¡Descarga problemes egenetica y más Ejercicios en PDF de Biología solo en Docsity!
PROBLEMA 1
A un estudiant en pràctiques a l'empresa Cloningtech li encarreguen fer una digestió d'un DNA plasmídic, electroforesi, transferència Southern i hibridació amb una sonda determinada. A més a més, li donen una còpia d'una autoradiografia anterior del mateix experiment ( control), per que comprovi si li surt bé l'experiment. Però no hi ha manera!, no és capaç de reproduir el resultat del control, i això que repeteix l'experiment 10 vegades (exp1 a exp10). Les seves autoradiografies sempre són del tipus a , b , c o d.
Repassant la llibreta, se n'adona que en cadascun dels deu experiments s'ha oblidat de fer alguna cosa, però se li desordenen les autoradiografies, i no sap quina correspon a cada experiment. El pots ajudar??? Indica quin tipus de resultat s’obté en cada cas.
Exp Què s'oblida Què li surt? (encercleu a, b, c, d) 1 afegir el DNA a la digestió a b c d 2 afegir l'enzim de restricció Qualsevol de les dues a b c d 3 connectar l'electroforesi a b c d 4 tractar el gel amb àlcali abans del Southern a b c d 5 tractar el filtre amb llum UV o calor després del Southern
a b c d
6 prehibridar el filtre a b c d 7 connectar la temperatura del bany d'hibridació a b c d 8 desnaturalitzar la sona a b c d 9 afegir la sonda a la hibridació a b c d 10 tancar el cassette d'autoradiografia a b c d (10 correctes: 1 punt; 9 correctes: 0.8 punts; 8 correctes: 0.6 punts; 7 correctes: 0.4 punts; 6 correctes: 0,2 punts; 0-5 correctes: 0 punts)
b) Desprès de l'èxit, l'estudiant se'n va a fer la Tesi a la Universitat d'Auckland, on s'incorpora a un grup de recerca que està intentant obtenir cangurs que no puguin saltar. Li fan fer un western a partir de múscul de diferents cangurs transgènics, que immunodetecta amb un anticòs policlonal anti-jumpiosina, proteïna de 40kDa involucrada en l'elasticitat muscular. Els cangurs transgènics incorporen les següents mutacions en el gen de la jumpiosina
cangur a) mutació puntual (canvi d'aminoàcid) en el centre actiu de la jumpiosina cangur b) deleció de l’"enhancer" específic de muscle del gen cangur c) deleció d´un nucleòtid en la regió codificant, que provoca l'aparició prematura d'un codó stop cangur d) inserció d'un fragment de DNA que codifica per un domini determinat, en la mateixa pauta de lectura de la jumpiosina cangur e) cangur normal (control)
Malauradament, en centrifugar el tubs amb les mostres, li salten les etiquetes. Així i tot, decideix fer el Western, i identificar cadascun dels carrils a partir del resultat. L’ajudes?
Cangur carril (encercla el carril correcte) a 1 2 3 4 5 b 1 2 3 4 5 c 1 2 3 4 5 d 1 2 3 4 5 e 1 2 3 4 5 (10 correctes: 0.5 punts; 4 correctes: 0.3 punts; 3 correctes: 0.1 punts; 0-2 correctes: 0 punts)
En el cas de dos nombres encerclats, qualsevol dels dos és correcte.
- Quina tècnica utilitzaràs per detectar la mida de la proteïna? a) immunodetecció sobre una transferència western amb un anticòs específic b) hibridació sobre una transferència northern amb una sonda adequada c) hibridació sobre una transferència de Southern amb una sonda adequada sense digerir del DNA genòmic. d) hibridació sobre una transferència de Southern amb una sonda adequada prèvia digestió del DNA genòmic amb un enzim de restricció.
C) Després de decidir quina tècnica utilitzaràs en cada cas les realitzes al laboratori del mòdul experimental marcià i compares la mida del fragment de DNA genòmic que porta el gen en qüestió (digerit amb HindIII), de l’RNA missatger i de la proteïna en el cérvol marcià, en un cérvol terrestre control i en una fulla de menta. El resultat que obtens és el següent:
- La diferència en el nombre de bandes observada a la hibridació de la transferència de Southern és deguda a: a) Diferències en el nombre de dianes HindIII b) Aparició d’un codó STOP dins el gen que codifica la MENTOÏNA c) Diferències en la localització del senyal de “fi de transcripció”.
- La diferència de mides observada a la hibridació de la transferència northen és deguda a: a) Diferències en la localització del senyal de “fi de transcripció” b) Diferències en la posició de les dianes de restricció que flanquegen el gen que codifica la MENTOÏNA c) Diferències en la posició del codó STOP
- La mutació en el gen de la MENTOÏNA del cèrvol marcià és: a) L’aparició prematura d’un senyal de “fi de transcripció” en una posició molt propera a la de la MENTOÏNA de la menta. b) L’aparició prematura d’un codó STOP en una posició molt propera a la de la MENTOÏNA de la menta. AQUESTA RESPOSTA QUEDA IMPLÍCITA EN L’ANTERIOR c) L’aparició prematura d’una diana de restricció en una posició molt propera a la de la MENTOÏNA de la menta.
cérvol marcià menta
Hibridació d'una transferència de Southern
1 kb
2 kb
3 kb
4 kb
5 kb
6 kb
Hibridació d'una transferencia (^) northern
1 kb
2 kb
3 kb
4 kb
5 kb
6 kb
Immunodetecció d'una transferància (^) western
5 kDa
7 kDa
10 kDa
15 kDa
22 kDa
35 kDa
cérvol terrestre
cérvol marcià menta
cérvol terrestre
cérvol marcià menta
cérvol terrestre
PROBLEMA 3
En un estudi de mercat es detecta la presència de dues classes de nectarines: les anomenades nectarines tradicionals , de gust dolç, i les pirates , insípides. Se sap que les nectarines tradicionals tenen el gen Dulcinea localitzat al cromosoma 10, i que el seu producte gènic és qui els confereix el gust dolç i aromàtic. També se sap que les nectarines pirata presenten una translocació recíproca d’un fragment dels cromosomes 10 i 15. Aquesta translocació inclou la zona codificant de Dulcinea. Malauradament, els arbres productors de nectarines tradicionals donen molts menys fruits que els productors de nectarines pirata, que lògicament són molt més barates però de menys qualitat. En concret, una empresa distribuïdora de nectarines anomenada GOLOSO et contracta perquè analitzis les nectarines pirata i les comparis amb les tradicionals , per evitar que cap agricultor o intermediari els estafi, i puguin patentar la marca de nectarina “Dulcinea del GOLOSO”.
1) Quina tècnica o tècniques aplicaries per posar en evidència si les nectarines procedents d’un productor determinat són tradicionals o pirata? Per fer-ho disposes d’una sonda convenientment marcada de la regió codificant del gen Dulcinea. A més, també saps que el gen Dulcinea s’expressa a totes dues varietats de nectarines. Marca amb una X la tècnica o les tècniques escollides, a la columna de l’experiment 1 (EXP 1) de la següent taula. Només pots fer servir les eines i les dades exposades fins ara.
Tècniques d’elecció EXP 1 EXP 2 EXP 3 Dot Blot i hibridació Transferència de Southern i hibridació Transferència northern i hibridació XXX FISH sobre cromosomes (^) XXX Transferència western i immunodetecció XXX Immunodetecció sobre seccions histològiques XXX Seqüenciació de DNA Hibridació in situ
2) Sospites que la diferencia d’aroma rau en l’expressió del gen Dulcinea. Quina tècnica o tècniques utilitzaries per posar en evidència l’expressió diferencial d’aquest gen i la mida dels tràscrit? Disposes de la mateixa sonda convenientment marcada. Marca amb una X la tècnica o les tècniques escollides a la taula anterior, a la columna de l’experiment 2 (EXP 2). Només pots fer servir les eines i les dades exposades fins ara.
3) I si disposessis d’un anticòs específic per a la proteïna DULCINEA? Quina tècnica o tècniques podries fer servir per posar en evidència la presència del seu producte gènic? Marca amb una X la tècnica o les tècniques escollides a la taula anterior, a la columna de l’experiment 3 (EXP 3).
