .Estas
soluciones enumeradas contendran 5 mg de acido ascorbico por 100 ml respectivamente .
En 20 tubos de ensaye se coloca cada una de la muestra y se agrega 1 ml del contenido de la
mezcla primera y 1 ml de acido oxalico como agua destilada
Se debe realizar una solucion blaco para el analisis
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