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Relatório de Laboratório da disciplina de Enzimologia Industrial
Tipologia: Trabalhos
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As reações enzimáticas são importantes, principalmente em alimentos, podendo ser tanto benéficas, quanto prejudiciais. O amaciamento da carne, promovido pela enzima bromelina do abacaxi, e o aroma da cebola, proporcionado pela alinase, são bons exemplos de efeitos interessantes dessas macromoléculas. A mesma coisa não pode ser dita quando tratamos do escurecimento de frutas como banana ou maçã, quando expostas ao ar. Esse escurecimento enzimático é causado pela polifenoloxidase e também pode ser observado na batata e outros vegetais de cor clara. As enzimas catálise e peroxidase também são exemplos de enzimas de grande interesse na área de alimentos. Elas ocorrem em plantas, animais e microrganismos. Nos animais e vegetais, acredita-se que a função delas é proteger os tecidos contra os efeitos tóxicos da água oxigenada (H2O2) formada durante o metabolismo celular, uma vez que aceleram a decomposição dessa substância em H2O e O2. A diferença entre elas está no mecanismo de ação. Enquanto a catálise reduz diretamente a água oxigenada, a água e o gás oxigênio, a peroxidase o faz acelerando a reação da água oxigenada com um substrato específico, por exemplo, o guaiacol, formando um composto marrom escuro. MATERIAL UTILIZADO. Nabo Raldor de legumes e faca Gral ou almofariz com pestilo Centrifuga
Tubo de ensaio (diluição do extrato) Micropipetas Expectrofotômetro REAGENTES UTILIZADOS. Solução Tampão fosfato de sódio 50mmol.L-¹ com pH 7, Guaiacol 1% Peróxido de hidrogênio 6% PROCEDIMENTO. Obtenção do estrato enzimático Em um gral coloque 10g de nabo ralado e acrescente aos poucos 30mL de solução tampão fosfato de sódio 50mmoL -¹ com pH 7,0, triturando com auxilio de um pestilo, até que todo o volume da solução tampão seja adicionado. Deixe em repouso por 20 minutos, filtre em gaze e centrifugue, obtendo-se assim o extrato enzimático que será utilizado para a determinação da unidade de atividade da peroxidase de nabo. O filtrado foi colocado em um frasco e armazenado na geladeira por um dia. PARTE II Determinação da unidade de atividade dada em (U/mL) do extrato enzimático. Foi diluído em um tubo de ensaio o extrato enzimático na proporção de 1:10. Assim foi colocado 100uL do extrato em 400uL da solução tampão, obtendo-se a amostra diluída 10 vezes.
Gráfico Conclusão Os dados mostraram que o extrato de nabo quando esta sob ação de alguns reagentes permanecem sem o escurecimento. Observou-se um aumento considerável de atividade da enzima peroxidase nos nabos tratadas com esse extrato, indicando que esse efeito seja o responsável pela redução do escurecimento nesse legume. Entretanto, houve aumento da atividade da enzima polifenoloxidase durante o armazenamento em todos os tratamentos.