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Esta práctica consistió en la separación y determinación de las macromoléculas, se utilizó la levadura seca con arena para determinar por medio de pruebas como el de Lugol que se utilizó para determinar el glucógeno; el método de Bial utilizado para analizar ácidos nucleicos y la prueba de Biuret que se usó para establecer las proteínas.
Tipo: Monografías, Ensayos
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Daniela Medina Melo, Karen Melissa Urrutia Fernández, Lina Isabel Lombo Pastrana, Santiago Chara Chávez. Práctica No I. Universidad Santiago de Cali Enviado octubre 16 del 2021 Resumen Esta práctica consistió en la separación y determinación de las macromoléculas, se utilizó la levadura seca con arena para determinar por medio de pruebas como el de Lugol que se utilizó para determinar el glucógeno; el método de Bial utilizado para analizar ácidos nucleicos y la prueba de Biuret que se usó para establecer las proteínas. Palabras clave : Macromoléculas, determinación, método, glucógeno, acido nucleicos, proteínas. Abstract This practice consisted of the separation and determination of the macromolecules, the dry yeast with sand was used to determine by means of tests such as Lugol's that was used to determine glycogen; the Bial method used to analyze nucleic acids and the Biuret test used to establish proteins. Keywords: macromolecules, determination, method, glycogen, nucleic acid, proteins Introducción Una macromolécula es s on moléculas de enorme tamaño, es decir, que están compuestas por miles o cientos de miles de átomos. Pueden ser de naturaleza biológica, resultado de los procesos que ocurren en los organismos; ejemplos de estas macromoléculas son proteína, acido nucleicos (ADN y ARN), glucógenos, entre otros. El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales, actúa como regulador de la glucosa sanguínea, almacenándola como glucógeno durante una buena alimentación (gluconeogénesis) y liberándola por fosforolisis durante el ayuno, ya que en esta situación no hay absorción intestinal. Una de las pruebas que se utiliza para determinar el glucógeno es el Lugol, que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración azul-violeta intensa y el glucógeno y dextrinas por la formación de coloración roja. Los ácidos nucleicos constituyen el material genético de los organismos y son necesarios para el almacenamiento y la expresión de la información genética. Existen dos tipos de ácidos nucleicos química y estructuralmente distintos: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (ARN); ambos se encuentran en todas las células procariotas, eucariotas y virus. La prueba que se utiliza para analizar los ácidos nucleicos es la prueba de Bial, consiste en detectar la presencia de pentosas está compuesto por orcinol, ácido clorhídrico y cloruro férrico. Si una pentosa está presente, se deshidratará para formar furfural que reaccionará con el orcinol para general un compuesto coloreado. Las proteínas esta formadas por cadenas de aminoácidos, cumplen distintas funciones de enzima, anticuerpo, mensajera, estructural, transporte y almacenamiento La prueba utilizada para determinación de proteínas son la de Biuret; consiste en detectar la presencia de enlaces peptídicos. En presencia de péptidos, un ion cobre (II) forma complejos de coordinación de color malva en una solución alcalina. También se utiliza para detectar proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos.
Parte experimental En un mortero se agregó una cucharadita de la levadura utilizada y otra cucharadita de arena lavada y seca con el propósito de facilitar la trituración de la primera en el mortero. Hecho esto durante cinco minutos se transfirió la mezcla a un vaso de precipitados donde se agregó ácido tricloroacético al 5% y se dejó reposar la solución por tres minutos. Transcurrido este lapso se observó la precipitación de la arena al fondo del vaso y la formación de una suspensión de color blancuzco, la cual se transfirió cuidadosamente con un gotero a un vial y se procedió a centrifugar a 3000 rpm por un periodo de cinco minutos. Terminada la centrifugación se observaron dos fases formadas: una sólida precipitada al fondo del vial, y una líquida. La fase líquida se transfirió cuidadosamente con un gotero a un tubo de ensayo y la fase solida se dejó en el vial y se llevó a un baño de hielo. Posteriormente, se tomó 1 mL de la fase líquida a la cual se le adicionaron 2 mL de etanol, se agitó y reposó en baño de hielo. Después, la solución obtenida se transfirió un vial y se llevó nuevamente a centrifuga a 3000 rpm por tres minutos, donde el sobrenadante final se descartó el precipitado formado se disolvió en 3 mL de agua destilada. De esta solución se tomaron 4 gotas con un gotero, las cuales fueron ubicadas cuidadosamente sobre un vidrio reloj y se agregaron dos gotas del reactivo de Lugol. A la fase sólida obtenida en la primera centrifugación se agregaron 15 mL de NaCl 10% bajo agitación cuidadosa. Esta solución fue luego transferida a un tubo de ensayo bajo un baño de agua hirviendo por un lapso de diez minutos. Una vez enfriado se trasvasó a un vial y se centrifugó a 3000 rpm durante tres minutos donde, finalizada la centrifugación, se obtuvieron dos fases: una líquida y una sólida. Igual que cuando se finalizó la primera centrifugación, la fase líquida se transfirió cuidadosamente con un gotero a un tubo de ensayo y la fase solida se dejó en el vial y se llevó a un baño de hielo. De la fase líquida se tomó 1 mL y se le adicionaron 2 mL de etanol frío lentamente y bajo agitación constante en un baño de hielo para dejar reposar durante tres minutos, observándose una precipitación. Toda la solución fue transferida a un vial y se sometió a centrifugación a 3000 rpm por tres minutos donde se descartó la fase líquida, y la fase sólida se disolvió en 1 mL del amortiguador salino preparado. La solución formada se somete a la prueba del método de Bial. Finalmente, la fase sólida obtenida de la tercera centrifugación es diluida en 2 mL de NaCl 0.15 M y se le realizó la prueba de Biuret. Resultados La primera parte del laboratorio se comenzó con el procesamiento del precipitado de levadura la cual se realizó con levadura y arena después de triturar la mezcla se llevó a una suspensión lechosa y la centrifugadora donde después de un centrifugación de 3000 RPM durante 5 minutos se obtuvo el sobrante, Para obtener el glucógeno se precipitó. La precipitación se logró por medio de la adición de dos volúmenes de alcohol etílico al 96%, una exposición a bajas temperaturas y finalmente la centrifugación. La prueba con reactivo de Lugol y la solución obtenida por la dilución en fase sólida de la segunda centrifugación contenían glucógeno, lo que provocó que el reactivo de Lugol cambiara su color marrón original a azul oscuro y denso. Por el contrario, cuando se agrega el reactivo de Lugol al agua destilada, mantiene su color marrón y consistencia líquida. Para verificar que el precipitado obtenido es glucógeno, se realizó una prueba de yodo o reactivo de Lugol como se describe en el apartado de metodología. La prueba es positiva porque la precipitada muestra un cambio de color, al igual que el almidón, pero con una tonalidad diferente, y el color blanco no se ve afectado de ninguna manera.
fuertes, dieron un color purpura oscuro mientras que el color blanco se mantuvo. Conclusiones La determinación cualitativa evidente por coloración es de gran ayuda para observar los diferentes tipos y comportamientos de macromoléculas tan importantes para los seres vivos Es importante tener la recomendación de relazar una buena maceración de la muestra, debido a que si no se realiza con vigor no se podrá obtener una buena primera separación de dichos analitos a estudiar. Se adquirió conocimiento sobre extracción, identificación y separación de las macromoléculas de una célula eucariota. Las separaciones por métodos físicos y químicos de las macromoléculas de una célula fueros efectivas, ya que se logró obtener buenos resultados al momento de identificar cada una de las macromoléculas. Bibliografía