Identificação bactérias (provas bíoquimicas), Slides de Microbiologia

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Módulo 6: Cultura & Identificação

Organismos Gram Positivos & Gram

Negativos

Tec: Marcelino Pita Daniel

Fonte: ASM

Objectivos de aprendizagem (1)

No final desta sessão os participantes deverão ser capazes de: Reconhecer potenciais patógenos por tipo de amostra Reconhecer flora normal e outros não patógenos por tipo de amostra Reconhecer contaminação da placa Escolher colónias para testagem adicional (isolamento, identificação e sensibilidade)

Conteúdo

 Cocos Gram Positivos  Streptococci  Staphylococci  Cocos Gram Negativos  Neisseria  Moraxella  Bacilos Gram Positivos  Bacillus species  Lactobacilllus species  Corynebacterium species  Listeria  Bacilos Gram Negativos  Enterobacteriaceae

• E. coli. Klebsiella pneumoniae
• Serratia, Proteus
• Salmonella, Shigella  Pseudomonas  Acinetobacter  Vibrio  Campylobacter  Haemophilus  Brucella  Pasteurella

Examinar colónias para:  TAMANHO – em mm ou indicar pequeno, médio, grande  TRANSPARÊNCIA – claro ou opaco  HEMÓLISE – alfa, beta ou sem  FORMA – circular, convexa, concava  COR A morfologia das colónias é muito útil para iniciar a identificação do isolado. Em geral, usar o crescimento na placa de agar sangue para descrever a morfologia Colónias no agar sangue (AS)

Identificação

 Com base na morfologia das colónias e no Gram, o passo a seguir é realizar os testes bioquímicos de identificação apropriados  Garantir que usa uma “cultura pura” ao realizar os testes  Se é possível obter inóculo suficiente para testes a partir do meio primário, realizar os testes de identificação usando colónias bem isoladas  Se o inóculo no meio primário não é suficiente, fazer uma subcultura (i.e., culturas contendo uma estirpe de uma única espécie)

Preparação de subculturas Usando uma ansa estéril, transferir uma porção de uma colónia isolada para um meio de cultura adequado (ex.: AS) Estriar o inoculo em 4 quadrantes; flambar a ansa de inoculação entre as estrias em cada área na superfície do agar para garantir que serão obtidas colonias individuais Incubar placas nas condições apropriadas para o organismo

Organismos Gram Positivos

Organismos Gram positivos

Cocos Gram positivos

 Streptococcus – maioria em pares ou cadeias  Staphylococcus – maioria em cachos

Bacilos Gram positivos

 Lactobacillus – forma e tamanho regulares  Bacillus – forma e tamanho regulares – pode conter esporos  Corynebacterium – irregular

Negativo Streptococcus sp Catalase Positivo Staphylococcus sp Coagulase Positivo Staphylococcus aureus Negativo Staph coag neg *

• Pode ser necessária identificação aprofundada se cultura pura de locais estéreis, feridas ou urina

Identificação de cocos Gram positivos

O teste de catalase pode também ser feito numa lamina. Remover a colónia, colocar numa gota de H 2 O 2 e observar as bolhas. Ser cuidadoso ao usar placas de agar sangue, os eritrócitos contêm catalases Cocos Gram positivos – Teste de Catalase (2) Negativo Positivo

Coagulase em tubo: Testa a produção de coagulase livre, uma enzima que coagula o plasma Plasma Coágulo de fibrina Coagulase Coagulase em lamina: teste rápido para a presença de coagulase ligada. Se a coagulase em lamina for negative, fazer a coagulase em tubo

Teste de Coagulase

Negativo Positivo Negativo Positivo

 Streptococcus pyogenes  Streptococcus agalactiae  Streptococcus pneumoniae  Streptococcus Grupo Viridans  Enterococcus sp. Outros Streptococcus podem causar doença, mas não são tao comuns como os listado acima

Streptococcus de importância médica

Lise de eritrócitos causada por enzimas

bacterianas especificas

Alfa Lise parcial dos eritrócitos Descoloração verde do agar ao redor das colonias Beta Lise complete dos eritrócitos Remoção do agar ao redor das colónias (Gama) Sem lise dos eritrócitos Sem alteração do agar ao redor das colónias

Reacções hemolíticas no AS